Способ получения сорбента для аффинной хроматографии

И ЕТЕН ПИСАН ВИДЕТЕЛЬСТ К АВТОРСКО тел ьский ной проВ,Сту гепаринмбина в .46, в.5,ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(56) Струкова С,М, и др. Активациясефарозой превращения протропретромбин 1. - Биохимия, 1981,тс. 905. Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к способу получения производных целлюлозы и гепарина, которые могут найти применение в качестве сорбента в аффинной хроматографии,Цель изобретения - ускорение и упрощение процесса.Поставленная цель достигается тем, что в способе получения сорбента для аффинной хроматографии, включающем обработку гидроксилсодержащего полимера водным раствором гепарина и выделение целевого продукта, в качестве гидроксилсодержащего полимера используют целлюлозу и обработку гепарином проводят в присутствии глутарового альдегида при массовом соотношении целлюлозы гепарина и глутарового альдегида (1 - 7):(1 - 5):(1 - 7) и дополнительно проводят обработку этанолом в присутствии серной кислоты при 60-75 С и рН 3,5-4,5.П р и м е р 1, 0,14 г гепарина растворяют в 3,6 мл дистиллированной воды и в 0,56 мл 25%-ного раствора глутарового альдегида рН 5, 0,14 г целлюлозы в виде трикотажного(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ(57) Сущность изобретения: целлюлозу обрабатывают водным раствором гепарина в присутствии глутарового альдегида при массовом соотношении целлюлозы, гепарина и глутарового альде гида, равном(1-7):(1-5):1- 7 при 60-80 С с последующей обработкой этанолом в присутствии серной кислоты при 60 - 70 С и рН 3,5 - 4,5,полотна помещают в приготовленный раствор при модуле 30,Массовое соотношение на 1 стадии реакции целлюлозы, гепарина и глутаровогоальдегида равно 1:1:1 соответственно. Реакцию проводят при 75 С в течение 40 мин.Сорбент, полученный на 1 стадии ре акции, отжимают и помещают в растворэтилового спирта, содержащего концентрированную серную кислоту, при рН 4,5.Вторую стадию реакции проводят 20мин при 75 С. Затем оставшуюся сернуюкислоту нейтрализуют 10-ным растворомбикарбоната натрия и промывают сорбентфизиологическим раствором,Полученный сорбент высушивают навоздухе и проверяют на содержание иммобилизованного гепаринапо цветной реакции с синим красителем азуром 1. Сорбентсодержит 150 мг гепарина на 1 г носителя,П р и м е р 2. 0,70 г гепарина растворяютв 3,6 мл дистиллированной воды и в 0,56 мл250-ного раствора глутарового альдегидапри рН 5. 0,14 г целлюлозы в виде медицинской марли помещают в приготовленныйраствор при модуле 30, 18181435 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Массовое соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 1;5,1.Реакцию проводят при 70 С в течение 50мин.Сорбент, полученный на первой стадииреакции, отжимают и помещают в растворсерной кислоты в этиловом спирте при рН3,5. Вторую стадию реакции проводят 30мин при 65 С. Затем серную кислоту нейтрализуют 1 -ным раствором бикарбонатанатрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Полученный сорбент высушивают на воздухе. Содержание гепарина250 мг на 1 г носителя,П р и м е р 3. 0,14 г гепарина растворяютв 0,5 мл дистиллированной воды и в 0,56 мл25-ного раствора глутарового альдегидапри рН 5. 0,14 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором до привеса 450.Соотношение целлюлозы, гепарина иглутарового альдегида равно 1:1;1 соответственно. Реакцию проводят при 60 С в течение 50 мин, Полученный сорбентотжимают и помещают в раствор сернойкислоты в этиловом спирте при рН 4,Вторую стадию реакции проводят 30мин при 60 С. Серную кислоту нейтрализуют 1 -ным раствором бикарбоната натрияи промывают сорбент физиологическимраствором, Затем сорбент высушивают навоздухе, содержание иммобилизованногогепарина проверяют по цветной реакции ссиним красителем азуром 1. Сорбент содержит 150 мг гепарина на 1 г носителя.П р и м е р 4. 4 г гепарина растворяют в18 мл дистиллированной воды и в 12 мл25-ного раствора глутарового альдегидапри рН 5.3 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором и отжимают на вальцах до привеса450 о Соотношение целлюлозы, гепарина иглутарового альдегида равно 3:1;3. Реакциюпроводят при 75 С в течение 10 мин,Сорбент, полученный на 1 стадии реакции, отжимают и помещают в раствор серной кислоты в этиловом спирте при рН 4.Вторую стадию реакции проводят 30 минпри 70 С. Оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1 -н ым раствором би ка рбо натанатрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Полученный сорбент высушивают на воздухе. Содержаниеиммобилизованного гепарина в сорбентесоставляет 160 мг гепарина на 1 г носителя,П р и м е р 5. 1 г гепарина растворяют в40 мл дистиллированной воды и в 20 мл 25-ного раствора глутарового альдегида при рН 5,5 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором и отжимают на вальцах до привеса 400;4. Массовое соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 5:1:5. Реакцию проводят при 80 С в течение 45 мин. Полученный сорбент отжимают и помещают в раствор серной кислоты в этиловом спирте при рН 4.Вторую стадию реакции проводят 25 мин при 70 С. Затем оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1 -ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором, Полученный сорбент высушивают на воздухе. Содержание иммобилизованного гепарина составляет 140 мг на 1 г носителя,П р и м е р 6. 1 г гепарина растворяют в 42 мл дистиллированной воды и в 28 мл 25 -ного раствора глутарового альдегида при рН 5,7 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором и отжимают до привеса 400 ,Массовое соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 7;1:7. Реакцию проводят 50 мин при.80 С; Сорбент, полученный на 1 стадии реакции, отжимают и помещают в раствор серной кислоты в зтиловом спирте при рН 4, Вторую стадию реакции проводят 30 мин при 65 С, Оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1;-ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Полученный сорбент высушивают на воздухе и проверяют на содержание иммобилиэонанного гепарина. Сорбент содержит 110 мг гепарина на 1 г носителя,Формула изобретенияСпособ получения сорбента для аффинной хроматографии, включающий обработку гидроксилсодержащего полимера водным раствором гепарина и выделение целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, в качестве гидроксилсодержащего полимера используют целлюлозу и обработку епарином проводят в присутствии глутарового альдегида при массовом соотношении целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида (1 - 7):(1 - 5):(1 - 7) и дополнительно проводят обработку этанолом в присутствии серной кислоты при 60 - 75 С и рН 3,5-4,5,