Способ подготовки эритроцитов к электронно микроскопическому исследованию

СОЮЗ СОВЕТСОЦИА ЛИСРЕСПУБЛ х СКИХ119) (11) . 11 4 С 01 М 33/48 АВТОРСН СВИДЕТЕЛЬСТ ВАН (57 пре ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫ(7 1) Институт цитологии АН СССР и Объединенный специализированный родильный дом У 1(56)Крымский Л.Д., Нестайко Г.В., Рыбалов А. Г. Растровая электронная микроскопия сосудов и крови. М.: Медицина, 1976, с. 168.) Изобретение относится к медицинедназначено для диагностики патологии крови (напр. при иммунной несовместимости крови матери и плода). Цель изобретения - упрощение способаза счет сокращения стадий и дополнительное повышение точности исследования нарушений структуры эритроцитов. Для этого пробу крови 1 мл изпупочной вены в сухой пробирке бездобавления антикоагулянта оставляютпри 2-4 С 30-40 мин до образованиясгустка, кусочки которого фиксируют,обезвоживают и сушат в аппарате критической точки. Затем напыляют в вакууме и просматривают в сканирунюцеммикроскопеСпособ позволяет исклю-лчить взятие биопсийного материала дляподготовки образца, а использованиесгустка предотвращает механическоеповреждение эритроцитов, так как втечение всей обработки эритроцитызаключены в сетку, образованную нитями фибрина.1399680 Формула изобретения Способ подготовки эритроцитов к электронно-микроскопическому исследованию, включающий фиксацию образца, сушку и напыление в вакууме парами металла, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа за счет исключения стадий и дополнительного повышения точности исследования нарушений структуры эритроцитов, в качестве образца используют сгусток крови. А. Агуреевавчук Корректор А, Обручар Редактор М, Бандура Заказ 2 б 62/4 б Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Иосквау Ж 35 р Раутская наб д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к медицинеи может быть использовано при диагностике патологии крови, напримервызванной иммунной несовместимостьюкрови матери и плода.,Целью изобретения является упрощение способа за счет сокращения стадийи дополнительное повышение точностиисследования нарушений структуры 10эритроцитов,Цель достигается тем, что взятуюв сухую пробирку кровь в количествене более 1 мл без добавления антикоаогулянтов оставляют при +2 - 4 С в течение 30-40 мин до образования сгуст-ка, кусочки которого затем фиксируют,обезвоживают, подвергают сушке в аппарате критической точки, напыляют ввакууме и просматривают в сканирующем 20микроскопе вСпособ осуществляют следующим образом.Взятую изпупочной вены в обычнуюсухую пробирку кровь в количестве 1 мл 25без добавления антикоагулянтов оставля:ют при 2 С до образования сгустка(примерно 30-40 мин). Сгусток извлекают из пробирки, острым лезвием иссекают кусочки размером 1-2 мм, которые переносят в фиксирующий состав -47-ный глютаровой альдегид. Фиксацияапродолжается 3-4 ч при +4 С. Затемпроизводят обезвоживание в спиртахвозрастающей крепости и изоаминоцитате, далее сушку в аппарате критичес-.кой точки ( НИасМ Сгса 1 РохпйОгуег НСР), После этого материалмонтируют на предметном столике и напыляют в ваку;"м парами металлов вкатодном испарителе (фирмы 1 ей). Изучение препаратов производят в скани рующем электронном микроскопе 1 БИ == 200.Эффективность оценки степени очист-,5ки крови новорожденных при иммуннойпатологии предлагаемым способом былаподтверждена в процессе изучения эритроцитов при гемолитической болезниноворожденных по резус-фактору и пос 50СоставительТехред А.Кр ле ее лечения гемосорбцией в Специализированном род, доме У 1 г. Ленинграда. Наблюдалось 17 новорожденных. Кровь больных исследовали до и после гемосорбции с углем АДБпри перфузии равной 2 и 4 объемам циркулирующей крови (ОЦК), а в качестве контроля - 8 здоровых новорожденных, Все новорожденные доношенные, с оценкой по Апгар при рождении не ниже 7 баллов. У здоровых новорожденных эритроциты имеют размер 7-8 мкм, двояко- вогнутую или уплощенную форму и ров ную поверхность клеточной оболочки. У больных детей размеры эритроцитов увеличены до 15 мкм, форма шаровидная или неправильная. Поверхность округлых эритроцитов отличается наличием мелких полусферических выступов, размер которых составляет около 0,03 мкм. После гемосорбции некоторая часть эритроцитов деформируется (количество их увеличивается в случаях перфузии 4 ОЦК). Однако на поверхности эритроцитов существенно уменьшается количество мелких полусферических выступов размером до 0,03 мкм.Упрощение способа достигается за счет исключения стадии взятия биопсийного материала для подготовки образца. Использование сгустка предот-, вращает механическое повреждение эритроцитов, так как в течение всей обработки эритроциты заключены в сетку, образованную нитями фибрина.