Способ подготовки биопсийного архивного материала из парафиновых блоков для электронно-микроскопического анализа

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛ ИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИК 165922 9 б 0 28 ЗСЕСЯ 9 З;цд ОПИС Е ИЗОБРЕТ 1 11 овательский тери и реГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫ А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Всесоюзный научно-исследцентр по охране здоровья мабенка(54) (57) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОПСИЙНОГО АРХИВНОГО МАТЕРИАЛА ИЗ ПАРАФИНОВ ЫХ БЛОКОВ ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОГО АНАЛИЗА, включающий депарафинизацию ксилолом или толуолом, проведение через серию растворов этанола понижающейся концентрации, осмирование, обезвоживание и заливку в эпоксидные смолы, отличающийся тем, что, с целью улучшения сохранности ультраструктур тканей, проведение материала через этанол осуществляют последовательно в 100%-ном растворе спирта 25 - 30 мин, в 9600-ном 10 - 15 мин, в 70%-ном 1 О - 15 мин, дважды промывают материал в 8 - 1000-ном растворе саха- розы в течение 1 О - 15 мин, затем помешают материал в 2,4 - 2,5%-ный раствор глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2, повторно промывают раствором сахарозы, осмируют в 0,9 - 1,1%-ном растворе четырехокиси осмия на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2 55 - 60 мин, вновь промывают указанным раствором сахарозы, а затем обезвоживание производят в ука- а занных растворах этанола с повышением концентрации и в двух сменах абсолютного ацетона по 15 мин.1165922 Составитель С. КачкачеваТехред И. Верее Корресор А ТяскоТираж 897 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Редактор О. ГоловачЗа к аз 4300/34 Изобретение относится к медицине в частности к патологической анатомии, эмбри. ологии и гистологии, и может найти применение в практической медицине и биологии,Цель изобретения - улучшение сохранности ультраструктур тканей.Пример 1. Проводят изучение ультра- структуры плаценты женщины с эклампсией и плаценты женщины с нефропатией П: Парафиновые блоки хранились в течение 1,5 лет Из них после просмотра контрольных. срезов, окрашенных гематоксилин-эозином, вырезают интересующие участки около 1 Х 1 мм и проводят через 2 смены ксилола по 2 ч. После этого проводят через 2 смены абсолютного этанола по 25 мин в 2 сменах 96 Я-ного этанола по 15 мин, в 2 сменах 70 Я-ного этанола по 15 мин, промывают дважды 10 ог-ной сахарозой по 15 мин, дофиксируют 2,5 Я-ным раствором глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2, промывают указанным раствором сахарозы, осмируют 1 о" -ным раствором Оз 04 на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2 60 мин при комнатной температуре, вновь промывают указанным раствором сахарозы, обезвоживают в этаноле 70 Я-ном, 96 Я-ном, 100 Я- ном) и 2 раза в абсолютном ацетоне по 15 мин, заливают в эпоксидную смолу как обычно.При этом удается получить картину практически идентичную картине до заливки образца в парафиновые блоки, присущую плаценте при данной патологии.Пример 2. Проводят изучение тех же образцов плаценты, что и в,примере 1. Однако для промывки используют 8 о/-ную саха- розу (10 мин), Осмируют 0,9%-ным О,Оч 55 мин. После просмотра в электронный микроскоп получают результаты, аналогичные примеру 1.Пример 3, Проводят изучение тех же образцов плаценты, что и в примерах 1 и 2. Однако для осмирования используют 0,7%- ный раствор О,Оа и 2/,-ный раствор глутаральдегида. Во время просмотра в электронный микроскоп не удается получить сохранившихся участков для изучения патологии и получения фотографий.Пример 4. (сравнительный). Для сравнения предлагаемого способа с известным кусочки тех же плацент проводят по известному способу. После депарафинизации 10 ксилолом и проведения через 2 смены100 Я-ного этанола кусочки фиксируют в 24-ном водном растворе Оа 04 в течение 2 ч при комнатной температуре, после чего обезвоживают и заливают в эпоксидную смолу как обычно. Полученные результаты не позволяют в полной мере изучить образцы и получить хорошие микрофотографииИзучение ультраструктуры образцов ткани, подготовленных по предлагаемому способу (примеры 1 и 2), показывает ее хорошую сохранность и идентичность ультраструктуре на микрофотографиях образца ткани плаценты, который готовится по известному способу для электронно-микроскопического анализа до закладки ткани на хранение в архив (свежий биоптат),25 Таким образом, использованная концентрация сахарозы для промывки (8 - 10 о-ная является оптимальной. При меньших концентрациях наблюдается гидратация тканей, а при больших - с мор щивание, что в том и другом случаях приводит к нарушениям сохранности тканевых структур.При концентрации глутаральдегида меньше 2,4 о" возможна недофиксация объекта, а выше 2,5 о 4 приводит к неоднородной фиксации ткани.35 Использование растворов четырехокиси осмия выше и ниже выбранных границ концентраций не приводит к хорошей сохранности ультраструктур,