Способ лечения больных с печеночной недостаточностью

СОК)3 СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 1813453 А 1 А 61 М 1/34 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ститут рганов вская, зиева ения и кстра- недоЕЧЕльных с м сочеи крови носится к эксперименой медицине, а именно разом,После внутривенно му (реципиенту) гепар мл/кг(10-15 тыс, едини двух локтевых вен для эионной системы,Коннекторы перфу полняют физиологичес го введения больнона в дозе 0,03-0,05 ц) проводят пункцию одключения перфуДо си енку про ротивои ых. (Биог ого под ионнои системы эаким раствором с геГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(56) Шумаков В.И и др. Способ полуконсервации клеток печени длякорпорального лечения печеночностаточности. - М 1990.(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ(57) Предложен способ лечения бопеченочной недостаточностью путетанного применения гемоперфузи Изобретение от тальной и клиническк гепатологии,Целью иэобрете ние сроков восстан ной активности по увеличение длитель сии за счет прекращ факторов регенерац Поставленная це дополнительно пров скоростью 20-40 мл через фрагменты т ванной ксеноселезе отношении к гепато ходом ткани селезенния является сокращеовления функциональврежденной печени и ности периода ремис- ения сорбции из крови ии во время перфуэии, ль достигается тем, что одят гемоперфузию со /мин в течение 1,5-2 ч кани криоконсервиронки, взятой в весовом цитам 1:1 и общим раски 60-80 г,х пор гемоперфузия через селе- водилась лишь с целью регуляции нфекционного иммунитета у больемосорбция путем экстракорпоральлючения донорской селезенки/ больного через взвесь криоконсервиров, гепатоцитов и фрагментов ткани селезенки. Гепатоциты проявляют не только детоксицирующую, но и сорбцию факторов регенерации. Для восполнения возникающего дефицита факторов регенерации при перфузии через гепатоциты и повышения интенсивности восстановительных процессов в поврежденной печени дополнительно в контур перфузии вводятся фрагменты ткани криоконсервированной селезенки, взятой в весовом отношении с гепатоцитом 1:1 и в количестве 1,1 +. 0,1 г/кг при скорости перфуэии 20-40 мл/мин в течение 1,5-2 ч, 9 табл./ Под ред. проф. А,Б.Цыпина обзор ВНИИМ и МТИ), - М 1987, вып, 6, 10 с,).Данный способ удовлетворяет критерию "новизна" и "существенные отличия", поскольку не известно использование экстракорпоральной перфуэии крови больного через смесь тканей селезенки и изолированных гепатоцитов с целью ускоренного вос- ОО становления функциональной активности поврежденной печени, а также предотвра- (Д щения удаления из кровотока во время перфу- ф зии факторов, стимулирующих регенераторный процесс.Способ осуществляется следующим об1813453 20 19 Продолжение табл, 8 С оки после по ключения ни) Исход Функциональный показатель30 25,3 -1,5 19,8 1,7 25,5 +2,1 28,8 +1,6 24+2 Лизо им е плазмы р0,05. Таблица 9 Динамика восстановления функции печени и некоторых показателей крови у больных печеночной недостаточностью после экстракорпорального подключения гепатоцитов и фрагментов ткани селезенки (и = 10) С оки после по ключения ни Исход Функциональный показатель30р0,05 по сравнению с исходом. Составитель Н.ОнищенкоУТехред М,Моргентал Корректор И.Муска Редактор Заказ 1796 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Общий билирубин, мкМ/лПрямой билирубин, мкМ/лМочевина, мМ/лАЛТ, ед.АсТ, ед,Щф, ед.