Способ получения антител

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советскнк Социалистически Республнк(23) Приоритет Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий. 5 (088.8) ОпубликованО 05.01,80 Бюллетень Йо 1 Дата опубликования описания 080180(71) Заявитель курский государственный медицинский институт(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ 1Изобретение относится к медицине, в частности к получению антител на ла- бораторных животных.В экспериментальных иммунологйческих исследованиях для получения интен- сивного.иммунйого ответа мелких лабораторных животных иммунизируют чуже-" родными эритроцитами крупных животных, например барана, осла, лошади.При использовании с этой целью эритроцитов мелких лабораторных животных близких видов развивается слабо выраженный иммунный ответ.Известен способ получения антител путем повышения иммуногенности эритроцитов барана, заключающийся в том, что группу крыс, являющихся донорами сыворотки, подвергают прогреванию в термостате в течение 40 мин при 40 С . Прогревание повторяют четыре дня под О ряд. Обескровливание проводят через два часа после последнего прогрева- ния. Обработку эритроцитов барана сывороткой крыс производят следующимобразом: 0,15 мл отмытых эритроцитов смешивают с 2,5 мл сыворотки, после 4-часовой инкубации при 37 фС эритроциты отделяют центрифугированием в течение 10 мин при 3500 об/мин и дважды отмывают 10 мл холодного изотонического раствора хлористого натрия, Отмытые эритроциты используютдля иммунизации крыс (1).В указанном способе для иммунизации мелких лабораторных животных используются эритроцитй барана - крупного животного отдаленного вида, приобретение и содержанйе которого требует значительных затрат. Крометого,взятие крови должно производиться встерильных условиях, Операция производится только человеком, имеющимопределенный опыт,Цель изобретения - снижение затратна получение антител путем использования эритроцитов мелких лабораторных животных для иммунизации животных близких видов.Поставленная цель достигается способом, включающим иммунизацию лабораторных животных эритроцитами предварительно прогретых животных близкихим по виду с последующим выделениемиз сыворотки иммунизированныхживотных целевого продукта,Иммунизацию лабораторных животныхцелесообразно проводить эритроцитамиукаэанных прогретых животных при температуре 40-41 фС по 40-50 мин в течение 4-5 дней,7.1 (б. унизация ей эритр ами про" тых крыс Имм ци гр Р с 0,09 5.33(4.00" 0 259.20) (0,00-555,5) Иммунизация мышей эритроцитами ин . тактных крыс 11.2О П олученн ном пример способа и ми, получа качестве д 5 животных и зультаты лнения п ние их с при испо чужерод влены в в конкретедлагаемогорезультатаьзовании в,ых крупныхабл. 2, из,е вып сравн емыми оноро редст Иммунизацию лабораторных животных целесообразно проводить эритроцитами ;в дозе 2,4 х 10 -4 х 10 З клеток на 100 г живого веса.У иммунизированных животных опре: делякт- титры антител иэвестны 4 и реак циями, например реакцией прямой ге"магглютинации. В эти же сроки опре деляют розеткообраэующую способность клеток селезенки (РОК) при смешива- е 7 Иммунизация 9 7.22мышей эритро- (6.00цитами прогретых крысР сОСтатистическую обработку произво дят путем вычисления средних арифметических величин и оценки существейности их различий с помощью непара""метрическихкритериев статистикиВилкоксона-Манна-уитни,В результате испытаний установ- лено, что иммунологические показатели у животных,иммунизированных эри"троцитами термообработанных доноровблизких видов, статистически достоверно выше, чем у животных, иммунизированных эритроцитами интактных жи,вотных. Полученйые результатыСвиде-тельствуют о повышении иммуногенности эритроцитов прогретых крыс,Эффект получения иммуногенностиэритроцитов тер 4 ообработанных животных достигается предположительно засчет повышения количества (или активности) протеолитических Ферментов всывороткекрови и воздействия их намембрану эритроцитов, в результатена клеточной поверхности происходитобнажение скрытых антигенных детермйнант. Следствием изменений повер- ности эритроцитов является повышение-"-,йх йммуногенньи свойств. Это позволяет их использовать для иммунизациижив отных,йии их с эритроцитами интактных крыс и количество антителообразующих клеток (АОК) . Полученные данные представлены в 5 табл, 1 и характериэуют увеличениетитров антител по сравнению с контролем, что свидетельствует о повышении иммуногенности эритроцитов прогретых лабораторных животных, .