Способ получения деполимеризованного гепарина

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9) И 1) 151)4 С 08 В 37 10 ЕККЫЙ КОМИТЕТ СССР ЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ ГОСУДАРС ПО ДЕЛА ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ПАТЕНТ 01 .80) весон,1 у(72) Ульф Пер Фредрик Линдал,рун Элизабет Бекстрйн, Джон 1 ОйЛеннарт Тунберг, Ларс-Оке ФранЛарс-Олов, Андерссон, Эрик 10 нгХолмер, Инга Хелена Сандберг иГунилла Седерстрем (ЯЕ)(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕПОЛИМЕРИЗОВАННОГО ГЕПАРИНА обработкой деполимеризующим агентом и выделениемцелевого продукта, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью сокращения длительности процесса, в качестве деполимеризующего агентаиспользуют азотистую кислоту илисмесь перйодата и перхлората натрия,а обработку проводят 20 мл азотистой кислоты на 1 мас.ч. гепарина всмеси воды и диметоксиэтана при ихсоотношении 1:1 при 1 О С 2 мин с последующим введением 2 мас.ч. ацетата натрия на 1 мас.ч. гепарина или водной смесью перйодата и .перхлората натрия при молярном соотношении 0,04:0,4 на 1 мас.ч,. гепа"рина и рН 3 в темноте.Составитель Т.МартинскаяТехред Л,Бабинец Корректор Т.Колб Редактор Л.Веселовская Заказ 310/61 Тираж 471ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Б, Раушская наб , ц,.4/5 Подписное Филиал ППП "Патент.", г,ужгород, ул.Проектная, 4 Изобретение относится к химии полисахаридов, конкретно к получению деполимеризованного гепарина, обладающего высокой биологической активностью.Целью изобретения является сакращение длительности процесса.Изобретение иллюстрируют следующие примеры.П р и м е р 1. 0,5 г гепарина, извлеченного из кишечника свиньи:, растворяют в 150 мл воды, охлажцаоют до 4 С и пропускают через колонку 3 х 7 см, наполненную Рочех50 11-28 (Н форма), размером частиц 200-400 мен (0,074 - 0,037 мм) . Затем колонку промывают 100 мл воды и промывочную жидкость смешивают с исходным раствором, Туда же добавляют 250 мл диметоксиэтана охлажденного до -20 ц С, и 10 мл изоамилнитрила, и полученную смесь при О С выдерживают 2 мин. Реакцию прекращают введением в реакционную смесь 10 мл 107-ного раствора аце" тата натрия. Затем вводят 5,2 л этанола, осажденный денолимеризованный гепарин выделяют центрифугированием. Полученный продукт растворяют в 500 мл 0,05 М раствора БаС 1 - 0,05 М раствор Трис-НС 1, рН = 7,4. Раствор фракционируют, разделяя его на порции по 100 мл посредством хемосорбционной хроматографии с использованием колоьпи, содержащей 75 мл антибромина - Сефарозы 0 (примерно 5 мг белка на 1 мл геля). Колонку элюируют с использованием солевого градиента (500 мл 0,05 М раствора МаС 1 - 0,05 М раствора Трис-НС 1):(500 мл Э М раствора ИаС 1 - 0,05 М раствора Трис-НС 1), основная часть используемого продукта проходит через колонку или элюируется при низ ком значении ионной силы (менее 0,4 мол. МаС 1), этот продукт не об 2090332ладает биологической активностью.Активные компоненты (очищенные производные гепарина) элюируются вширокой верхней части 0,5 М раствора БаС 1 и 3 М раствора 11 аС 1, чтосоответствуе";. 47. от исходного материала, Зти фракции собирают и обессоливают методом гель-хроматографии.Производные гепарина, полученные1 О и очищенные указанным образом, имеют размер молекулы, соответствующий размеру тетрадекаоктадекасахарида (мол.вес Зб 00-4800). Структурный анализ показывает наличие техже структурных компонентов,что и висходном материале, причем 1,-идуронозил-О-сульфат к -4)-11-сульфо-Р-гпокозамин-б О-сульфат являетсядоминирующим дисахаридным звеном мо 20 лекулы, Количество несульфатированнойидуроновой кислоты увеличивается сбХ в исходном материале до 1 б 7.П р и м е р 2. 0,5 г гепаринарастворяют в 250 мл водного раствора, содержащего 0,02 моль Ма 01,0,2 моля 11 аС 104 и 0,05 буферообразующего раствора циртрата натрия,рН = 3. После выдержки в течение Зчов темноте при 4 С окисление преЗО кращают введением малярного избытка 0-маннита с последующим диализом раствора и сушкой при темпера"отуре ниже 0 С, Расщепление полисахаридной цепи осуществляют обработкой продукта щелочью Ь мг/мл вод."ного раствора при рН = 12) прикомнатной температуре. Спустя10 мин раствор нейтрализуют 1 Мраствором уксусной кислоты и подвергают обессоливанию посредствомгель-хроматографии на декстране(Сефадекс С). Полученный проОдукт может быть восстановлен боргидрицом натрия.д; Гель-хРоматогРафия показывает,что полученный гепарин имеет размермолекул, соответствующий 10"25 сахаридным звеньям,