Холестерин, мМ/л- Глобулин, Я,Общий белок, г/лЛимфоциты,Моноциты, Я,Лизоцим (ед) (плазмы) 130 +3,3 1144,2 16,5 2,7 65 ф 3,1 78 5,2 4.1 +0,2 4,8 + 0,7 28,4-1,7 76 2,3 21 +3,3 8 + 0,5 23 +1,6 1118 +7,8101 +5,812,2 +1,762-2,576 +4,43,6 +1,24,4 +0.317,3-2,374 3,728+3,56,8 + 0,829,4 1,8 110 + 5,991,3 +4,29,8 +2,560+ 1,774,9 5,52,8-0,54 3-0,4516,7- 1,1274 +4,831-2,35 +1,1+34,9- 1,4 84 +5,7 71 +5,8 8,7-2,3 60 +1,3 74 +4,7 2,6-0,9 4,4-0,5 16,2" 1,7 78 3,7 35 + 2,1 5-1,6 42,1 + 1,8парином (400 мл 0,85; ИаО + 5 тыс. ед, гепарина), а съемную колонку этой системы заполняют гепатоцитами,В качестве съемной колонки используют капельницу от системы для переливания крови,ПК-02. Для ее заполнения вскрывают пакет со стерильной системой, отсекают приводящую и отводящую трубку и последовательно объем ее заполняют активированным углем, неорганическим кварцевым стеклом, альбумином; в последнюю очередь колонку заполняют размороженными изолированными гепатоцитами (ИГ),5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ванной селезенки, которыми заполняют новую съемную колонку от системы ПК-02,Для заполнения капельницы фрагментами ткани ксеноселеэенки вскрывают новый пакет со стерильной системой для переливания крови, отсекают коннекторы входа и выхода капельницы, заполняют ее физиологическим раствором, а затем засасывают в нее взвесь деконсервированных фрагментов ткани селезенки, фиксирующихся на сетке капельницы потоком жидкости и крови, Средний размер фрагментов ткани селезенки 1 х 1 мм, количество ткани в одной капельнице до 15-20 г, Перед подключением капельницы с фрагментами ткани селезенки в перфуэионную систему - размороженные фрагменты ткани селезенки отмывают от криопротектора стерильным физиологическим раствором. Скорость вено-веноэной перфуэии 20-40 мл/мин, длительность перфуэии 1,5-2,0 ч, смена колонок производится через каждые 20-30 мин, Всего на одно подключение требуется три-четыре колонки с фрагментами ткани селезенки, при использовании которых у реципиента не возникает озноба, беспокойства или каких-либо других неприятных ощущений,Всего на лечебную процедуру расходуется 60-80 г ИГ и 60-80 фрагментов ткани селезенки, Общий расход биоматериала составляет 120-160 г, а общее время процедуры 3-4 ч.В укаэанной процедуре использовали, изолированные криоконсервированные гепатоциты и фрагменты ткани селезенки, получение и хранение которых производилось следующим образом.Взвесь изолированных гепатоцитов получают в стерильных условиях. После лапаротомии отмывают и заполняют сосуды аллогенной или ксеногенной (свиной) печени охлажденным до 12-14 С раствором Евро-Коллинз, затем следует иссечение и инкубация печени в этом же растворе в течение 15-18 ч при 4-6 С, Затем производят канюляцию воротной вены печени и в течение 10 мин нерециркуляторно перфузируют печень бескальциевым ЭДТА содержащим раствором при 37 С, После чего в течение 10 мин при 37 С производят рециркуляторную перфузию печени 0,12-ным раствором очищенной коллагеназы. Все время перфузат оксигенируется 4 карбогеном. После этих манипуляций проводится мягкое механическое диспергирование печени, фильтрование полученной суспенэии изолированных гепатоцитов (ИГ) через нейлоновое сито, Отфильтрованную массу трехкратно отмывают физиологическим раствором при 4 С, Затем суспензию ИГ инкубируют в 10 растворе5 10 15 20 25 30 40 криопротектора ."