Способ определения количества тканевых структур на гистоцитологическом препарате и устройство для его осуществления

(56) Люминисцентный анализ вэнтерологии, Ленинград, Наука64-90. гастро,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВАТКАНЕВЫХ СТРУКТУР НА 1 МСТОЦИТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ И УСТРОЙСТВО ДЛЯЕГО ОСУЯЕСТВЛЕНИЯ 3Изобретение относится к медицине,а именно к морфометрическим исследованиям в гистологии и цитологии, иможет быть использовано в медико-биологических.и биофизических исследованиях для излучения, обработки морфо-.метрических и спектральных характеристик микропрепаратов,Целью иэобретения является повыше-ние точности способа,Способ осуществляют следующимобразом.Сначала производят контрастирование изучаемых тканевых структурмикропрепарата, например, ядер, цито.плазмы митохондрий и т.д., любымиз известных способов, например меФтодами гистохимического окрашивания,Затем измеряют спектры свечения отдельных тканевых структур, количествокоторых необходимо измерить, Затем й,)8 - Д,(Ъ,)8 гд ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГННТ СССР ИСАНИЕ ИЗ ТОРСНОМУ СВИДЕТЕ 2(57) Изобретение относится к медицине, а именно к гистологической техни ке. Целью является повышение точности способа, Цель достигается тем, что. на препарате после спектрофотометрии определяют длины волн наибольшей ин" тенсивности свечения, далее измеряют спектр свечения всего поля зрения ррй/данной длине волны, а количество тка невых структур на препарате рассчиты вают по разнице между значениями ин к тенсивности свечения всего поля и каждой выделенной структуры. Способ позволяет значительно повысить инфор.1 мативность исследований, 2 сп,ф-лы 1 ил. путем сравнения спектров выбирают длины волн, на которых интенсивность, свечения отдельных измеряемых тканевых структур особенно сильно различается. После этого измеряют на выбранных длинах волн свечение всего ,1поля зрения, на котором необходимо измерить количество выделенных ткане- вых структур. Затем составляют и решают следующее уравнение: лХТл(фл)8 о = Тн(МБоВ 1 л,Ъп,Б- интенсивность свечения, длина волны иинтегральная площадьзанимаемой тканевой структурой.Решение этого уравнения относительно неизвестных В осуществляют способом 81 = Ьп/Ь где Ь - главный определитель систе 96 п - дополнительный определительсистемы.Полученные величины соответствуют количеству выделенных тканевых струк тур, находящихся в поле зрения микро, скопа. 15Способ осуществляется с помощью устройства, приведенного на чертеже, где имеются тракты освещения микро- объекта 1 в проходящем, отраженном и возбуждающем люминесценцию свете, включающи д в себя источник излучения 2.и оптическую систему, направляю- щую излучение на исследуемый микро- объект 3. Особенностью этих. схем является необходимость иметь в микроскопе стабилизированный широкополостный источник излучения, Лучше всего эти функции выполняют ксеноновые лампы со стабилизированным питанием,Диафрагма 4 с переменной аппертурой, расположенная в плоскости изображения5 объектива 6 служит для выделениятканевых структур микропрепарата,количество которых необходимо определить. Полупрозрачные пластинки 7,8 позволяют проводить визуальные исследования при одновременном измерении спектральной информации, окуляр9 микроскопа, согласующий объектйв 10,в фокусе которого расположен входной 40торец приемного смесительного световода 11, который согласуются с нимпо числовой и угловой аппертурамво избежание потерь инйормации засчет невыполнения полного внутреннего отражения световода или диайрагМирования части изображения аппертурой световода. Линза 12 согласуетвыходной торец световода 13 с фоточувствительным элементом 14 акусто. 50оптического фильтра, который позволя"ет производить измерения спектров назаданных длинах волн, выбираемых заранее блоком управления и обработки15, связанным с микроЭВМ 16;55Устройство работает следующим образом. В плоскости диайрагмы 4 объективом 6 строится изображение 5 микропрепарата 1, освещаемого проходящим, отраженным или возбуждающим люминесценцию излучением, Диафрагмой 4 выбирают поле зрения, с которого снимается спектральная инйормация. Выбор поля зрения производят при визуальном наблюдении через окуляр 9. Излучение, пройдя пластинки 7 и 8 и согласующий объектив 10, попадает в смесительйое волокно световода 11, где происходит оптическое перемешивание пучков излучения полученных от; различных участков поля зрения и несущих различную спектральную информацию. Полученное на выходе волокна однородное по спектральным свойствам излучение. проходит согласующий объектив 1 О и акустооптический спекгрофотометр, где преобразуется в электрический сигнал и запоминается в блоке управления и обработки 15 с помощью микроЭВМ 16, соединенной с блоком 15. Обработка измеренных спектров, выбор характеристических длин волн и вычисления морйологических характеристик исследуемого микропрепарата осуществляют по выше приведенному алгоритму.П р и м е р. При окраске препарата фуксином определялось количество межклеточной ткани и всех остальныхтканевых структур.В процессе измерения методом точечного счета производилось 8 замеров при различных положениях окуляра.Так для поля 1 получены следующие значения количества межклеточной ткани по отношению ко всем остальнымструктурам,Е: 76,72,68,76,92,88,88.Время измерения по одному полю зрения составило 20 мин. Точность измерений не превышала ;1 Е в диапазоне от 400 до 650 нм, гденаблюдались, наибольшие различия интенсивности излучения прошедшего через различные тканевые структуры препарата, Максимальное различие наблюдалось при длине волны 550 нм. Отсчеты интенсивности составили для межклеточной ткани 0,175 для остальных структур 1. Полученыследующие значения количества межклеточной ткани по отношению ко всему полю зрения. Для поля 1 - 77,6+1%, Для поля 2 - 49,8+1 Е, Время, затраченное на измерение одного поля зрения, включая подготовку к исследованию, составило не более 3 мин..Фельдман Корректор Л,Патай едакт Подписноеи открытиям паб., д. 4/5 386 ТиражГосударственного комитета по изобретени 113035, Москва, Ж, Раушска Зак ,ВНИИ олигр ул ское предприятие, г. Ужг оектная, 4 изродстве 5169Использование предлагаемого спосо-: ба определения количества тканевых структур и устройство для его осуществлейия обеспечивает повышение чувствительности измерений, так как производится выбор длин волн во всем диапазоне, на которых сравниваемые тканевые структуры имеют наибольший контраст, Кроме того, имеет место сокращение времени, упрощение методики и применяемой аппаратуры. Формула изобретения1. Способ определения количества тканевых структур на гистоцитологи- ческом препарате путем его окрашива. - , ния с последующей спектроАотометрической оценкой выделенных структур, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целЬю повышения точности способа на препарате после спектрофотометрии 8 6776определяют длины волн наибольшейинтенсивности свечения, далее изме"ряют спектр свечения всего поля эрения при данной длине волны, а количество тканевых структур на препара"те рассчитывают по разнице междузначениями интенсивности свечениявсего поля и каждой выделенной струк туры2, Устройство для определения коли-,.чества тканевых структур на гистоцнтологическом препарате, содержащее оптический микроскоп с переменной диафрагмой и измерительный элемент, о тил и ч а ю щ е е с я тем, что, сцелью повышения точности, оно снабже-,но смесителем световых пучков, состоящее из входного согласующего элемен-20 та, моноволокна и выходного согласующего объектива,а измерительный элементвыполнен в виде спектроотометра.