Способ определения микобактерий туберкулеза в диагностической пробе

(5 ПИСА ИЗОБР ТЕНИ медицине, в может быть ри проведедовдний.ся повышепособности ения микотериале,ющим обраГОсудАРстВенный кОмитетПО ИЗОБРЕТГНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Ященко Т,Н, и др. Руководство к лабораторным исследованиям при туберкулезе, М.,1973, с. 11,Изобретение относится к частности к микробиологии, и использовано во фтизиатрии и нии микробиологических исслеЦелью изобретения являе ние точности и разрешающей бактериоскопического опреде бактерий в диагностическом маСпособ осуществляют след зом,Диагностический материал (мокроту больного) гомогенизируют в присутствии 10-ного раствора йазР 04 (добавляют равный обьем 1:1) при интенсивном встряхивании со стеклянными бусами в течение 30 мин, Гомогенат нейтрализуют НС до рН 7,0. К обработан ному материалу добавляют взвесь феррочастиц, Используют высокодисперсный порошок феррочастиц. по, ЯО 1684616(57) Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонолсгии. Целью изобретения является повышение точности способа эа счет концентрации бактерий в пробе. Пробу инкубируют в течение 20-60 мин в водной руспензии феррочастиц размером 50-100 А, предварительно озвученных уль граэвуком мощностью 80-100 Вт/см, Далее бактерии осаждают, готовят мазки, окрашивают и исследуют под микроскопом, Способ позволяет выявить микобактерии в небольшом количестве экссудата,лученныи плазмохимическщч способом, с размером частиц 50-100 А и удельной поверхностью 100-130 м /г. Гидрозоль фер 2рочастиц (0,1 - 0,20) получают в фосфатносолевом буфере непосредг-венно перед исследованием путем ультра.звуковой обработки суспензии феррочастиц в течение 3-5 мин на стандартном ультразвуковом диспергаторе УЗДНТ при частоте колебаний 22 КГц 2. мощности излучения 80-100 Вт/см, Озвученную ферросуспенэию инкубируют при комнатной температуре с гомогенизированным материалом в течение 1 ч при встряхивании. Пробирку с исследуемым материалом омещают на 10-15 мин в поле постоянного агнита размером 40 х 40 х 10 мм, выполненого из сплава ЯоСо 5 с напряженностью на5 10 15 20 нее 100 полей зрения 50 55 поверхности 10 -2 10 Э с градиентом поляз, эот 500 до 1000 Э/см.При отсутствии магнитной ловушки. создающей необходимое магнитное поле для осаждения феррочастиц, осуществление способа возможно путем концентрирования феррочастиц центрифугированием на обычных центрифугах (1,5 - 2 тыс. об/мин), Полученный осадок наносят на предметные стекла в виде мазков, которые фиксируют при 80 С в течение 1 ч. Мазки окрашивают люминесцентным красителем на основе аурамина и родамина С, обесцвечивают Зо -ным раствором НС на 70" этаноле, докрашивают 0,025 о -ным растворам метиленового синего, Микроскопию мазков проводят на микроскопе ЛЮМАМ и определяют флюоресцирующие золотисто-желтые микробные палочки при просмотре не меП р и м е р 1. Исследовали мокроту больного туберкулезом. К мокроте лобавляли равный объем 10 о -ного .аствора МазРОд, Гомогенизировали при встряхивании со стеклянными бусами 30 мин. Нейтрализовали гомогенат НС до рН 7,0. К 9 мл обработанного материала добавляли 1,5 мл 0,2 О/,-ной ферросуспензии, приготовленной ех 1 епроге путем озвучивания в течение 3-5 мин водной суспензии феррочастиц размером 50 - 100 А (полученных плаэмохимическим способом) на ультразвуковом диспергаторе УЗДИ - 2 Т мощностью 80 - 100 Вт/см с частотой колебаний 22 кГц. Инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 ч. Пробирку с исследуемым материалом помещали на 10 - 15 мин в поле постоянного магнита размером 40 х 40 х 10 мм, выполненного из сплава ЯпСо 5, напряженностью 2000 Э. Полученный осадок наносили на предметные стекла в виде мазков, высушивали и фиксировали при 80 С в течение 1 ч. Окрашивали люминесцентным красителем (аурамин 00+ родамин С), обесцвечивали 3-ным раствором НС в 70 этаноле, докрашивалираствором метиленового синего,При люминесцентной микроскопии мазков, приготовленных указанным способом, выявлено 15 МБТ, что позволило диагностировать туберкулез. При просмотре мазков, подготовленных после традиционной обработки материала, получен отрицательный результат,П р и м е р 2. Мокроту больного туберкулезом предварительно гомогенизировали 25 30 35 40 45 10-ным йазРО 4 и нейтрализовали НС, К 9 мл гомогената добавляли 1,5 мл 0,2- ный ферросуспенэии, приготовленной ех 1 еароге путем озвучивания в течение 3-5 мин водной суспензии феррочастиц размером 600 А (полученных плазмохимическим способом) на ультразвуковом диспергаторе УЗДНТ мощностью 80 - 00 Вт/см, частотой 22 кГц. Смесь инкуби 2ровали при встряхивании в течение 1 ч, Магнитное концентрирование проводили в течение 10-15 мин, помещая пробирку с диагностическим материалом в поле постоянного магнита, выполненного иэ сплава ВглСо 5, напряженностью 2000 Э. Приготовленные из осадка мазки фиксировали и окрашивали люминесцентным красителем как и примере 1, При люминесцентной микроскопии мазков, приготовленных указанным способом, а также по методу прототипа, МБТ не обнаружены, Однако при использовании феррочастиц размером 50-100 А с соответствующей ультразвуковой обработкой и последующей люминесцентной микроскопией осадка феррочастиц выявлены бактерии в значительном количестве, При посеве диагностического материала на плотную питательную среду также получен положительный результат (обильный рост колоний микобактерий), Подтвержден диагноз туберкулеза,Таким образом, использование предлагаемого способа концентрирования мико- бактерий при бактериоскопическом анализе клинических образцов мокроты обеспечивает увеличение числа положительных результатов по сравнению с прототипом, Кроме того, способ позволяет повысить чувствительность зкспрессного бактериоскопического выявления бактерий при ранней диагностике туберкулеза,Формула изобретения Способ определения микобактерий туберкулеза в диагностической пробе путем ее гомогениэации, осаждения, приготовления мазков с последующим их окрашиванием аурамином, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа путем концентрации микобактерий, пробу до осаждения инкубируют в течение 20-60 мин в водноу суспензии феррочастиц размером 50 - 100 А, предварительно озвученных ультразвуком мощностью 80 - 100 Вт/см.