Димексид" в течение 10 мин при 4 С, после чего полученную массу разливают в пластиковые контейнеры объемом в 10 мл и замораживают согласно программе. Охлаждение производят со скоростью 1-2 С/мин до(-50) -(-60), а затем контейнеры погружают в жидкий азот - этап быстрого замораживания, Об окончании процесса замораживания судят по прекращению выделения паров азота, Контейнеры с замороженными ИГ быстро (в течение нескольких секунд) переносят для длительного хранения в низкотемпературный банк, Непосредственно перед клиническим использованием производят размораживание ИГ на водяной бане при 37 С с течение 5-10 мин,Ф рагментц ткани селезенки получают в стерильных условиях следующим образом.После лапаротомии иссекают селезенку, производят мягкое механическое измельчение ткани на холоду и затем продавливают ее через металлическое сито с размером пор 1 х 1 мм, Измельченную ткань трехкратно отмывают стерильным физиологическим раствором при температуре + 4 С. Затем и роизводят инкубацию фрагментов селезен. ки в течение ЗО мин при комнатной температуре в 13;-ном растворе криопротектора "Димексид", Димексид разводится средой ХэнксаПосле инкубации взвесь фрагментов селезенки разливают в пластиковые контейнеры объемом 10 мл и эамораживают согласно программе. Охлаждение производят со скоростью 1-2 С до (-50) - (-60) С, а затем контейнеры погружают в жидкий азот - этап быстрого замораживания. Об окончании процесса замораживания судят по прекращению выделения паров азота, Контейнеры с замороженными фрагментами селезенки быстро (в течение нескольких секунд) перечосят для длительного хранения в низко- температурный банк.Непосредственно перед клиническим использованием производят. размораживание взвеси фрагментов селезенки на водяной бане при 37 С в течение 5-10 мин.П р и м е р 1, Больной Семенихин А.П история болезни М 683, поступил в больницу МПС % 4 им, Семашко 16,08,89 г, с диагнозом; смешанный цирроз печени с выраженной гепатоцеллюлярной недостаточностью, портальная гипертензия,асцит, печеночная энцефалопатия. В связи с отсутствием эффекта от проведения традиционной терапии печеночной недостаточности, включающей применение преднизолона - 180 мг, было решено 20.10.89 провести лечение методом экстракорпорального подключения клеток печени (иэолироВанных гепатоцитов) в сочетании с фрагментами ткани селезенки. Для этого проводили гепаринизацию больного (10 тцс. ед, гепарина), проводили пункцию двух локтевых вен и подключали подготовленную к работе перфуэионную систему ПК-02; капельница - колонка этой системы была заполнена 20 мл густой взвеси клеток печени по методике, описанной выше. Скорость гемоперфузии составляла ЗО мл/мин; через каждые 30 мин колонка с ИГ заменялась свежей. После подключения четырех колонок приступили к подключению колонок - капельниц с фрагментами ткани селезенки, методика получения которых описана выше, Каждая колонка содержала до 20 г ткани селезенки, время перфузии через колонку 30 мин, скорость перфуэии кровью 30 мл/мин, всего было подключено четыре колонки с фрагментами ткани селезенки, Общее время перфузии составило 4 ч, Перфузия прошла без осложнений, профилактически после завершения процедуры больному введено 2 мл супрастина, По завершении перфуэии отмечено отчетливое снижение общего и прямого билирубина,тенденция к снижению мочевины, щелочной фосфатазы, отсутствие изменения уровня у-глобулинов и повышение уровня лизоцима в плазме крови. Повышениеуровня лизоцима в плазме крови на фоне снижения билирубина и других показателей свидетельствует, по нашему мнению, о поступлении его иэ ткани селезенки, через которую проводилась перфузия, На следующий день после перфузии состояние больного субъективно стало лучше и эта положительная динамика постепенно нарастала (см, табл. 1), свидетельствуя о реализации восстановительного процесса в паренхиме поврежденной печени: достоверно снизился уровень общего и прямого билирубина, а также уровень мочевинц крови. Из ферментов достоверно снизился уровень 1 целочной фосфатаэы,Лизоцим поддерживался на более высокихцифрах по сравнению с контролем,П р и м е р 2. Выбор режимов гемоперфуэии (скорость перфузии и длительность перфузии) через фрагменты криоконсервированной ткачи ксеноселезенки.