189105

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 89105 Сова Советских Социалистических республикК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Зависимое от авт. свидетельствал. 22 а, 14 Заявлено 12,Х 1,1965 ( 1037438/23-4)с присоединением заявкиПКС 09 риоритетпубликовано 17,Х 1,1966. Бюллетень23ата опубликования описания ЗО.ХП.1966 Комитет по делам аобретеиий и открытийУДК 668.811.8(088.8 МиииотроеР при С Авторизобретения ев Заявител ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НИТРОСИНЕГО ТЕТРАЗОЛИЯ обу оса- родифор- диметиле раство- динитроксана. т осинего Изобретение может быть использовано в качестве реактива для био- и гистохимических исследований различных биологических объектов с целью выявления ферментов окислительного обмена. 5Известен способ получения нитросинего тетразолия взаимодействием бензальдегида п-нитрофенилгидразона, растворенного в смеси тетрагидрофурана и водного или спиртового раствора щелочи, с бисдиазотированным 10 О-дианизидином при - 20 -- 25 С. Полученную суспензию, содержащую смесь моноформазана и динитродиформазана, отфильтровывают, а осадок подвергают обработке диоксаном или бепзолом в течение длительного 15 времени - порядка двух педель. Получают динитродпформазап с выходом 55070 и т. пл.255 СДинитроднформазан содержит примесь мононитроформазана, от которого нельзя изба виться даже при во зоб новлешш очистки вышеописанной экстракцией. Полученный динитродиформазан подвергают окислению изоамплнитрнтом в смеси тетрагидрофурана ч диоксана в присутствии хлористого водо пода. Полученный нит росии ий тетразолий с выходом 75 - 80% имеет т. пл. 184 С (после перекристаллизации из метанола).С целью повышения выхода, чистоты целевого продукта и сокращения времени синтеза ЗО процесса, по предлагаемому спас док - смесь моноформазана и динитмазана - обрабатывают кипящимформамидом, применяемым в качеств рителя, с последующим окислениемдиформазана в среде безводного диоП р и м е р. Способ получения ни р тетразолия,а) Получение динитродиформазана.В фарфоровом стакане емкостью 500 мл суспендируют 18,8 г (0,06 М) тонко растертого солянокислого О-дианизидина в смеси 20 мл концентрированной соляной кислоты, 50 мл ледяной воды и 50 г толченого льда. К полученной суспензии при - 5 - 0 С 30 мин добавляют по каплям раствор 9,2 г нитрита натрия в 30 мл воды. Реакционную массу размешивают в течение 1 час при 0 С и полученный раствор фильтруют на воронке Бюхнера.Одновременно в фарфоровом стакане емкостью 1 л растворяют 28,9 г (0,12 М) бензальдегида г-питрофенилгидразона в 350 мл тетра гидр офурана (или пиридина), добавляют раствор 28 г КОН в 150 мл метанола, Полученный раствор охлаждают до - 20 -- 25 С и прибавляют по каплям приготовленный ранее бисдиазораствор в течение 1 час. Затем реакционную массу продолжают размешивать еще 1 час без внешнего охлажде189105 25 Предмет изобретения Составитель Г. Шаталов Техред Т. П. Курилко Корректоры: В. В, Крылова и Г. Е. ОпаринаРедактор Л. А. Ильина Заказ 3921/13 Тираж 600 Формат бум, 60 Х 90/з Объем 0,16 изд. л, ПодписноеЦНИИПИ Комитета по деламзсбретений и открытий ирп Совете Министров СССРМосква, Центр, пр. Серова, д. 4 Типография, пр. Сапунова, 2 3ния. Полученную суспензию отфильтровывают на воронке Бюхнера, промывают па фильтре черный осадок 500 лгл холодной воды, 1,5 л горячей и 1 л метанола. Полученный черный порошок является смесью моно. и диформазанов.Для удаления моноформазана помещают порошок в круглодонную колбу емкостью 500 мл, снабженную обратным холодильником, добавляют 300 лгл диметилформамида и нагревают колбу в масляной бане до начала кипения растворителя, На экстракцию кипящим диметилформамидом затрачивают 2 - 3 час, после чего оставшийся в колбе продукт отфильтровывают на воронке Бюхнера. Эту операцию повторяют 4 раза, После последней экстракции осадок на фильтре промывают небольшим количеством ацетона. При отсутствии моноформазана проба испытываемого образца диформазана в ацетоне пе дает. окрашенного раствора.Выход динитродиформазапа 24,1 г (54 в, в расчете на О-дианизидин) с т. пл. 270 - 272 С, Т. пл. дифсрмазана определягот введением капилляра в блок, предварительно подогретый до 260 - 265 С.б) Получение нитросинего тетразолия.5 г тонко растертого динитродиформазана помещают в фарфоровый стакан емкостью 300 лл и суспендируют в 150 лл безводного диоксана (диоксан сушат над КОН, а затем отгоняют). К полученной суспензии добавляют 7 мл изоамилпитрата и пропускают ток сухого хлористого водорода (через склянку Тищенко с концентрированной серпой кислотой за 1 мин проходит 60 пузырьков газа) при комнатной температуре пе ниже 20 С в течение 3 час, Затем в реакционную смесь по каплям добавляют еще около 2 л,г изоамилнитрита и продолжают пропускать хлористый водород около 2 час. В результате окисления диформазана количество его в реакционной массе уменьшается, а соль тетразолия выделяется в виде светло-желтого осадка. За ходом реакции удобно следить, отбирая пробы стеклянной палочкой и нанося мазки па фильтравальпую бумагу.Полученный зеленовато-желтый осадок от сасывают на воронке Бюхнера и растворяютв 30 мл метанола. Спиртовый раствор фильтруют от не вошедшего в реакцию диформазана (около 0,1 г), фильтрат помещают в коническую колбу и смешивают с 5 - 10- 10 кратным количеством сухого диоксана. Надругой день отфильтровывают выделившийся светло-желтый осадок, промывают на фильтре 20 лгл эфира и сушат при 40 - 50 С.Выход нитросинего тетразолия 5,1 г (около 15 93,5) с т. пл. 172 - 174 С (с разл.). Т. пл.готового продукта определяют введением капилляра в блок, предварительно нагретый до 180 С. Нитросиний тетразолий кристаллизуется с 1 молекулой метанола и имеет мол.20 вес 849,70: С 1,Н,КьаОвСе, СНаОН.После кристаллизации из метанола получают 4,7 г целевого продукта с т. пл. 187 - 188 С. Способ получения нитросинего тетразолиявзаимодействием бензальдегида гг-нитрофенилгидразона, растворенного в смеси тетра 30 гидрофурана и спиртового раствора щелочи,с бисдиазотированным раствором О-дианизидина при - 20 -- 25 С, фильтрацией получепной суспензии - смеси моноформазана идинитроднформазана - и обработкой осадка35 растворителем с последующим окислениемполученного при этом динитродиформазанаизоамилнитритом в среде растворителя в присутствии хлористого водорода, отличающийсятем, что, с целью увеличения выхода, чистоты40 продукта и сокращения времени процесса,осадок обрабатывают кипящим диметилформамидом в качестве растворителя с последующим окислением динитродифор маза на всреде безводного диоксана,