Способ определения стрессореактивности животных

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1)5 001 и 33 Физиологиитова зим об-.Ф ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРИТИЯМП И ПНТ ССО(71) Институт зоологии иАН МССР(56) Авторское свидетельство СССРР 1293677, кл, Г 01 И 33/48, 1987.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРЕССОРЕАКтИВНостк авотНЫХ(57) Изобретение относится к областимедицины, а именно к физиологии,и может быль использовано для определения стрессореактивности животных. Изобретение относится к биологиимедицине и ветеринарии, а именнок иммуноАизиологии, и может бытьиспользовано лля выявления степени реактивности иммунноп системы животных к действию стресс в фактор.Целью изобретения является сокра- щение времени анализа и сохранение жизни подопытных животных.Способ осуществляют следую разом.В опытах используют беспородных морских свинок-самцов весом 500-551 ги крыс-самцов гетерозиготной популяции Чзсаг с массой тела 150-180 г. Морские свинки подвергаются стрессу иммобилизацией путем жесткой фиксации на спине, крысы - путем помешения в пенале. Кровь берут посредством кардиальной .пункции (у крыс в ряде,Цель изобретения - сокращение времени анализа и сохранение жизни подопытных животных. животных подвергают стрессирующему воздействию путем иммобилизации, затем берут кровь и определяют в ней уровень бласттрансйовмации и при увеличении этого уоовня до 307 в пробе крови, взятой после иммобилизации, по сравнению с уровнем в пробе, взятой до иммунизации, определяют высокую стрессореактивность, а при уровнениже 30 Е - низкую стрессореактивность. По сравнению с прототипом сокращается время анализа на 235 мин, при этом подопытныеживотные остаются живыми.случаев из хвостовой вены) до и на 5-й, 10-й, 15-й и 30-й минутах воздействия. Для определения показатеЛей клеточного иммунитета используют макро- и микрометоды бласттрансформации, При постановке микрометода 5 мкл цельной крови инкубируют в планшетах на протяжении 72 ч в 100 мкл инкубационной смеси, в состав которой вводят среду Игла, глютамин, гентамицин, 2-меркаптоэтанол, эмбриональную телячью сыворотку. За 4 ч ло оконча.ния культивирования добавляют 1 мКи Э.Н-тимидина. Ьлетки осаждают на мемГбранные фильтры; промывают трихлорук сусной кислотой, этанолом. Растворимость кислотно-растворимой фракции подсчитывают методом сцинтилляционной радиометрии. Лпя активации Т-лимфоцктов используют Аитогемагглютинин1716448 Формула изобретения Составитель В .ЛитовченкоТехред А.Кравчук Корректор А,Обр,чар Редактор М.Питкина Заказ 610 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раущская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент" г.ужгород, ул, Гагарина,101(ФГА) в дозе 5 мкг/мп, а для В-лимфоцитов - 100 мкг/мл липополисахарипа (ЛПС).Иакрометод отличается от микропо 5становки получением лейкоцитарнойвзвеси цептрибугированием в одноступенчатом градиенте плотности Фикол -верограпин, При этом клетки инкубируют в количестве (1 - 5) х 11 /мл.ОДля подтверждения стресс-реакциии степени ее выраженности определяютуровень адренокортикотропного гормона(АКТГ) в крови методом радиоиммунногоанализа (РИА), у морских свинок допол нительно определяют концентрацию кор -тизола в сыворотке крови (наборы Ин. ститута биоорганической химии,г. Минск) .П р и м е р . 1.1 ивотных содержат в 20течение 7 дней при световом режимедень: ночь = 15:12 ч в условиях, максимально приближенных к комфортным,после чего берут из хвостовой вены10 мкл крови и вносят ее в культуральную среду беэ добавления и с добавлением ФГА. Ливотных подвергаютиммобилизационному стрессу (сажаюткаждое животное в пластиковый пенал) .Через 5, 10, 15 мин после начала действия стресс-фактора берут кровь изхвостовой вены и добавляют ее в заранее приготовленные планщеты с культуральной средой без и с добавлениемФГА. По окончании забора крови обрабатывают хвост йодом и возвращаюткрысу в привычнне условия, предварительно пометив ее.Пробы инкубируют в термостате при37 фС в течение 72 ч, За 4 ч.до окончания инкубации вносят 1 мКи Н-тими 3дина, После окончания инкубационногопериода пробы переносят на мембранныефильтры, которые затем промывают трихлоруксусной кислогой, этанолом, заливают сиинтилляционной жидкостью иподсчитывают радиоактивность кислотно-растворимой Фракции.Спонтанный синтез ДНК до возпействия стрессового фактора составляет 1058 имп/мин, а при добавлении в культуру 5 мкг/мл ФГА 5328 имп/мин (индекс стимуляции Т-лимАоцитов составляет 5,03).Таким образом. Уже на 5-й минуте действия стресс-фактора индекс стимуляции бласттрансАормации лимРоцитов снизился на 48%. Следовательно, исследуемое животное обладает высокой степенью реактивности иммунной системы.Способ позволяет проводить отбор животных, предназначенных для лромыщленного и племенного использования при интенсивных условиях содержания с учетом реактивности иммунной системы, которая является одной из составных частей спедЮической резистент - ности и таким образом предотвращает отсутствие эФАекта от вакцинации и других ветеринарных мероприятий, ис-, ключает выбраковку животных задолго до истечения срока продуктивного периода.Предложенный способ позволяет сократить время анализа на 235 мин и сохранить жизнь подопытных животных. Способ определения стрессореак - тивности животных, включающий воздействие стрессором на животного, забор крови до и после воздействия с последуюцим ее исследованием, о т л ич .а ю щ и й с я тем что, с целью сокращения времени анализа и сохранения жизни подопытных животных, в,ка- честве стрессора используют ограниче-, ние подвижности животного, а в пробах крови после ее забора определяют уровень бласттрансФормации лимФоцитов и при снижении уровня бласттрансформации до 30% в пробе крови после воздействия стрессора по сравнению с пробой до его воздействия определяют высокую стрессореактивность животного, при уровне бласттрансФормации ниже 30% внизкую стрессореактивность.