Выбор режимов гемоперфузии осуществляли в опытах на собаках с экстракорпоральной принудительной вено-венозной гепоперфузией через фрагменты ткани селезенки свиньи по одноразовой системе для переливания крови. Для этого капельницу перфузионной системы ПК-02, заполненную фрагментами ткани селезенки,(-15 г), подключали через канюли к правой и левой бедренной вене, С помощью непульсирующего (роликового)насоса (р-р 1-05) созда 1813453вали различные потоки перфузии, колеблющиеся от 10 до 50 мл/мин. Выбор оптимальной скорости перфузии через порцию фрагментов ткани ксеноселезенки осуществляли по вено-венозной разнице рН и р 02 через, 40 мин с определенной заранее установленной скоростью. Результаты проведенных опытов представлены в табл, 2.Сопоставляя ЛрН: Лр 02 в зависимости от скорости вено-венозной перфузии, мы нашли, что скорость 20-40 мл/мин (средняя скорость ЗО мл/мин) является оптимальной для поддержания жизнедеятельности изолированных фрагментов ткани селезенки, ибо при скорости потока 10 мл/мин достоверно выявляются признаки нарастающего метаболического ацидоза; при скорости 50 мл/мин и выше возникает переполнение капельниц, контролирующих поток перфузии.Для определения длительности культивирования порции фрагментов ткани селезенки, в капельнйце перфузионной системы (вес 15 г) мы исследовали динамику изменения Л рН и Лр 02 через каждые 10 мин вено-венозной перфузии через фрагменты ткани селезенки с постоянной скоростью 30 мл/мин. Результаты этих опытов представлены в табл, 3.Из табл, 3 видно, что начинал с 40 мин начинает снижаться потребление кислорода тканью селезенки и усиливаться явления метаболического ацидоза, которые к 50-й мин перфузии становятся достоверно выраженными, На основании этих данных мц пришли к заключению, что оптимальным сроком перфузии через 15 г фрагментов ткани селезенки со скоростью 30 мл/мин (20-40 мл/мин) является 25-30 мин; 40-минутная перфузия через одну колонку является предельно допустимым сроком.П р и м е р 3, Определение активной массы фрагментов криоконсервированной ткани ксеноселезенки, Активная масса фрагментов криоконсервированной ткани селезенки определялась нами по биологическим реакциям животного: по изменению реактивной температуры у собак через 2 ч после завершения перфузии (определение уровня антигенной нагрузки) и по способности лимфоцитов стимулировать антителообразование на эритроциты барана в условиях адоптивного переноса,(Антителообразование - важнейший показатель участия иммунной системы в регенераторных реакциях), Для этого проводили опыты нэ мышах линии С 57 В Об. Выделенные из селезенки мышей-доноров лимоцитц - (спленоциты) в количестве 1 х 10 клеток переносили в организм летально облученных сингенных ре 5 10 15 20 25 ЗО 35 40 45 50 55 ципиентов через 17 ч после внутрибрюшинного введения донора 0,5 мл инкубата, В качестве инкубата использовали кровь сингенных животных, в которой в течение 2 ч при 37 С, р 02 = 80 - 100 мм рт, ст, и постоянном встряхивании выдерживали фрагменты криоконсервированной ткани селезенки различной массы; от 0,4 до 1,6 г/кг (или 0,4-1,6 мг на 1 мышь весом 10 г).