Способ цитологического определения катехоламинов в эритроцитах

(5)5 6 01 Й 1 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ер 10 00 ОПРЕ- ИТРОи меди- методам На хорошстекле приготапомещаютвсорами формалиют в смесь сле Формалин Бихромат Ацетат нат Хлорид на Вода обезжире ливают м уд с конце а на 1-2 ми ующего со нном пр азок кро нтрирова н, а зате става, ма едметном ви. Стекло нными пам погружас%10-151-50,2-0,40,9-1,6стальное алияиярия ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) СПОСОБ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГОДЕЛЕНИЯ КАТЕХОЛАМИНОВ В ЭЦИТАХ(57) Изобретение относится к обласцины, а именно к гистохимическим Изобретение относится к медицине, а именно к гистохимическим методам исследования, и может быть использовано для контроля за скоростью и активностью адаптивных процессов у животных и человека в эксперименте и клинике,Целью является повышение точности способа.Способ осуществляют следующим обраисследования, Целью является повышение точности определения катехоламина в тканях и клетках организма. Цель достигается тем, что мазки перед фиксацией обрабатывают парами формалина, а фиксатор дополнительно содержит ацетат натрия, хлорид натрия при следующих соотношениях компонентов, мас.%: бихромат калия 1-5; ацетат. натрия 0,2-0,4; формалин 10-15; вода - остальное. При этом импрегйацию проводят в 4-8%-ном растворе азотнокислого серебра после фиксации, а клетки докрашивают в 1%-ном растворе дозина. Способ позволяет выявить все гранулы катехоламина в клетке. Обработку мазков проводят при комнатной температуре в темноте 40-50 мин, причем все компоненты смеси приготовля- д ются на основе 1,5%-ного раствора ИаС во избежание гемолиза эритроцитов. Затем мазки ополаскивают дистиллированной водой и импрегнируют 5%-ным раствором азотнокислого серебра 3 мин. Избыток кра- СЛ сителя смывают дистиллированной водой и ОЧ окрашивают цитоплазму эритроцитов 1%- (Я ным раствором эозина в 1 мин. Стекла подсушивают на воздухе и микроскопируют под иммерсией. В эритроцитах на фоне розовой цитоплазмы наблюдают темно-коричневые глыбки - включения катехоламинов, Пары формалина и добавление его в состав смеси необходимы для надежной фиксации мазков крови.П р и м е р 1. Информативность метода была проведена серией опытов на 5 коысах 1730555самцах, которым внутримышечно был введен адреналин в дозе 2,5 мг/кг,Для контрольного исследования кровьвзята из хвостовой вены до введения препарата, Последующие заборы крови произведены через 5,45 и 120 мин после иньекции.Оценка результатов опытов проводилась попроценту распределения эритроцитов сразличными размерами гранул и плотностью их в клетках. Учет величины гранулпроводили по 3-бальной системе; мелкие -средние - крупные гранулы; плотность расположения гранул по 4-бальной системе,Приведенные данные свидетельствуют, чтов контрольных мазках из 100 просмотренных эритроцитов 28 не содержат гранул,остальные содержали в основном мелкиегранулы, заполнявшие наполовину (34 ф )или полностью (24 ) эритроцит,Через 5 мин после введения адреналина в 2,8 раза уменьшилось количество пустых эритроцитов и до 49(по сравнению с13 в контроле) увеличилось количествоэритроцитов с гранулами среднего размера.Через 45 мин количество пустых эритроцитов становится близким к контрольному(25 ф ) и наблюдается снижение количестваэритроцитов с мелкими (2 ) и средними(20;6) гранулами и резкое увеличение числаэритроцитов с крупными гранулами (с 4 до53 ). Через 120 мин становится явной тен. денция к возврату эритроцитов к контрольным значениям (21 пустых, 35;эритроцитов с мелкими, 34 фсо средними и10 с крупными гранулами).Таким образом, введение адреналинасопровождается максимальным увеличением количества гранул по размерам и плотности к 45-й мин и тенденцией к нормализациик 120-й мин, выразившейся в появлении значительного количества пустых эритроцитови уменьшении эритроцитов с крупными гранулами.П р и м е р 2, Следующая серия опытовбыла проведена с экстраваэированнойкровью 5 крыс-самцов, в которую добавлялся адреналин в разных концентрациях;0,000001, 0,00001, 0,0001, 0,001 ф 6 и 0,01 - ные растворы. В мазке крови без добавления препарата преобладают мелкие исредние гранулы, полностью заполняющиеклетки, При добавлении в кровь минимальной концентрации адреналина наблюдается увеличение крупных гранул с 7 в контроле до 18. При добавлении адреналина в концентрации 0,00001 продолжается увеличение количества эритроцитов скрупными гранулами до 43 ф при резком5 снижении их числа (с 39 до 8 ) с мелкимигранулами, Добавление адреналина в концентрации 0,0001 мало меняет предыдущие результаты. Однако при концентрациях0,001 и 0,01 наблюдается резко выражен 10 ная тенденция к увеличению количестваэритроцитов с крупными гранулами (до 65 и83 фсоответственно) и уменьшению их числа с мелкими и средними гранулами, чтообъясняется включением механизмов не 15 специфической рецепции катехоламинов.Следовательно, предлагаемый способявляется чувствительным для оценки и изучения различных физиологических состояний организма, связанных с воздействием20 на симпато-адреналовую систему,Заявленный способ может быть использован в научно-исследовательской и клинической практике в тех случаях, когдаоказывается невозможным оценить состоя 25 ние симпато-адреналовой системы по количеству катехоламинов в тканях, а такжетребует минимального количества исследуемого материала, в связи с чем может бытьс успехом использован для изучения нор 30 мальных физиологических и патологическихпроцессов в организме и динамике,Формула изобретения Способ цитологического определения 35 катехоламинов в эритроцитах путем фиксации мазков в среде, содержащей бихромат калия, с последующей их импрегнацией в азотнокислом серебре и определением катехоламинов по интенсивности окрашива ния, отличающийся тем, что, с цельюповышения точности способа, мазок перед фиксацией обрабатывают парами формалина, а фиксатор дополнительно содержит ацетат натрия, формалин и хлорид натрия 45 при следующих соотношениях компонентов, мас.ф :Бихромат калия 1-5 Ацетат натрия 0,2-0,4 Формалин 10-15 50 Хлорид натрия 0,9-1,6Вода Остальноепри этом импрегнацию проводят в 4-8;- ном растворе азотнокислого серебра в течение 2-4 мин.