Способ определения степени агрегации тромбоцитов

(5 в 4 С 01 И 33/80 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ЕПЕНИ АГРЕ 3 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(56) Вогп С.Ч.К, Аддгедаг 1 оп оКЬУоой рУае 1 еся Ьу адепояпе й 1 рЬояпаее апй 1 Ся геегяаЯ.-Масцге (.опт1962, 194, 927.54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ(57) Изобретение относится к способаопределения степени агрегации тромбоцитов при ее индуцировании агрегирующими агентами, Цель изобретения -801239602 А 1 повышение точности и специфичностиспособа за счет измерения степени агрегации тромбоцитов при использованиив качестве стимулятора тканевого тромбопластина. К 0,9-1,1 мл цитратнойплазмы добавляют смесь, составляющуюиз 0,08-0,11 мл тромбопластина и0,2207-0,300 Е раствора хлористогокальция, взятых в соотношении 1 : 1.Образец после добавления смеси перемешивают. С 10-ой по 15-ю мин послеперемешивания смеси определяют оптическую плотность образца. Индекс агрегации рассчитывают по соотношениюисходной оптической плотности к вели.чине ее максимального снижения19602 Составитель 11. АрткшинаТехред О.СопкоКорректор М. Максимишинец Редактор Л. Гратилло Заказ 3390/44 Тираж 778 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Мбсква, Ж, Раушская наб д, 4/5.Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 1 1 с.Изобретение относится к методам определения агрегационной активности тромбоцитов при ее индуцировании агрегирую 1 ими агентами, применяемыми в пабораторной практике в области физиологии и биохимии свертывания крови с исследовательскими и клиническими целями.Целью изобретения является повыш ние точности и специфичности способа за счет измерения степени агрегации тромбоцитов, обусловленной действием эндогенных стимуляторов,Кровь из вены 3 ц 8 ц 1 агз здоровых крыс (и) с массой 200 г берут в объеме 4 мл шприцем с 3,87-ным раствором цитрата натрия в соотношении 9:1 соответственно в силиконированные пробиркиПутем центрифугирования при небольшом числе оборотов (800 об/мин в течение 8 мин) получают ппазму, обогащенную тромбоцитами, с числом тромбоцитов 250000/мм . Плазму, обогащенную тромбоцитами помещают в пластиковую пробирку с несмачиваемой поверхностью.Стандратный тромбопластин из мозга крыс готовят по методу П.Д. Улитиной и Б.А. Кудряшова (1948). Для этого 1 г мозговой ткани при медленном добавлении 10 мл 0,857.-ного раствора ИаСХ растирают в ступке. Полученную тонкую суспензию тромбопластина затем прогревают 14 мин при 57-58 С и перед использованием центрифугируют(2000 об/мин в течение 20 мин) для удаления твердых частиц. Полученный тромбопластин хранят в холодильнике при 4 С. Используют надосадочную.жид.окость. Свертывающая активность тромбопластина, определяемая при 37 С в реакции: 0,1 мл тромбопластина + + О, 1 мл 0,025 М раствора СаС 2 + + 0,1 мл крысиной плазмы, составляет 14,5 с.К 0,9 мл термостатированной при 37 С плазме крыс, обогащенной тромбоцитами и имеющей оптическую плотностьО,ЯО (измерение производят на ФЗКМипи на нефелометре при зеленом светофильтре в кювете с поперечным сечением 1,003 мм), добавляют. 0,08 млстандартного тканевого крысиноготромбопластина и 0,08 мл 0,2207.-ногораствора СаСУ. Образец тотчас последобавления смеси перемешивают на маг нитной мешалке, стержнем с несмачивае.мой поверхностью со скоростью800 об/мин, С 10-ной по 15-ю минпосле добавления смеси и перзмешивания определяют оптическую плотность 15 образца, Максимальное ее снижениесоставляет 0,38 на 15 мин после добавления смеси. Индекс (И) агрегациирассчитывают при соотношенииисходной оптической плотности к 20 величине при максимальном ее снижении, И -= 2,09,Формула изобретения д Способ определения степени агрега.ции тромбоцитов в термостатированнойплазме крови, обогащенной тромбоцитами, путем добавления стимуляторов споследующим перемешиванием и определением степени агрегации тромбоцитовпо максимальному снижению оптическойплотности образца, о т л и ч а ю -,щ и й с я тем, что, с целью повыше ния точности и специфичности способаза счет измерения степени агрегации 35тромбоцитов, обусловленной действиемэндогенных стимуляторов, в качествестимулятора используют гомологичныйтканевой тромбопластин, при этом к0,9-1,1 мл цитратной плазмы добавляют смесь состоящую из 0,08-0,11 млтромбопластина и 0,220-0,3007 раствора хлористого кальция, взятых в соотношении 1:1, а регистрацию оптической плотности образца проводят с 4510-ой по 15-ю мин после добавлениясмеси.