Способ определения токсического повреждения лейкоцитов

587445 А 1 СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕС)КИХРЕСПУБЛИК 19) 11 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ЕЛ ЕНИЯЦИТОВ ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР(21 ) 4418072/28-14(56 ) Барсуков А,А. и др. Изучение окислительного метаболизма фагоцитов человека при использовании микрообъемов крови. -В сб.: Современные методы иммунодепрессии, -Москва-Ташкен.т, 1984.(54 ) СПОСОБ ОПРЕД ТОКСИЧЕСКОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ ЛЕЙКО 1Изобретение относится к медицине,а более конкретно к иммунологии и фиэиоло гии,Целью изооретения является повышение чувствительности способа,При осуществлении способа пробыкрови после инкубации с исследуемымтоксическим веществом дополнительноотмывают двукратным центрифугированием, добавляют люминол в концентрации 1 О 4-10 М и, измеряя интенсивность хемилюминесценции (ХЛ ) по сравнению с контролем, судят о токсическом повреждении лейкоцитовП р и м е р, В полистироловые кюветы вносили по 25 мкл крови и различные концентрации нуклеината натрияили физраствора (контроль), инкубировали в течение 1 ч при 37)С, затемполовИну проб отвыли от нуклеинатанатрия путем центрифугирования 2 раза С 51)5 0 01 М 33/49/С О М 33/53 2(57) Изобретение относится к медицинеа именно к иммунологии и физиологии.Целью изобретения является повышениечувствительности способа определениятоксических повреждений лейкоцитов.Способ позволяет выявлять сенсибилиза цию организма к различным аллергенам и химическим веществамСущественные признаки. изобретения: кровь инкубируют оез индуктора хемилюминесценции в присутствии исследуемого фактора; про бы крови после инкуоации их с исследуемым веществом отьывают дважды центрифугированием, цооаьляют люминол в онцентрации 10-4 10 -М и измеряют интенсивность хемилюминесценции по сравнению с контролем, 1 табл,1по 7 мин при 1000 об/мин, а другуюполовину проб не отмывали, В контролепробы инкубировали и отмывали с физраствором. Затем добавляли 1 О мкллюминола. Последций готовили следующим образом, Навеску люминола фирюзыЯегча (10 мг) суспендировали в 1 мпфизраствора (рН 7,2), перемешивали,оставляли при 37 С на 1-2 ч для осаждения нерастворимых частиц, надосадочную жидкос, ь отфильтровывали черезфильтры диаметром пор 0,2 - 0,45 мкм ииспольэовали в реакции ХЛ, Концентрация люминола в профильтрованном растворе соответствовала примерно 1 Э-1 О ф и концентрации люминола, растворенного в ДМСО по известному способу.ХЛ измеряли на хемилюминометре 1 КВУа 11 ас ОУ (Финляндия) и выражали в условных световых еди)ицах через15 и 30 мин инкубации при 37 С. Ин1587445 Коэффициент (К) изменения ХЛ при разных дозах препарата, мг/,мл Проба крови 10,0 1,0 0,1 Обработаннаянуклеинатомнатрия и нецентрифугированная 0 э 38 ФОв 12 э 08+О э 09 0 91 йО 18 То же, после2-кратного отмывания 1,5110, 12 1,0610, 11 0,69+0,12 Фор мул а из обр ет ения Составитель А,ДонцовТехред М,Дидык Редактор О.Юрковецкая Корректор П. 1:уска Заказ 2417 Тираж 529 ПодписноеВНПУИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 тенсивность ХЛ определяли как светосумму трех измерений. Результаты учитывали по степени угнетения ХЛ в кюветах с аллергенами по сравнению стаковой в кюветах без них. О наличиисенсибилизации к исследуемому аллергену судили по величине коэффициента(К) изменения светосуммы.ХЛ. За положительный результат (напичие аллерги" Из таблицы видно, что ХЛ проб крови, не отмытых от нуклеината натрия, в дозе 10 мг/мп наблюдается гасящее ХЛ действие нуклеината натрия за счет вероятной химической реакции с люминолом, После отмывки от препарата выявпено стимулирующее действие нуклеината натрия в дозе 1,0 мг/мп на лейкоциты крови, что проявилось в повышении К более 1,51, Таким образом, предлагаемый способ позволяет оценить действие различных веществ на функцио- нальную активность лейкоцитов крови.Способ предполагает использование 40 микрообъемов крови, поэтому может быть использован в педиатрии или у мелких животных. Способ позволяет также выявить сенсибилизацию организма к различным аллергенам и химическим 45 веществам, поскольку исключен этап ческой альтерации лейкоцитов и, в связи с этим, снижение ХЛ в пробах с АГ)принимали К, равное 0,80 и ниже, Отрицательный результат расценивали приК, р авном О, 81-1, 19Результаты изучения действия нукле"ината натрия на клетки крови приведе"ны в таблице, .предварительной инкубации крови с ин дуктом ХЛ, способный изменить реактивность гранулоцитов к исследуемому веществу,Способ определения токсического повреждения лейкоцитов, включающий инкубщию цельной крови с токсическим веществом, добавление люминола и измерение уровня хемилюминесценции пробы по сравнению с контролем, о т л и" ч а ю щ и й с я тем, что с целью повышения чувствительности способа, пробы крови после инкубации с исследуемым веществом дополнительно отмывают двукратным: центрифугированием, а люминол используют в концентрации 1 ОЗМ