Способ последовательного выделения липидов,

О Л И С А Н И Е 274059ИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советскид Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельства М ба, 22(05 Заявлено 23,1 Ч,1 ЛЪ 1323415/28-1 с присоединением заявки ЛеПриоритетОпубликовано 24.Ч 1.19 О. Бюллетень М 2Дата опубликования описания 14,1 Х,1970 Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРАвторыизобретения С, В. Рогожин, Д. Г, Вальковский и А. М, Ма нститут элементоорганических соединений АН явител НИЯ ЛИПИДОВ,ИЗ КЛЕТОК ПОСОБ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОГО ВЫДЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ И БЕЛКО МИКРООРГАНИЗМОВ2 Изобретение относится к технической биохимии и микробиологии и касается выделения полимерных веществ, а именно ли индов, нуклеиновых кислот и белков из клеток микроорганизмов.Микробиологическая клетка состоит из четырех основных групп веществ: лнпидов, белков, нуклеиновых кислот и полисахаридов. Две из этих групп по своему химическому составу представляют большую ценность как основа для создания искусственной пищи: белки в виде различных пищевых форм (искусственная икра, искусственное мясо, крупы) и нуклеиновые кислоты после их ферментативного гидролиза до 5-мононуклеотидов в качестве пищевых добавок - интенсификаторов вкуса и запаха.Известны способы извлечения отдельных компонентов клеток микроорганизмов, например нуклеиновых кислот, экстракцией солевыми растворами и белка экстракцией раствором щелочи, Но эти методы не предусматривают комплексной обработки микробиологического материала так, чтобы каждая группа веществ извлекалась с максимальным выходом и в наиболее чистом виде.По предлагаемому способу микроорганизмы подвергают полному обезжириванию с одновременной дезинтеграцией клеточных оболочек в среде органического растворителя в кавитационной мельнице. Из органического слоя выделяют липиды. После полного удаления органического растворителя из микробиологического дезинтегрированного материала, на пример сушкой при 60 - 65 С, из него экстрагируют нуклеиновые кислоты растворами солеи, например 10 й-ным раствором ХаС 1, а из оставшейся пасты извлекают белок, например, экстракцией 0,2 и. раствором МаОН.О Предлагаемый способ позволяет разделитьхимические вещества микробиологической клетки на четыре основные группы: жировые вещества, белки, нуклепновые кислоты и полпсахарпдный остаток. Кроме того, дезинте грация материала в кавитационной мельницезначительно облегчает ьыделенпе отдельных веществ из клетки и позволяет получить ценное пищевое сырье в чпс-ом виде.П р и и е р. 6,5 г дезинтегрированного обез- О жнренного порошка клеток Сапд 1 да 1 гор 1 са 1 э,выращенных на н-алканах, кипятят 1,5 чис в 50,цл 10%-ного раствора ХаС 1. После этого суспензшо охлаждают до 40 С и подщелачивают до рН 9,5 10%-ным раствором ХаОН.5 Суспензию выдерживают 3 час, продолжаяохлаждение до комнатной температуры, после чего осадок отделяют на центрифуге и из него выделяют белок 0,2 н. раствором ХаОН.Прозрачный супернатант - экстракт нуклеи- О новых кислот - доводят до рН 2,0 концентри274059 Редактор О. Кузнецова Составитель Г. Голева Корректор В, Г. Трутнев Заказ 2562/4 Тиранс 480 ПодписноеЦПИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прп Совете Министров СССРМосква, М(-35, Раушская наб., д 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 рованной соляной кислотой. Выпавшему осадку нуклеиновых кислот дают созревать не менее 8 час в холодильнике, после чего его отделяют на центрифуге, промывают этанолом для допигментации и переводят снова в водный раствор, доводя рН до 7,0, В водный раствор нуклеиновых кислот добавляют небольшое количество хлороформа и встряхивают его на качалке 1 час для депротеинизации нуклеопротеидов, после чего осадок белка отделяют на центрифуге, а прозрачный раствор нуклеиновых кислот (супернатапт) вливают в этанол, подкисленный концентрированной 11 С 1, Выпавший осадок нуклеиновых кислот собирают на фильтре, промывают этанолом, затем эфиром и сушат на воздухе, Получают 0,54 г нуклеиновых кислот с содергканием основного продукта 86(выход 907 о). Элементарный состав, 7 о. К 15,5; Р 8,5. Выход белка 60%, Элементарный состав, /и: Х 15,6; Р нет, С 49,8; Н 7,21,Предмет изобретения 5 1. Способ последовательного выделения липидов, нуклеиновых кислот и белков из клеток микроорганизмов, отличающийся тем, что микроорганизмы обезхкиривают дезинтеграцией в кавитационпой мельнице в присутствии 10 органического растворителя, из органическогослоя выделяют липиды, твердый остаток сушат и экстрагируют из него нуклеиновые кислоты растворами селей, из оставшейся пасты щелочной экстракцией извлекают белки.15 2. Способ по п. 1, отличаощайся тем, чтодля экстракции нуклеиновых кислот используют 10 о-ный раствор поваренной соли.3. Способ по пп. 1 - 2, отличаощийся тем,что для экстракции белков используют 0,2 н.20 раствор щелочи.