Через 7 суток ( Юдина Н.В. Реакция лимфоидной. ткани на повреждение и восстановление органов с разной восстановительной реакцией: Автореф. дис, канд, 1980, 17 с) после иммунизации и переноса лимфоидных клеток в селезенке реципиентов определяли число антителообразующих клеток (АОК) методом локального гемолиза на геле ( )егпе, йогсИп 1963).Исследование показало (табл. 4), что интенсивный прирост АОК в селезенке реципиентов начинается после введения инкубата, где находилась селезеночная ткань массой 1,0 г/кг(л), При дальнейшем увеличении инкубируемой массы селезеночной ткани прирост АО К возрастал не достоверно (р0,05). Было отмечено также, что при дозе криоконсервированной ткани ксеноселезенки 2.2-2,4 г/кг имеет место кратковременный подъем ректальной температуры у собак в течение 2 ч после перфузии, а при дозе ксеноселезенки 2,6-2,8 г/кг веса собаки достоверный подьем температуры на 0,5-1,0 С наблюдался свыше 2 ч после перфузии, что указывает на избыточную антигенную нагрузку на организм, На основании проведенных биологических тестов нами была установлена активная масса фрагментов криоконсервированной ткани селезенки, которая составила 1,0-1,2; 2,2-2,4 г/кг.П р и м е р 4. Выбор соотношений активной массы криоконсервированных гепатоцитов и фрагментов ксеноселезенки, способных ускорить регенерацию поврежденной печени,Эту работу мы начали с определения минимальной биологической дозы гепатоцитов, не вызывающей после гемоперфузии выраженного и стойкого повышения температуры у собак,Оказалось, что при снижении количества клеток печени с 2,8 до 1 г/кг веса животного) использовали густую взвесь гепатоцитов, содержащую в 1 мл 2 10 клеток печени) че 6рез 2 ч после завершения гемоперфузии (2 ч перфузии со скоростью 30 мл/мин) повышенная температура у собак наблюдалась при использовании гематоцитов в капельнице-резервуаре в дозе 2,8-2,6 г/кг, Начиная с дозы 2,4-2,2 г/кг температура усобак через 2 ч после гемоперфузии повышалась10 15 20 25 30 35 40 50 55 не достоверно (р0,05), Эта доза гепатоцитов была признана нами оптимально допустимой,Сопоставляя эти данные с результатами по определению оптимальной биологической дозы ткани селезенки (пример 3) мы пришли к заключению, что суммарная биологическая доза криоконсервированных гепатоцитов так же как и фрагментов тканей селезенки не должна превышать 2,2-2,4 г/кг(для человека 160-190 г).Установив оптимально допустимую суммарную дозу биологического материала (гепэтоциты и спленоциты), мц перешли к определению оптимального соотношения активной массы криоконсервированных гепатоцитов и фрагментов ткани селезенки.Эта работа проводилась на 26 беспородных кошках массой 2-3,5 кг с экспериментальным гепатитом, вызванным подкожным введением четыреххлористого углерода (0,2 мл 60 оф-ного раствора через день в течение 2-х недель). В опытах использовали кошек, общий билирубин крови которых повышался с 0,7- 0,8 мгдо 2,0-3,6 мго/,. Всего было поставлено четыре серии опытов. В 1 серии (5 кошек) животные не получали никакого лечения; во 11 серии (5 кошек) проводилась гемоперфузия через взвесь криоконсервированных клеток ксенопечени (доза 2,2 + + 0,2 г/кг); срок перфузии 3,5 + 0,2 ч; скорость перфузии - 30 мл/мин; в 1 серии - (5 кошек) проводилась гемоперфузия через фрагменты криоконсервированной ткани ксеноселезенки (доза 2,2 ". 