Способ получения -лизина и -гомосерина

О "А"Н- И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических РеспубликК ПАТЕНТУ ависимыи от патента7111.1968 ( 1267545/28-1 Кл. 6 Ь, 16/03ЧПК С 126 13/О аявл Приоритет 12.1 Х.1967,58130/67, Япония Опубликовано 28.1 Х.1970, Бюллетень3 Дата опубликования описания 17.ХП.197 Комитет по деламзобретений и аткрытипри Совете Министров ДК 576.809.32+547.46 (088,8) Авторыизобретеки Иностранцы(Япония) Иностранная фирма Хакко Когио Компани Латсунобу Тан цуиоси Оки заявите Киова итед ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-ЛИЗИНА и 1-ГОМОСЕРИНА упеЬас 1 егшп 1 1 тудгосальтрафиолетовым об ся к микро и касается мосерина из ооретение относи промышленности ия /-лизина и /-г изина нием услов жаще кероси ники штам,вкаота и 10 естного споа также обнокислотная1 Настоящее избиологическойспособа полученуглеводородов.Известен способ получения /-лгих аминокислот культивировамов - продуцентов в аэробкыхводной питательной среде, содеводороды, например н.парафины,честве источника углерода, источминеральные соединения.Однако при осуществлении изсоба выход аминокислот низкийразуется довольно сложная ахсмесь,Предложен способ, позвсляющий с достаточно высоким выходом получать смесь двух важных продуктов: /-лизина, являющегося незаменимой аминокислотой, и 1-томосерина, 20 представляющего собой промежуточный продукт обмена при биосиктезе основных аминокислот 1-треонина н 1-метионина. Предложенный спосоо характеризуется использованием мутаппого штамма СогупеЬас 1 егшгп пупгосаг Ьосаьшз 2438-иАТСС 21267, способного развиваться на средах, содержащих в качестве источнлка углерода углеводороды, и продуцировать при этом значительные количества /-лизина и /-гомосерина. Мутантный штамм ЗО получен из 1 цтамма СотЬос 1 азпв АТСС 15592лучением.Согласно изобретению и "пользуют такие уг. леводороды, как парафины с нормальной и разветвленной цепью, имеющие от 10 до 45 атомов углерода в молекуле, а именно и-декан, я-додекан, и-гексадекан и т, д.; газооб. разные углеводороды: метан, этан, пропан и т. д. и углеводородные смеси: керосин, легкие и тяжелые масла, парафиновые масла и т. д. Предпочтительнее применять н-парафины Стт - Сто, Наряду с углеводородом в среду можно добавлять небольшие количества других источников углерода, таких как сахара, например глюкозу, фруктозу, мальтозу, сахарсзу, крахмал, гидролизат крахмала, мелассу и т. д.; спирты: глицерин, маннит, сорбит; органические кислоты и т. д.В качестве источника азота можно использовать различные виды неорганических и органических солей и соединекий, например мочевину илп соли аммония, акие как хлорид сульфат, нитрат и фосфат аммония, или натуральные вещества, содержащие азот, а именно дрожжевой экстракт, мясной экстракт, ,рыбную муку, пептон, бульон, гидролизаты ка. зеина, растворимые рыбные составляющие рисовый экстракт с отрубями, сосвьш мучной гкдролизат и т, д.283056 Количествополученного1-гомосерина,мг/л Продол- жительность (днн) Количествополученного1-лизина, мг/л рН 10 4,7 6,2 6,8 7,2 2,4 3,0 Составитель Г. ГолеваТехред А. А. Камышникова Редактор А. Б. Бер Корректор Г. С. Мухина Заказ 3508/11 Тираж 480 ПодписноеЦ 1 ИИПИ Комитета по делам изобретении и открытий при Совете Министров СССРМосква, К, Раушская наб., д, 4/5 пр, Сапунова, 2 Типография,Неор 1 апические соединения, которые можно дооавлять к питательной среде, включают сульфат магния, фосфат натрия, первичный кислый фосфорнокислый калий, вторичный кислый фосфорнокислый калий, сульфат железа и другие соли железа, хлористь;й марганец, хлористый кальций и т. д,Вещества, способствующие росту, та сже можно использовать и добавлять к среде в соответствующих количествах. Примерами таких веществ являются витамины, например биотин, тиамин, кобаламин.