5-метил-9b-окси-2-фенил-1, 3, 4-тиадиазино 5, 6-b индол, обладающий противовоспалительной активностью

5-метил-9в-окси-2-фенил-1,3,4- тиадиазино-[5,6-в]индол формулы

обладающий противовоспалительной активностью.

Настоящее изобретение относится к новому химическому соединению, конкретно к 5-метил-9b-окси-2-фенил-1,3,4-тиадизино[5,6-b]индолу формулы I

5-метил-9b-окси-2-фенил-1,3,4-тиадиазино[5,6-b] индол яв- ляется биологически активным соединением. Он может быть использован в качестве противовоспалительного средства. Среди нестероидных противовос- палительных средств индольного ряда широкое применение в медицинской практике получил индометацин (1-n-хлорбензоил-5-метокси-3-индолилуксус- ная кислота) [1]
Индометацин является активным противовоспалитель- ным препаратом; он проявляет также анальгезирующее и жаропонижающее действие. Однако, при применении индометацина возможны побочные явления: головная боль, головокружение, сонливость. Могут проявляться тошнота, рвота, боли в подложечной области. Препарат может оказывать ульцероген- ное действие, вызывать изъязвления желудка и кишечника, кровотечения из желудочно-кишечного тракта. Индометацин применяется в виде капсул и дра- же, а также в виде свечей, т.к. он нерастворим в воде.
При перо- ральном введении с целью определения острой токсичности индометацин в дозе 1000 мг/кг не вызывал гибели животных через 24 ч. Однако при более длительном наблюдении оказалось, что даже значительно меньшие дозы явля- ются токсичными.
Целью настоящего изобретения является расширение ассортимента веществ, обладающих противовоспалительной активностью и улучшенными свойствами. Указанная цель достигается -5-метил-9b-ок- си-2-фенил-1,3,4-тиадиазино[5,6-b]индолом формулы 1:

про- являющего противовоспалительную активность.
Упомянутое вещество представляет собой алые кристаллы. Т. пл. 119^oC после многократной перекристаллизации из спирта 122^oC. Не растворяется в воде, легко растворяется в диметилсульфоксиде. Вещество устойчиво при хранении, не гигроскопично.
Вещество однородно по данным тонкослойной хроматог- рафии. Для его очистки достаточна 2-кратная перекристаллизация.
Ус- ловия тонкослойной хроматографии. Адсорбент окись алюминия II степени активности, растворитель для нанесения спирт, подвижный растворитель хлороформ петролейный эфир, 7:1, R_f 0,78. Вещество как в види- мом, так и в УФ-свете не содержит примесей, в том числе исходных ве- ществ.
Строение вещества подтверждается данными элементного анали- за, определением активного водорода по Церевитинову (гидроксильная груп- па), а также данными ИК- и УФ-спектров.
УФ-спектр: _макс, нм (lgE): 241 (4,33), 306 (4,18), 455 (3,91).
УФ-спектр измерен для 3,64 10^-5 М раствора в спирте, содержащем 0,16% диметилсуль- фоксида по объему, на приборе СФ-8.
Положение длинноволновой полосы поглощения характерно для производных 1,3,4-тиадиазино[5,6-b]индола.
ИК-спектр : см^-1: 516,556 (сл), 580 (шир), 618, 637, 637, 646 (оч. с), 702, 742 (с.), 765, 817 (оч. с.), 827 (с), 840 (сл), 879, 892 (оч. с), 918 (сл), 952 (сл), 988 (сл.), 1004, 1061, 1099, 1130, 1180, 1242, 1260, 1278 (с), 1315, 1335, 1352, 1401, 1418, 1445, 1459, 1527 (с.), 1575 (оч. с.), 1586 (плечо), 1624 (оч. с.), 3300.
ИК-спектр снят в таблетке KBr на приборе UR-10. В ИК-спектре отсутствует полоса карбонила, в области 1630-1800 см^-1 содержится характерная для тиадиазиноиндолов частота ассоциированной гидроксильной группы (3300 см^-1), а также частота связи C=N (1624 см^-1).
В ИК-спектре в растворах в хлороформе и нитрометане также содержится поло- са гидроксильной группы при 3340 см^-1 (концентрация 0,015-0,12 моль) л, толщина слоя 0,06-1 мм).
В спектре ПМР в диметилсульфокси- де (спектр снят для 0,068 М. раствора на приборе РЯ-2310, рабочая часто- та 60 МГц) отсутствует сигнал NH в слабом поле t от -3 до +0,9 м.д.), характерный для 2-, ацил- и тиоацилгидразонов N-метилизатина.
Спектр ПМР снят на приборе Perkin Elmer R-12, рабочая часть 60 МГц.


