Способ ферментативного получения целлобиозы

СОЮЗ СОВЕТСКИХсоциАлистическРЕСПУБЛИК 180887 51)5 С 1 НТНОЕ ОСУДАР СТВ Е ННОЕ ВЕДОМСТВО СССР ГОСПАТЕНТ СССР) ЗОБРЕТЕН ПИСАН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(5 У 4) СПОСОБ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ЧЕНИЯ ЦЕЛЛОБИОЗЫ(57) Изобретение относится к биотех гии и может быть использовано для и ния целлобиозы ферментативным и Сущность способа заключается в то измельченное целлюлозосодерж сырье помещают в емкость, содерж буферный раствор - Йа-ацетат-цитр раствор с рН 3,5-5,5, вводят фермент водят гидролиз в течение 12-24 ч, Отде целлобиозы осуществляют путем доб ния этилового спирта в количестве, об чивающем его концентрацию в с 55-65%. Лственный универМногопрофильная "Папирус"врузов, Н,А,АбдеВ,И,Артемьев и нология ферменцеллюлозосодерстые вещества -ук. М., 1987,1 мас.ч. (в.ч.) картона или ленты, или бумажных отходов МСизмельчают на шаровой или гидромельнице. Измельченный продукт помещают в термостатируемую емкость с мешалкой, содержащую 20 в,ч, 0,05-0,15 М йа-ацетат-цитратного буферного раствора, рН 3,5-5,5. Затем в смесь вводят 1 в.ч. фермента, в качестве которого используют технический препарат целловиридин ГЗх. Ферментативный гидролиз проводят при перемешивании в течение 12-24 ч, 50-55 С. Отделяют негидролизованный субстрат от гидролизата фильтрованием под вакуумом. В гидролизат вводят новую порцию субстрата для адсорбции ферментов, находящихся в растворе. Гидролизат отделяют от субстрата также фильтрованием под вакуумом. Обесцвечивают при помощи катионита КУили бентонита, после чего концентрируют при помощи ротационся к области биоиспользовано для рментативным пую изобретения явда целлобиозы,ся повышеСущность способа заключается в том, что целлюлозосодержащее сырье измельчают, помещают в термостатированную емкость с мешалкой, содержащую буферный раствор - йа-ацетат-цитратный раствор с рН 3,5-5,5, добавляют фермент и проводят гидролиз в течение 12-24 ч,Отделение целлобиозы осуществляют путем добавления этилового спирта в количестве, обеспечивающем его концентрацию в смеси 55-65%.Способ осуществляют следующим обра(21) 4838113/13(56) Глущенко Е.В, Биотехтативного превращенияжащих отходов в сахариДиссертация, канд, техн.н Изобретение относ технологии и может бы получения целлобиозы тем. Цель ние выхоноло- олучеутем. м, что ащее ащую атный и проление авле- еспе- месиного испарителя до 55-80% содержания сухих веществ, В концентрированный гидролизат постепенно при перемешивании добавляют 96%-ный этиловый спирт до конечной его концентрации 55-65%. Г 1 олучен ную смесь оставляют на 5-6 ч до полного осаждения целлобиозы, которую центрифугированием (2-3 тыс,об/мин) отделяют от супернатанта, Полученные кристаллы промывают 55-65% спиртовым раствором и высушивают при комнатной температуре,Анализ готового продукта: выход целлобиозы 34-40%; степень конверсии 40-45%; температура плавления 225"С; примесиглюкозы отсутствуют; примеси солей отсут ствуют; примеси фермента отсутствуют.П р и м е р 1. В качестве субстрата используют 1 в.ч, картона. Получение целлобиозы проводят по вышеизложенному описанию. Гидролиз ведут в 0,1 М 20 Ма-ацетат-цитратном буфере. Для осаждения целлобиоэы используют этиловый спирт с конечной концентрацией 60%.Выход целлобиозы 40% Степень конверсии 43% 25 П р и м е р 2. В качестве субстрата . используют ленту. Технологические условия аналогичны примеру 1.Выход целлобиозы 34% Степень конверсии 40% П р и м е р 3. В качестве субстрата используют бумажные отходы МС. Для получения целлобиозы используют вышеизложенное описание.Выход целлобиозы 35% 35 Степень конверсии 42% П р и м е р 4, В качестве субстрата используют картон. Гидролиз проводят по вышеизложенному описанию, используя 0,05 М йа-ацетат-цитратного буфера. рН 40 5,5.Выход целлобиозы 30% Степень конверсии 40% П р и м е р 5. Ферментативный гидролиз проводят как описано в примере 4, ис пользуя 0,10 М йа-ацетат-цитрэтный буфер, рН 5,5.Выход целлобиозы 40% Степень конверсии 45% П р и м е р 6. Ферментативный гидро лиэ проводят аналогично примеру 4. Используют 0,20 М Мэ-эцетэт-цитрэтныйбуфер, рН 5,5,Выход целлобиоэы Степень конверсии 32%П р и м е р 7. Ферментагивный гидролизпроводят как описано в примере 5. Исполь.зуют 0,10 М Ма эцетат-цитрэ 1 ный буфер, рН3,0.Выход целлобиозы 22%Степень конверсии 25%П р и м е р 8, Ферментативный гидролиэпроводят по примеру 5, Используют 0,10 ММа-ацетэт-цитрэтный буфер. рН 3,5,Выход целлобиозы 30%Степень конверсии 34%П р и м е р 9, Аналогично примеру 5. рНбуферной системы 5,5,Выход целлобиоэы 40%Степень конверсии 45%П р и м е р 10, Аналогично примеру 5.рН буферной системы 3 5Выход целлобиозы 35 Степень конверсии 38%П р и м е р 11. Аналогично примеру 5, рНбуферной системы 6,0.Выход целлобиозы 28%Степень конверсии 32%П р и м е р 12, Аналогично примеру 5,Осаждение целлобиозы из гидролизата проводили 50% этиловым спиртом,Выход целлобиозы 35%Степень конверсии 45%П р и м е р 13, Аналогично примеру 5,Осаждение целлобиозы проводят 60% раствором этилового спирта.Выход целлобиоэы 40%Степень конверсии 45%П р и м е р 14, Аналогично примеру 5,Осаждение гидролизата проводили 70%раствором этилового спирта,Выход целлобиозы 40%Степень конверсии 45% Формула изобретения Способ ферментативного получения целлобиозы, включающий ферментативный гидролиз целлюлозосодержащего сырья в буферной среде, упаривание полученного гидролизата и выделение целлобиозы, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целлобиоэы, в качестве буферной среды используют Ма-ацетат-цитратный раствор с рН 3,5-5,5, а выделение целлобиозы осуществляют путем добавления этилового спирта в количестве, обеспечивающем его концентрацию в смеси 55.65%.