Способ определения спонтанной деформабельности эритроцитов на препарате

союз соВетскихСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1 б 98 б 78 1/28 48 1)5 ЕТЕНИ не, яп И имен ям кр изуче брань взятую из планшета ний, кото- ,18 - 0,2 мл М раствор ом буфере асти ковым и осторожт планшет е при комритроциты 80 ю форму са в глю- имое ро ор ГОсудАРстВенныЙ комитетПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Ставропольский государственный медицинский институт(54 СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПОНТАННО ДЕФОРМАБЕЛЬНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ НА ПРЕПАРАТЕ(57) Изобретение относится к медици аименно, к гематологии, Целью являетс озобретение относится к медицине, а о к физико-химическим исследованиови, и может быть использовано для ния пластичности и стабильности мемэритроцитов при патологии.пособ осуществляется следующим образом,Кровь в количестве 1-2 мкл, пальца, переносят в одну из луно для иммунологических исследов рую предварительно заполняют 0 физиологической среды: 0,15 хлорида натрия на 0,1 М фосфатн рН 7,4. Перемешивают смесь пл наконечником микропипетки ил но пипетируют. Затем закрываю крышкой и Оставляют в таком вид натной температуре 21.ф.2 С. Э при этом спонтанно изменяют с без воздействия внешней силы,Спустя 1 ч для остановки и лунку вносят 0,02 мл 250 фиксат таральдегида, перемешивают с вышение точности способа путем выявления степени деформабельности эритроцитов, Это достигается тем, что кровь инкуибируют с 0,15 М раствором хлорида натрия, приготовленным на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,4, При этом инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 60 - 65 мин. Далее к крови добавляют глютаровый альдегид и готовят препарат раздавленной капли, Под микроскопом просчитывают количество шиповато-измененных эритроцитов и по их содержанию определяют степень деформабельности эритроцитов. и через 3 - 5 мин на предметном стекле готовят препарат "раздавленной капли", который затем микроскопируют,Учет результатов спонтанно протекающей деформации эритроцитов проводят путем подсчета не менее 200 клеток, встречающихся в поле зрения. При этом дифференцируют следующие клетки; дискоциты - клетки нормальной формы с двояковогнутой поверхностью, эхиноциты - с зубчатой или шиповидной поверхностью и все остальные клетки, обозначенные как "другие формы", Основную часть других форм клеток обычно составляют стомациты и книзоциты, Результаты выражают в процентах,С целью упрощения условий спонтанно протекающей деформации клеток, инкубацию их проводили при комнатной температуре. при которой оптимально необходимое время экспозиции составило 1 ч или 60 - 65 мин. После добавления в лунку фиксатора приготовление препарата "раздавленной капли" для микроскопии объекта вовсе не обязательноСоставитель Л.СтебаеваРедактор М.Недолуженко Техред М.Моргентал Корректор Т,Палий Заказ 4387 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент",.г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 проводить немедленно, Форма клеток остается стабильной в течение 3 - 4 сут наблюдения и меняется лишь при высыхании содержимого лунки, Это очень удобно как при серийных исследованиях в эксперимен те, так и в повседневной работе клинической лаборатории.П р и м е р 1, Пробу крови (1 мкл) здорового человека переносят в лунку 96-луночного планшета, смешивают с помещенной в 10 нее физиологической средой (0,2 мл), накрывают крышкой и оставляют стоять на столе при обычных условиях. Спустя 60 мин в лунку добавляют 0,02 мл 25;4 глюторальдегида и через 3-5 мин готовят препарат "раздав ленной капли" для микроскопии, Дифференцированный подсчет клеток показал: суммарное количество эхиноцитов 46,5, всех других форм 8,5, дискоцитов 45, что расценено как хорошее состояние пла стичности зритроцитов при досаоой стабильности их наружной мембраны.П р и м е р 2, Пробу крови (1 мкл) больного хронической пневмонией переносили в физиологическую среду, инкубировали и 25 Фиксировали по такой же методике. Подсчет клеток обнаружил 32,5 оь эхиноцитов, 24 других форм и 43,5 О дискоцитов,что расце-, нено как снижение пластичности эритроцитов при достаточной стабильности их 30 наружной мембраны.П р и м е р 3. Пробу крови (1 мкл) больного острой пневмонией переносили в физиологическую среду, инкубировали и фиксировали по описанной методике. Под счет клеток выявил 90,5 эхиноцитов,9,57 О дискоцитов и полное отсутствие других Форм клеток, что расценено как повышение пластичности эритроцитов при нестабильном состоянии их наружной мембраны, 40При обследовании установлено, что наибольшее число шиповидно-деформированных эритроцитов (эхиноцитов) образовывалось у больных острой неспецифической пневмонией 65,5+4,3 О, 45 затем у здоровых лиц 48,44,4;4 и больных хронической пневмонией в фазе обострения 36,97+ 6,6, а наименьшее их количество у больных сахарным диабетом 16,12,7;, Напротив, наибольшее число 50 всех других деформированных клеенок оказалось у пациентов с сахарным диабетом62,8 . 3,4, а наименьшее - у больныххронической пневмонией 19,4 + 3,2.Деформабельность эритроцитов является одним из параметров, определяющимреалогию крови, В предлагаемом способечисло эхиноцитов, образующихся в физиологической среде, прямо пропорциональноспособности эритроцитов изменять своюформу, т.е, пластичности, а число образующихся других форм клеток в такой же мересоответствует стабильности их наружноймембраны, поскольку не сопровождаетсяобразованием локальных выпячиваниймембранного вещества.Таким образом, предлагаемый способопределения спонтанно протекающей деформации эритроцитов в физиологическойсреде отражает существенные биологические сдвиги в организме.Предлагаемый способ позволяет характеризовать специфическое сострян 1 е мембраны эритроцитов не только больных издоровых лиц, но и при том или ином патологическом процессе, и может быть использован как дополнительный тест вдинамическом контроле за течением заболевания.Формула изобретенияСпособ определения спонтанной деформабельности эритроцитов на препарате путем забора крови, инкубации в среде, .содержащей раствор хлорида натрия, изготовления препарата раздавленной капли ивыявления шиповато-деформированныхэритроцитов, отл ич а ющийс ятем,что,с целью повышения точности способа путемвыявления степени деформабельности, инкубацию проводят при (21+2) С в течение60 - 65 мин, при этом 0,15 М раствор хлориданатрия готовят на 0,1 М Фосфатном буферерН 7,4, а перед изготовлением препаратараздавленной капли в среду добавляютраствор глютарового альдегида до 2,53,0 о-ной концентрации, и при наличии напрепарате до 60-100 шиповато-деформированных эритроцитов определяютвысокую степень деформабельности эритроцитов. а при наличии до 30 - 59 шиповато-деформированных эритроцитовнизкую,