0,2 г/кг); срок перфузии 3,3 + 0,4 ч; скорость перфузии 20- 40 мл/мин; в И серии (5 кошек) - гемоперфузию проводили сначала через взвесь криоконсервированных клеток печени (доза 1,1 + 0,1 г/кг) срок перфузии 1,5-2 ч, скорость перфуэии 20-40 мл/мин, азатем через фрагменты криоконсервированной ткани ксеноселеэенки (доза 1,1 + 0,1 г/кг); срок перфуэии 1,5-,0 с, скорость перфузии 20-40 мл/мин; общая доза этих тканей составила 2,2 й 0,2 г/кг и соотношение их 1:1,О влиянии гемоперфузии на восстановительные процессы в патологически измененной печени судили по динамике изменения гистологической картины в печени на Б-й, 14-й и 30-й день после проведения гемоперфузии. Для этого проводили биопсию кусочков печени. Кусочки печени фиксировали в 10-ном формалине. Готовили парафиновые срезы толщиной 5 мкм и окрашивали их гематоксилин-зозином, по Шабадашу, крезиловым фиолетовым, проводили реакцию тетразониевого сочетания по ДаниеллиПирсу, На гистологических препаратах с использованием окулярной сетки для стериометрических измерений площадь 0,25 мм в 50 полях зрения подсчитывали общее количество печеночных клеток с одновременным подсчетом количества нормальных гепатоцитов и гепатоцитов с признаками жировой и белковой дистрофии, общего количества печеночных ядер,нормальных и дегенерирующих.Проведенные исследования показали. что у животных с экспериментальным гепа титом печень имела светло-коричневый цвет с хорошо выраженным рисунком долек, Микроскопически выявлялась выраженная жировая, зернистая, гидролическая и баллонная дистрофия гепатоцитов, полиморфизм печеночных клеток, их ядер, вакуолиэация ядер и пикноз. По ходу портальных трактов и около центральных вен отмечалась лимфоидная инфильтрация. Через 5 дней после гемоперфузии у всех животных печень имела более темный цвет, чем печень контрольных животных с токсическим гепатитом. Гепатоциты с белковой и жировой дистрофией в контроле составили 96,2 + 3,40,; в опытных группах их было достоверно меньше (табл. 5), однако разницы между 1, 11 и О 3 группами не было. Количество дегенерирующих ядер в гепатоцитах печени кошек также достоверно снизилось к 5-м суткам по сравнению с контролем, однако достоверной разницы 11, 1 И и В группами также не было выявлено (табл, 6), Через 14 дней после гемоперфузии выраженность дистрофического процесса во всех группах достоверно уменьшалась по Сравнению с контролем (табл, 5 и 6). В группе 1 Ч, где применялась для гемоперфузии комбинация гепатоцитов и спленоцитов 1:1, количество поврежденных клеток становилось достоверно меньше, чем во 11 и И группах (р0,05),В еще большей степени положительное влияние комбинации гепэтоцитов и спленоцитов проявляется через 1 месяц после гемоперфуэии: через 1 месяц содержание нормальных гепатоцитов в печени соответствует здоровым животным, тогда как в группах, где применяли либо гепатоциты (11 гр.) либо спленоциты (111 гр,) количество нормальных клеток вдвое меньше (табл. 5); содержание поврежденных ядер в гепатоцитах печени собак И группы также близко к содержанию поврежденных ядер в печени здоровых собак (табл. 6). Таким образом, проведенные эксперименты доказали, что и гепатоциты и спленоциты в неаллергизирующих дозах усиливают восстановительный процесс в поврежденной печени; они показали также,40 дением. 50 55 что комбинацией гепатоцитов и спленоцитов в той же суммарной дозе можно способствовать достоверному усилению темпа регенерации печени и сокращению сроков завершения восстановительнОго процесса в ней,П р и м е р 5, Доказательства большей выраженности восстановительного процесса в печени у больных с поражением печени при комбинированном применении гепатоцитов и фрагментов ткачи селезенки при гемоперфузии,Комбинированная гемоперфузия через криоконсервированные гепатоциты и фрагменты ткани селезенки проведена нами у 10 больных с хронической печеночной недостаточностью.