Способ определения активности -нафтилацетатэстеразы

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АК ТИВНОСТИ Р -НАФТИЛАЦЕТАТЭСТЕРА ЗЫ путем инкубации содержащего фермент(5 Ц 4 А 61 В 10/00; 6 01 Х 33/4 материала с в -нафтилацетатом и последующего определения окращен ного продукта реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа при определении активности в желудочном соке, в качестве содержащего фермент материала используют отфильтрованные порции желудочного сока - базальную и при стимуляции секреции гистамином или пентагастрином, максимальную инкубацию проводят при рН 6,6 и температуре 37 С, а оптическую плотность определяют при 328 нм.1175441 Составитель Н. ГуляеваТехред И. Верес Корректор А. ТяскоТираж 722 ПодписноеВ НИ И ПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретении и открытий113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Редактор Н. ШвыдкаяЗаказ 5245/4 Изобретение относится к медицине, а именно к способам исследования желудочного сока,Целью изобретения является повышение точности способа при определении активности в желудочном соке.Пример. Больной М., мужчина 35 лет, находившийся в клинике заболеваний желудка по поводу язвенной болезни, утром натощак подвергнут желудочному зондированию под контролем рентгеноскопии. Порцию желудочного сока натощак отсосали в течение 10 мин шприцом и выбросили. Затем в течение 1 ч собрали, постоянно отсасывая шприцом, порцию базального сока. Подкожно ввели гистамин гидрохлорид 0,1%-ный раствор из расчета 0,025 мг сухого вещества на 1 кг массы больного (1,75 мл). После стимуляции секреции гистамином снова шприцом отсосали в течение 1 ч максимальную порцию желудочного сока. Таким образом, получили 100 мл базальной порции и 110 мл максимальной порции сока. Отдельно каждую порцию профильтровали через бумажный фильтр синяя лента и поставили в холодильник.Приступили к изготовлению субстрата, для чего взвесили на аналитических весах 2 мг очищенного бета-нефтилацетата, растворили его в 2 мл ацетона и довели фосфатным буфером до 10 мл. Фосфатный буфер для этого приготовили из 18,5 мл 0,2 М МаНРОх 12 НаО и 81,5 мл 0,2 М ХааРО 4 Х Х 2 НО и 100 мл дистиллированной воды. В кювету с 3 мл раствора бета-нафтилацетата прилили 0,2 мл базальной порции желудочного сока больного, рН смеси 6,6. Смесь осветили при длине волны спектрофотометра 328 нм, Прибор настроили на О. Затем кювету со смесью поместили на водяную баню инкубации при 37 С на 5 мин по секундомеру. После инкубации определили экстинкцию смеси на спектрофотометре при длине волны 328 нм. По калибровочной рабочей таблице, построеной по бета-нафтолу, определили, что экстинкции пробы базальной порции сока 0,057 соответствует концентрации бета-нафтола 0,3566 Х Х 10 ммоль/мл. Подставив в формулу чис 4ловые значения, вычисляют в-нафтилацетатэстеразную активность каждой порции сокасчуз 110 где А-В -нафтилацетатэстеразная активность желудочного сока в бетанафтоловых единицах (1 б-н.е. == 10 ммоль бета-нафтола, образовавшегося под действием1 мл желудочного сока за 1 мин)С в концентрац образовавшегосябета-нафтола в ммоль/мл, соответствующая по рабочей таблице экстинкции опытной пробы 1 О желудочного сока;Ч 1 - объем смеси, мл (3,2 мл);Ча - объем порции (максимальнойили базальной) желудочного сока, мл;Уз - объем пробы желудочного сока,мл (0,2 мл);- время инкубации (5 мин).При низкой активности 13-нафтилацетатэстеразы в желудочном соке опыт повторяютс удлинением времени инкубации.20 Подставив в формулу числовые значения букв, вычислили,р,-нафтилацетатэстераз.ную активность этой порции сока А 0 3566 10-4 3 2 1000 2.5.10-з,Ч б:-н,с.25Следовательно у -нафтилацетатэстеразная активность базальной порции желудочного сока у больного М, равна 11,41 б,-н,е,Параллельно с базальной исследовалитакже максимальную порцию сока. Экстинкция максимальной порции сока была 0,180; концентрация бета-нафтола по рабочей таблице - 1,13 - 10 4 ммоль/мл. Вычислили по той же формуле в-нафтилацетатэстеразеактивность максимальной порции сока 35 113 104 32 110= МЯфи,е,Сопоставив с показателями в -нафтилаце татэстеразы активности желудочного сока уздоровых лиц, видим, что у больного М.активность в-нафтилацетатэстеразы в обеих порциях желудочного сока значительно превосходит средние цифры нормы, причем после стимуляции имеет место резкое по вышение В -нафтилацетатэстерозной активности сока, что дает основание подтвердить диагноз язвенной болезни с повышением секреторной функции желудка.