Способ определения в-лимфоцитов крови человека

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИК 19) (1 5 4 С О 11 33 53 ГОСУДА ПО ИЗОБ ПРИ ГКН ТВЕННЫЙ КОМИТЕТЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯСССР БРЕТЕНИЯПИСА ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ мед ицинс к Павлова. - 1987, 9 7 В -ЛИМФО ЦИТО анализа путем сации и отмывки цы полистирольно) Из про цед а упрощ едициключения этапо и мое има, а и, кроме т при оце са челов массовых овано стату испол еског жет бы олог У роведении акже и оло г ич ь иэоб табл ских обследованииИзов частбыть и сится к медицин ологии, и может етение и Льзовано и а человека ассовых им ний,изобретени имму ри ак при проских о стату нолог ведении обследоЦель щение в способа вляется сокра ни анализа и у об твляют следу азодл ич ес тво ием предпанше леи полис ти аст л.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕКРОВИ ЧЕЛОВЕКА бретение относится к стности к иммунологи В каждую лунку микрокаме мунологических реакций (и расаки) вносят по 0,005 м тов в концентрации 1,0-1, 0,005 мл суспензии частиц льного латекса с диаметро ретения - сокращение срока анализа иупрощение способа, У обследуемых проводят забор крови, выделение лимфоци-,тов, инкубацию их с частицами полистирольного латекса с диаметром частиц 2,2 мкм в концентрации 6,0-7,01 О /мл, затем препараты высушивают,окрашивают по Лейшману и подсчитывают число роэеткообразующих клеток на100 лимфоцитов и по их количеству определяют В-лимфоциты человека. Всравнении с прототипом сокращено в2 раза время анализа, В результатеиспользования полистирольного латекго латекса дают одинаковые результаты независимо от сроков их хранения. 2,2 мкм в концентрации Ь,О 107/мл Камеры центрифугируют 5 м при 1000 об/мин, инкубируют 30 мин при 4 С, фильтровальной бумагбй удаляютнадосадок, камеры высушивают и окрашивают по Лейшману. При микроскопировании подсчитывают количество роэеткообраэующих лимфоцитов на 100 лимфоцитов (эа розетку принимают лим фоцит, присоединивший 3 и более частиц полистирольного латекса)П р и м е р. У 14 практически здо ровых людей определяли колВ-лимфоцитов с использовангаемого способа.Полученные результаты приведены в1527591 мя как длительность по известномуспособу 120-135 мин.Кроме того, при хранении эритроциты мьипи (известный способ) теряютсвою активность (срок хранения не более 1 сут), а частицы полистирольноголатекса дают одинаковые результатынезависимо от сроков хранения.1 ОФормула изобретения Способ определения В-лимфоцитовкрови человека, включающий забор кро ви, выделение лимфоцитов, инкубациюих в присутствии индикаторных частиц,подсчет роэеткообразующих клеток,отличающийся тем,что,сцелью сокращения времени анализа и 20 упрощения способа, в качестве индикаторных частиц используют частицыКоличество роэеткообраэующих лимфоцитов, Х Обследованный Полисти- Меламин- Реэольнаярольный формальде- смолалатекс гиднаясмола Ренольнаясмола Эритроцитымыши Нет розеток 24 20 20 19 18 22 27 23 24 20 21 26 68 65 69 77 72 60 48 40 43 54 53 41 Для проверки специфичности контакта В-лимфоцитов с частицами полисти 1 рольного латекса были проведены опыты по сравнению частиц полистирольного латекса с частицами меламинформальдегицной, ренольной и реэольной смол. Для этих целей проводят реакцию розеткообраэования с соответствующими индикаторными частицами, используя лейкоциты капвллярной крови 6 здоровых доноров.Результаты представлены в табл. 2. Из табл. 2 видно, что только частицы полистирольного латекса даютрезультаты, сопоставимые с результатами роэеткообраэования с эритроцитами мыши,Кроме того, отдельная серия опытов былапосвящена выяснению вопросазависят ли результаты от диаметрачастиц полистирольного латекса. Дляэтого у 9 здоровых доноров определяли количество В-лимфоцитов по предлагаемому способу, используя полистирольный латекс с диаметром частиц2,2 1,95, 1,8 мкм. Было выяснено,что в диапазоне 2,2-1,8 мкм результаты роэеткообраэования не зависятот диаметра частиц полистирольноголатекса. В предлагаемом способе отсутствуют этапы фиксации глутаровым альдегидом который является сильным канцерогеном) и отмывания клеток физиологическим раствором. Кроме того, более чем в 10 раз сокращена длительность этапа приготовления суспензии индикаторных частиц. Общая длительность анализа предлагаемым способом составляет не более 60 мин, в то юре 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 26 20 32 19 25 27 7 21 20 33 37 24 29 17