Результаты этих исследований представлены в табл. 7-9,В табл. 7 представлены изменения некоторых показателей крови сразу после перфузии крови больного через изолированные гепатоциты и через гепатоциты в сочетании с фрагментами ткани селезенки, Иэ табл.7 видно, что существенные различия существуют в уровне лизоцима плазмы крови больных, который, как известно, выступает в роли гуморального регулятора регенериционных процессов в поврежденном органе (бухарин О,ВВасильев А,В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине, Томск, 1974).Снижение лизоцима в крови больных, которым проводилась перфузия через изолированные гепатоциты (гр) и отсутствие снижения лизоцима в крови больных, которым дополнительно проводилась перфузия через ткань селезенки (гр), свидетельствует, очевидно о том, что у больныхгруппы имеет место сорбция лиэоцима, а у больныхгруппы его секреция, балансирующая убыль этого вещества при сорбции его гепатоцитами.В табл. 8 представлены результаты лечения печеночной недостаточности в течение 1 месяца после сеанса перфузии по способу-прототипу,Из табл, 8 видно, что при подключении лишь одних гепатоцитов на 1-е сутки после подключения происходило достоверное увеличение общего и прямого билирубина и не достоверное повышение лизоцима, на 7-е сутки наступало достоверное снижение общего и прямого билирубина, огда как остальные показатели состояния печеночной функции и крови практически не изменялись (АлТ, АсТ, Ц,Фхолестерин общий белок, у-глобулины, лимфоциты, моноциты, лизоцим). 5 10 15 20 25 30 35 На 30-е сутки. после подключения все показатели возвращались к исходному (патологическому) уровню,После подключения ИГ в комбинации с фрагментами ткани селезенки (табл, 9) уже на 1-е сутки наступало снижение показателей общего и прямого билирубина крови больных на фоне достоверного повышения уровня лизоцима в плазме, на 3-и сутки снижение общего и прямого билирубина становилось достоверным; на 3-и сутки наступало также дОстоверное снижение Щ,Ф. с 4,1+ 0,2 до 2,8.ф 0;5 ед )-глобулинов с 28,4 ч. 1,7% до 16,7 + 1,120, моноциты кровис 8+ 0,60 до 5 ф.1,10,лимфоциты кровиь Ф - переносчики - регенерационной информации достоверно увеличились с 21 . 3,3) до 31 .ф. 2,30 на фоне достоверного увеличения лизоцима крови. На 7-е и 30-е сутки положительная динамика усиливалась, либо поддерживалась на достоверно лучших цифрах по сравнению с прототипом. На 30-е сутки общий билирубин был ниже в 2 раза, прямой билирубин - более чем в 2 раза. Имело место также достоверное снижение мочевины, Щ.Ф., у-глобулинов, моноцитов крови - косвенно характеризующих торможение неспецифического воспалительного процесса в стромальных структурах (печеночной ткани),Предлагаемый способ позволяет достоверно снизить уровень связывания лизоцима во время перфуэии; интенсифицировать почти в 2 раза восстановительный процесс в печени без увеличения массы аллергезирующего материала; добиться более длительной компенсации функции печени при ее хроническом повреждении Предлагаемый метод может найти применение при острой и хронической недостаточности печени, для устранения недостаточной функции печени при перитонитах, сепсисе и других состояниях, связанных с ее поврежФормула изобретения Способ лечения больных с печеночной недостаточностью путем медикаментозной терапии и экстракорпоральной гемоперфузии через суспензию изолированных гепацитов, отл ича ю щий с ятем, что, с целью повышения эффективности способа, дополнительно проводят гемоперфузию через фрагменты ткани криокойсервированной селезенки, взятой в массовом соотношении к гепатоцитам 1:1 и в количестве 1,1 + 0,1 г/кг, при скорости перфуэии 20-40 мл/мин в течение 1,5-2,0 ч.13 14 1813453 Таблица 1 Динамика изменения показателей печеночной функции и некоторых показателей крови после экстракорпоральной гемоперфузии через взвесь изолированных гематоцитов и фрагменты ткани селезенки у больного Семенихина А.