В случае применения искусственной среды следует добавлять такое органическое соединение, как тиамин или треонин е количествах, необходимых для роста микроорганизмов, благодаря чему становит.я возможным накапливание 1-гомозерина и 1-лизина по существу в таких же количествах, как и в том случае, когда использованы натуральные источ. ники азста.Ферментацию проводят в аэробных условиях при 25 - 50 С, предпочтительно при 28 - 37 С. Во время выращивания рН питательного раствора поддерживают на нейтральном уровне (значение рН о.,оло 7) . Для этого в качестве нейтрализующего агента используют аммиак, гидроокись натрия или углекислый аммоний, В основном выращивание осуществляют от двух до четырех дней.После окончания ферментации культуральную жидкость отделяют от клеток микроорганизмов, и из жидкой фезы выделяют /-гомосерин и /-лизин обработкой ионнообменной смолой, осаждением солями металлов, адсорбционной хроматографией и т. п.П р имер 1. Штамм СогупеЬас 1 ег 1 цгп Ьус 1 госагЬос 1 азцз 2438-цАТСС 21267, нуждающийся в треонине, используют в качестве посевного штамма после выращивания на косом агаре при 28 С в течение 24 час. Штамм выращивают во встряхиваемых колбах в аэроб. ных условиях на дрожжевой среде в течение 24 час для того, чтобы получить посевную культуру.Затем готовят ферментационную среду следующего состава: 0,2% КН.РО 4; 0,1% МфО, 7 НвО; 0,001% ГеЯ 04 7 НгО; 1% КН 41 чОа;0,5% МХ-амин (гидролизат казеина); 0,2% КавНРО,; 0,005% Мц 50, 4 НвО; 0,001% Хп 504 7 Н.О; 1 л 1 г/л тиамина; 5% и-парафиновой смеси С, - С.; рН среды 7.После стерилизации среды в нее добавляют 2% СаСо который стерилизовали отдельно сухим теплом. Затем на среду высевают 5% посевного штамма,Выращивание осуществляют в аэробных условиях во встряхиваемых колбах при 38 С 15 20 25 30 35 40 45 50 55 в течение четырех дней, рН культурального раствора во время выращивания поддерживают на нейтральном уровне посредством аммиачной воды.Результаты выращивания приведены в таб лице. После завершения выращивания микробиологические клетки удаляют фильтрацией. Фильтрат пропускают через колонну, содержащую сильнокислую катионообменную смолу В 1 а 1 оп 5 Кв аммиачной форме1-Гомосерин проходит через колонку, по существу не адсорбируясь, а 1-лизин адсорби. руется.Чтобы адсорбировать /-гомосерин, жид. кость, выходящую с первой колонки, подкисляют до рН 2,2 и пропускают через вторую колонку. Две колонки со смолой промывают водой и затем элюируют 21 ч аммиачной водой. Далее положительные нингидриновые фракции собирают и кочцентрируют при температуре ниже 40 С при пониженном давлении. Концентрат обесцвечивают костяной чернью и обрабатывают этанолом. Получают 2,4 г неочищенных кристаллов 1-лизина и 5,2 неочищенных кристаллов /-гомосерина,П р и м ер 2. Выращивание проводят по примеру 1, за исключением того, что вместо 0,5 МХ-амина используют 0,5% дрожжевого экстракта. В результате получают б,5 мг/мл /-гомосерина и 3,2 мг/мл /-лизина.П р и м е р 3, Выращивание ведут по при меру 1, за исключением того, что вместо 5% н-парафиновой смеси употребляют 5% керосина. В результате получают 3,7 мг/мл 1-гомосерина и 1,7 мг/лл 1-лизина.Пр едмет изобретенияСпособ получения /-лизина и /-гомосеринз культивированием штаммов-продуцентов в аэробных условиях на водной питательной среде, содержащей углеводороды, например н-парафины, керосин, в качестве источника углерода, источники азота и неорганические соединения, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода продуктов, используют мутантный штамм СогупеЬасег 1 цгп ЬудгосагЬос 1 аз 1 цз 2438-цАТСС 212 б 7, полученный из штамма СогупеЬас 1 ег 1 цгп ЬудгосагЬос 1 аз 1 цз АТСС 15592 ультрафиолетовым оолучением,