Способ обнаружения энтеробактерий в воде

(71) Кишиневск л. Р 24государс Б нн медицинскии инст (72) В.М.Никитин и Л.А,Сичинский (53) 616-078 (08 (56) Антибиотики технология, 1985 В.А.Наха.8)и медицин Р 9, с. кая био 62"665.ЕРОБАКТЕ 54) СПОСОБ ОВНАИй В ВОДЕ 57) Изобретениецинской микробио РУЖЕНИЯ сится к медиии, в частност ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ С ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТК 801406489 А 1 ЗОБРЕТЕН к способам санитарно-бактериологического исследования воды. Цель изобретения - ускорение способа. Для осуществления способа исследуемую воду.пропускают через мембранные фильтры,затем непосредственно на поверхностьфильтра с микроорганизмами наносятиммунопенициллиназный конъюгат, инку"бируют, а затем последовательно нано"сят субстрат - пенициллин и йодинолв качестве индикатора, Определяютналичие энтеробактерий по исчезновению синей окраскч в течение 30 -50 с. Длительность определения 1,52 ч, 1 з и.флы,Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к спо" собам санитарно-бактериологического исследования воды.Цель изобретения " ускорение способа.Способ осуществляют следующим об" фазом.П р и м е р 1, Получают сальмо" 10 неллезный иммуноферментный конъюгат (ИФК): 0,2 мл антисальмонеллеэного против сальмонелл брюшного тифа) амма-глобулина вносят во флакон с енициллиназой (1 млн ЕД) и затем 15 обавляют 0,05 мл 0,1%-ного раствора лутаральдегида, Полученную смесь ыдерживают при +4 С 16 ч, после чефо ее переносят в целлофановый мешочек .гподвергают диализу в дистиллированНой воде в течение двух суток и фиэ- астворе рН 7,0 - сутки. Готовый ИФК роверяют на антительную и фермента 1 ивную активность,Фильтрование исследуемой жидкости; 25 фильтруют через МФ Р 3 7 объемов по 100 мл водопроводной воды, искус" Ственно зараженной сальмонеллами брюшного тифа в концентрациях от 3 10 до 3 10 микробных клеток на 30мл. Контролем служат две пробы во,- фы, незараженные патогенными микро-. организмами а также две пробы воды," зараженные другими микробами кишечйой группы (шигеллы Зонне), профильтрованные также через нитроцеллюлоэйые Мф У 3 в тех же объемах.Постановка иммуноферментной реакции на МФ и учет с помощью йодинола:ембранные фильтры после фильтрации 40ереносят, не переворачивая, на чистые чашки Петри и на поверхность каждого наносят по 0,05 мл сальмонеллез- Ного ИФК в рабочем разведении (1 1000).45Закрытые чашки с увлажненными кусочками ваты ставят в термостате при 37 С на 1 ч, Затем для удаления несвяэавшегося с бактериями ИФК на мембранные фильтры, уложенные на 8-9 слоев фильтровальной бумаги, наносят по 20-30 мл промывочного фосфатнобуферного раствора рН 7,4 с добавлением твинав разведении 1:5000, Все мембранные фильтры (опытные и55 контрольные) переносят в чистые чашки Петри и на них наносят по 0,05 мл пенициллина, иМкубируют при 37 ОС на 10 мин, затем наносят по 0,05 мл йодинольного индикатора и сразу учитывают результаты. В положительных случаях синяя окраска йодинольного индикатора на фильтре исчезает в течение 30-50 с, а в отрицательных и конт" рольных пробах исходная окраска сохраняется в течение более 5 мин. Результаты учета иммунопенициллиназного метода при его постановке на мембранных фильтрах и оценке с помощью йодинольного реагента показывают, что предлагаемый способ позволяет в течение не более 1,5-2,0 ч определить в исследуемой жидкости концентрацию микробов не менее 3 х 1 О микробных тел/мл, что во времени значительно превосходит классический иммунопенициллиназный метод (19"25 часов),П р и м е р 2. Предлагаемым и известным способами параллельно испытаны 35 сточных вод на различных этапах очистки в которых бактериологическим методом обнаружены сальмонеллы: Б.1 ур 1 шпцг 1 шп - 20, Б.Хна - 3,Б.Саграда - 1, Б.ЮгЬоч - 3, Б.хпГап 1 э - 2, Б.ашегзГоог 1 - 3, Б.шапсез 1 ег (С) - 2, Б,1 опйопПолученные результаты свидетельствуют о том, что уже через 1,5 ч обнаружены сальмонеллы во всех пробах сточных вод (100%) с помощью предлагаемого метода, в то время как при использовании прототипа результаты получают через 25 ч,Формула изобретения1. Способ обнаружения знтеробактерий в воде, включающий концентрирование микроорганизмов, соединение их с иммунопенициллина.зным конъюгатом, инкубирование, последовательное добавление субстрата и индикатора и учет результатов реакции по изменению окраски, о т л и ч а ю щ и й - с я тем, что, с целью ускорения способа, концентрирование осуществляют путем пропускания через мембранный фильтр и реакцию проводят непосредственно на фильтре, на который наносят пеагенты.2, Способ по п,1, о т л и ч а ю - щ и й с .я тем, что.в качестве индикатора используют йодинол.