П, (и.б. М 683)С оки после по ключения ни) Показатель Исход 30 О Общий билирубин,мк М/л Прямой билирубин,мк М/л АлТ/АсТ, ед,Мочевина, мМ/л Холестерин, мМ/л Лимфоциты,Моноциты, ф Щелочная фосфатаза, ед. Общий белок, г/л у - глобулин,Лизоцим, ед, 62,5 110,2 84,7 130,8 120,3 118,4 72,360/768,74,4355 47,560/769,14,4365 91,4 60/76 9,8 4,2 31 52,67816,734 4,2 7628,Э 20 3,8 76 27 25 Э,67417,931 2,7 74 16 360 - сразу поссле подключения,Табл и ца 2 Выбор скорости гемоперфузии через фрагменты криоконсервироваиной ткани ксеноселезенки (в капельнице 15 г фрагментов ткани селезенки)Таблица 3 Определение длительности гемоперфузии через фрагменты криоконсервированной ткани ксейоселезенки (в капельнице 15 г фрагментов ткани селезенки)1813453 15 Таблица 4 Влияние активной массы фрагментов ткани селезенки на изменение ректальной температуры собак и прирост антителообраэующих клеток (АОК) в селезенке мышей реципиентов в условиях адоптивного переноса ФДостоверные изменения показателей по отношению к тем же показателям при массеселезеночной ткани 0,6-0,8 гкг,Ъ Таблица 5 Количество нармальных и поврежденных гепатоцитов в различные сроки после повреждения печени четыреххлористым углеродом (контроль,серия) и последующего проведения гемоперфузии; через гепатоциты ( серия опытов), через фрагменты ткани селезенки ( серия опытов) и комбинацию этих тканей (1:1 (И серия опытов), взятых одинаковым общимвесомр0,05 по сравнению с контролем ( серия.опытор0,05 по сравнению сисерией опытов,,Ь, Количество поврежденных ядер гепатоцитов (в ) в различные сроки после повреждения печени четыреххлористым углеродом (контроль,серия) и последующего проведения гемоперфузии: через гепатоциты (И серия опытов), через фрагменты ткани селезенки (И серия опытов) и комбинацию этих тканей (1;1) (Ч серия опытов), взятых одинаковым общим весом0.05 по сравнению с р0,01 по сравнению нтролем ( серия). и И серией опытов. Таблица торых показателей крови сразу после проведения гемопетоциты (ИГ), а также через ИГ в сочетании с фрагментами(ФТС) у больных печеночной недостаточностью узии через изокани селезенки м ение нек анные ге и ачает убыль вещест начает прирост вещ римечание. - о ва в кро блица а восстановления функции печени и некоторых показателей крови у больных пе едостаточностью после экстракорпорального подключения изолированных гепацитов (и = 10) Динам ночной Функциональный иэатель Ис ки после по ключения Общий билирубин, мкМ/л Прямой билирубин, мкМ/лМочевина, мМ/лАЛТ, ед.АсТ ед 4,9 + 0,9 16 +1,8 72+ 2,8 31 +2,77+ 0,8 Холес у - Гл Общи Лим Мон Ф, ед.,ерин, мМ/обулины, ф(,белок, г/лоциты,оциты, Я,30,4 .2,0120,4 +4221,2 1,6582+ 3,864 +2,84,7 0,863 + 1,119,1 .3,278 .2,227 310 +0,6 153,6 2,6+ 132,8 - 4,6+ 19,3 +1,6 84 +4,6 66 +8,3 6+ 1,354.9 0,8 17,0 ф 2,1 70 +3,1 29 +2,6 9 .0,8 38,5 3,7 25,3 . 6,0 19,3 1,4 82 +3,1 63 ф 67 5,6 +0,8 4,6 -0,57 16,8 2,2 70 -3 4 30 -2,1 7 + 0,7 115,3 4,9 109,9 + 4,218,2 + 1,52 80 .3,2 60 . 2,8 4407 1265 54116 4,617,5 0,6580 ф 4,260 й 7,84,8 + 1,26,10,8158 .4,176+ 4,129 +2,89+12