Та блица 1 1530.8 185. 8. 00) (1277. 7-2055. 5) (1 07. Пример выполнения способа получения антител путем повышения иммуно-генности эритроцитов мелких лабора- О торных животных и иммунизации их заключается в следующем .Группу животных, например крыс,в течение 4-х дней прогревают в тер-мостате по 40 мин ежедневно при 40 С.Через 30 мин"после последнего прогревания кровь собирают в пробирку срастворОм цитрата (1 объем крови + 1объем 5 Ъ-ного цитрата) и трижды отмывают клетки холодным изотоническимраствором хлористого натрия путемцентрифугирования при 2500 об/мин вечение 8 мйн.Полученные эритроциты, обладающиеовышенньми иммуногенными свойстваи, однократно вводят внутрибрюшинно,апример, мышам в дозе 4 х 10 ф клетокна 20 г веса тела, после чего известными приемами изучают реакциюорганизма на введение антигена,ЭритроцитамбаранаЭритро 528158 166,1 1090 89 цитам такыс 5,33 11,2 1245 259,2 283 161334,4 Эритроцитампрогретыхкрыс 5,8 192 3 7 форула изобрете прогдуа 2, Способ по п. 1 о т л и 45 щ и й с я тем, что иммунизацбораторных животных проводятцитами указанных животных, прпри температуре 40-41 С по 40в течение 4-5 дней.5 3. Способ по и. 1 о т л и ч а юц и й с я тем, что иммунизацию лабораторных животных проводят эритроцитами в дозе 2,4 з 10 -44108 клетокна 100 г живого веса."55 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Яхонтов Ю.О., Прокопенко Л.Г.Влияние сыворотки крыс, подвергнутыхдействию умеренно высокой внешней щ 0 температуры, на иммуногенность эритроцитов барана. - ЗМЭИ, 1975, Р 4,с. 78-81 (прототип) .1раж б 73 Подпи ное чаю ию ла-эритроогретых -50 мин сфилиал ППП Патент, г, Ужгород, ул, Проектная,которой видно, что количество РОК,БОК и Год титров антител у мышей,иммунизированных эритроцитами "про-гретых крыс, значительно выше, чему мышей,; иммунизированных эритроцитами интактных крыс. Количество РОК 5в 3-й группе животнйх в 6 раз выше,чем во 2-й группе, БОК - в 11 раз,1 Показатели РОК, БОК и титра при использовайииразличных Полученные данные свидетельствуюто возможности использования для иммунизации мышей эритроцитов прогретых крыс и позволяют отказаться "отприменения для этбй цели эритроци- З 5тов барана,Применение для иммунизацнимелкихлабораторных животных эритроцитбв животных близких видов для полученияантител значительно повышает эконсмическую эффективность исследований,так как отпадает необходимость в со"держании крупных животных, напримербарана, осла, лошади, Кроме того, нетребуется специальной подготовки че.ловека, владеющего методикой взятиякрови, а также не требуется вспомогательный персонал в этой операции.Снижается расход реактивов на приготовление консерванта крови потому,что в отдельных случаях эритроциты,например, крыс можно брать ехфеарого,что зйачительно снижает затрату времени для проведения эксперимента, Впредлагаемом способе получения анти.тел для приготовления эритроцитбвСповышенной иммуногенной способностьюне требуется воздействуюцих на нихлекарственных препаратов или сывороток, обладающих иммуностимулирукцейактивностью. В связи с этим отпадаетнеобходимость в специальных сыворот"ках,ИПИ Заказ 8383/3 Ти бои титров антител в .3-й группе также выше, чем во 2-й (7,22 и 5,33 соответственно), Количество БОК в селезенке и титров антител в животных 3-й группы не отличаются от соответствующих показателей животных 1-й группы, иммунизировайных эритроцитами барана.2 антител в тканях животныхдоноров эритроцитов 1. Способ получения антител, включающий иммунизацию лабораторных животных эритроцитами с последуюцим выделением из сыворотки крови этих животных целевого продукта, о т л и ч а ю ц и й с я тем, что, с целью снижения затрат на получейие антител, иммуниЗацию лабораторных животных проводят эритроцитами предварительноретых животных близких им по ви