Способ количественного определения n-ацетилглюкозоаминил-n ацетилмурамовой кислоты

(19) (11) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ТЕН РСКОМУ СВИДЕТ СТВ(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВНИЯ Б-АЦЕТИЛГЛ 10 КОЗОМУРАМОВОЙ КИСЛОТЫ осится к биохия - повышение Веверис 966, ч.241,ПИСАНИ ЕННОГО ОПРЕДЕЛАМИНИЛ-И-АЦЕТИЛ 151) 4 С 01 11 31/16(57) Изобретение отн мии. Цель изобретени чувствительности сп и соляную кислоту по на водяную баню и г охлаждения добавляют тетрабората калия и 100 С. После охлажде твор и-диметиламиноб меряют оптическую пл дуировочному графику рацию дисахарида. соба. Дисахарид ещают в колбе дролизуют. После раствор щелочи, ыдерживают при ия вводят раснзальдегида, изтность и по гранаходят концент1339443 Подписное ВНИИПИ Заказ 4213/33 1 и аж 776 Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к биохимии ъгикрооргапизмов, в частности к способам количественного определения дисахарицов.Цель изобретения - повышение чувствительности способа за счет предварительной обработки образца 0,45- 0,55 М кислотой при 95-100 С в течение 15-20 мин. 10П р и м е р 1. 2,13 мг дисахарида (с содерканием основного вещества по способу ТУ 86,07) помещают в колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5 мл 0,45 М раствора НС 1, колбу помещают ь 15 водяную баню и гидролизируют прио99 С в течение 20 мин. После охлакдеия добавляют раствор 11 аОН до рН 6.,9, доводят объем колбы до метки дистиллированной водой, Из приготовленного 20 раствора в химические пробирки со шлифом берут по 0,5 мл, добавляют 0,1 мл раствора тетрабората калия, закрывают пробками и выдерживают 5,5 мин прио100 С. После охлаждения до комнатной 25 температуры добавляют 3 мл раствора и-диметиламинобензальдегида и выдеро живают в термостате 20 мин при 37 С. После охлаждения до комнатной температуры измеряют оптическую плотность 30 ггри 585 нм относительно холостого опыта содержащего вместо анализируемого раствора 0,5 мл дистиллированной воды. Согласно г 1 змеренной оптической плотности 0=0,322 по градуировочному графику находят концентрацию дисахарида с,037 мг/О 5 мл.Согеркание дисахарида в анализи - руемой пробе- О 037 25 100 - 6402,13 0,5Относительное стандартное отклонение +1,27, Расхождение между наиболее отличающимися значениями трех параллельных определений +2,0% (абс.). 45П р и м е р 2, 2,45 мг дисахарида помещают в колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5 мл 0,55 М раствора НС 1, колбу помещают в водяную оаню и гидролизируют при 97 С 15 мин. После ох лакдения цобавляют раствор КОН до рН 6,5, доводят объем колбы до метки дистиллированной водой. Из приготовленного раствора в химические пробирки со шлифом берут по 0,5 мл, добавляют 01 мл раствора К ВО , закрывают пробирками и выдерживают 5,0 мин при 100 С. Далеепоступают по примеру 1.Согласно измеренной оптической плотности 0=0,367 по градуировочному графику находят концентрацию дисахарида сФ 0,042 мг/0,5 мл.Содержание дисахарида в анализируемой пробе0,042 25 1002,450,5Относительное стандартное отклонение +1,57. П р и м е р 3. 2,98 мг дисахарида помещают в колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5 мл 0,50 М раствора НС 10, колбу помещают в водяную баню и гидролизируют при 100 С 18 мин. После охлаждения добавляют раствор ИаОН до рН 7,5, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, Из приготовленного раствора в химические пробирки со шлифом берут по 0,5 мл, добавляют 0,1 мл раствора К ВО , закрывают пробками и выдержиовают 6,0 мин при 100 С. Далее поступают по примеру 1.Согласно измеренной оптической плотности 1=0,453 по градуировочному графику находят концентрацию дисахарида с=0,055 мг/0,5 мл.Содеркание дисахарида в анализируемой пробе0,0515 25 1002,980,5Относительное стандартное отклонение +1,87 формула изобретения Способ количественного определения М-ацетилгггюкозоаминил-И-ацетилмурамовой кислоты, включающий обработку образца тетраборатом калия ип-диметиламинобензальдегидом с последующим фотометрированием, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности, об -разец предварительно обрабатывают0,45-0,55 М кислотой цри температуре 95-100 С в течение 15-20 мин,затем щелочью доводят рН до 6,5-7,5,а обработку тетраборатом калия проводят в течение 5-6 мин,