Способ гистохимического определения сульфгидрильных групп в биологической ткани

(5 И 4 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИН А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ следовательфизиотера п и и Понизовская убинина остранна А ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54) СПОСОБ ГИСТОХИМИЧЕС 1(ОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ (57) Изобретение относится к медицине, точнее - к гистохимии для определения сульфгидрильных групп в биологических,80135775 1 канях. Цель изобретения - повышение точности спосооа за счег более полного окрашивания митохондрий и ядер клеток. Для зтого, осуществляя гистохимлческое определение сульфгидрильных групп в биологических тканях (печени, коже, мышцах), органы фиксируют в 8000-ном этиловом спирте, содержащем 100-ную трихлоруксусную кислоту в соотношении 1:1, замораживают с помощью углекислоты или хлорэтила. Затем срезы окрашивают формаллнатом ртути в течение 6 в 10 и при 50- 56"С и рН 3,5 - 6,0. Структуры, содсржащ е ЯН- группы, выявляются в виде разрозненных редких Гранул (глыоок) тсмного оранжево желтого пвета в срезах мыши и гранул а светлого оранжево-желтого цвета.уще распределенных в срезах кожи и пече 1 и.1357757 Фор,у,га зооретвния Состанитссь М. ПознякРедактор В. Данко Тсхред И. Берсс Корректор В. ГнрнякЗаказ 550440 1 рахн 776 1 одннсноеВИИИПИ Гол царственного котитста С,(,(ЗР го снам изобретений и открьтнй113035, Москва, Ж 35, 1 ауНская наб., гь 4,51 роизво,(ствснно-нолнгр;и)иисскос ирслиринс, г. У.к ород, л. 11 росктна, 4 Изобретение относится к медицине, в частности к истохимии для определения сульфгидрильных групп в биологических гканя:(.Целью изобретения является повышение точности способа за счет болес полногоокра шива ния митохондрий и ядер клеток.Ориягер г. Осуществляя гистохимическоеопределение сульфгидрильных групп в оиологическпх тканях (печени, коже, мышцах).Дггя этого органы фиксируют в 80 о-нозэтиловом спирте, содеркацем 1 о-Ную трихлоруксусную кис,оту в соотнопенин 1:1,замораживают с помощью углекислоты илпхлорэтила.Полученные срезы ткани толщиной 8О мкм помещают в кювету с водно-этанольным окрашиваюцим раствором комплекса 1-(хнноксали г)-3-метил-(гг-кзрбоксифенил)-формазана с ртутью, который готовят смешиванием спиртового раствора формазана концентрации 10могь/г Р Водногораствора игграта ртути концентрацииООзь/71, рН 3,5. ВьдерживзОт в термостате при 53 С в течение 6 ч. Про.;ываютсрезы в дистиллированной Воде (т=2 мин)96-ном, спирте (т=2 мин), просветляют вксилоле (т=2 мин), заключают в бальзам.Структуры, содержащие 8 Н-группьп выявляются в виде разрозненных редких гранул (глыбок) техНого оранжево-же,п огоцвета в среза.( мышц и светлого ораня(ево-желтого цвета, гуще распределенныхв срезах кожи и печени.Для проверки специфичности реакции(блокирование ЬН-групп) контрольные срезы предварительно обрабатывают раствором сулемы концентрзции 10 - могь 77 в гечение 2 ч при 53 С, рН 7, затем выдеркивают в окрашивающем растворе ртутьорганического комплекса в тех же условиях. Реакция специфична, так как блокирозанные 8 Н-группы после ооработки в окрашиьаюцем растворс ртутьорганическогокомплекс нс приобретают желто-оранжеВуо окраску, прпсуцую выявленным сульфгидрильным группам,Огг,гер 2. Для осуцествления гистохимпческого определения сульфгидрильных, групп в депарафинированных срезах ткани птедвззитегьно фиксируОт Оэ Ганы неитральным 1 Оо-ных формалином или 80 о 4- ным этиловым спиртом в соотношении 1:1.Затем заливаот органы в парафин, готовя срезы толциной 5 - 7 мкм, депарафпнирх ют и промываот этпловым спиртом, дисИг и рогззнной водой. Срезы ткани помещзют в кювету с водно-этанольным раствором комплекса 1-(хиноксалил) -3-метпл- -5- (и-карбоксифенил) -формазана с ртутью.УстаНавгИвази рН б, Г= 56 С, время выдержкп в растворе т= 7 ч. Затем промывзют в дистиллированной воде (т=2 мин).96"-нох спирте (т=2 хИн), просветляют в ксилоле, заключают в бальзам. Структуры, содержзщие ЯН-группы, выязляются в виде редких гранул темного оранжево-желтого цвета в срезах мышц и светлого оранжево-жегТого цвета в срезах печени и ко)ки. На контрольных срезах проверяют сцепифичность реакции, выдерживая срезы после блокировки 8 Н-группы в окрашивающем растворе ртутьорганнческого комплекса при рН 6, Г= 56=С в течение т= - 7 час. Способ гистохимического определениясульфгидрильных групп в биологической ткани путем фиксации в растворе трихлоруксусной кислоты с посседуюгцим окрзшиванием в красителе, огзгичагогчйся тет 1, 35 что, с целью повышения тоности способаза счет более полного окрашивания митохондрий и ядер клеток, фиксатор дополнительно содержит 80-ный этиловый спирт нри соотношении спирта и трихлормксусной кислоты 1:1, а В качестВе крзситегя пэиме;яют растворы формазаната ртути с рН 3.5 - 6,0, при этом окра ш и ванне проводят в течение 6 -1 О ч при 50 56 С.