Реакцию проводят путем нагревания эквимолекулярных ко- личеств реагентов в водном спирте, выход продукта реакции 93-94%
Найдено, С 64,84, 64,91; Н 4,51, 4,58; N 14,40, 14,61; S 10,87, 10,71.
C₆H₁₃N₃OS.
Вычислено, С 65,06; Н 4,43; N 14,22; S 10,85.
При определении активного водорода по ме- тоду Цеpевитинова найдено, Н 0,337. Вычислено, Н 0,341.
П р и м е р. Смешивают при кипении растворы 7,1 г (46,7 ммоль) тиобензоилгид- разина в 105 мл воды и 11 г (46,6 ммоль) 1-метил-2-фентилимино-3-оксоин- долина в 115 мл спирта и при перемешивании продолжают нагревание с об- ратным холодильником в течение 25 мин. Приблизительно через 5 мин после смешивания выпадает осадок. После остывания до комнатной температуры осадок отфильтровывают, промывают кипящей водой 3 раза по 40 мл и сушат в вакуум-эксикаторе над фосфорным ангидридом.
Выход продукта реак- ции 12,8 г (93,1% от теорет), т. пл. 119^oC После перекристаллиза- ции из спирта (около 30 мл на 1 г) блестящие алые кристаллы, т. пл. 122^oC.
Ниже изложены результаты исследования противовоспали- тельной активности и токсичности заявляемого препарата (лабораторный шифр препарат N 2).
Острая токсичность.
Определение острой токсичности проводилось в виде 1%-ного раствора и в диметилсульфоксиде. Этот растворитель разрешен для медицинского применения и широко исполь- зуется при работе с препаратами, нерастворимыми в воде.
Токсичность самого диметилсульфоксида мала и составляет 21,4-2803 г/кг при перораль- ном введении или 5,75-8,8 кг/кг, при внутривенном введении. В данных ус- ловиях ЛД₅₀ для препарата N 2 составляет 113,3 4,1 мг/кг.
Внутрибрюшинное введение препарата в дозах 5 и 10 мг/кг (1/10 от ЛД₅₀) в течение 6 дней не показало каких-либо видимых токсических реакций со стороны желудочно-кишечного тракта, а также общего состояния животных. Изъязвлений слизистой желудка и кишечника отмечено не было. Напротив, группа животных, которым вводился индометацин в дозе 20 мг/кг (менее 1/10 ЛД₅₀), погибли на 3-4 сутки. У животных, получавших индометацин, наблюдались диспептические расстройства и изъязвления сли- зистой желудочно-кишечного тракта.
Противовоспалительная активность
Изучение противовоспалительной активности данных веществ проводи- лись на моделях "термического ожога конечности крыс", "адреналинового отека легких "и "ватной гранулемы". Данные, полученные при введении пре- парата N 2, сравнивались с данными контрольной группы животных и с ре- зультатами экспериментов при введении индометацина.
По методу "тер- мического ожога" о развитии воспаления судили по увеличению объема ко- нечности крыс после погружения ее на 1 минуту в воду, нагретую до 51^oC. Объем конечности определялся онкометрически, через 1,5; 3, 5; 24 ч после ожога. Объем конечности дол ожога принимали за 100% Препарат вводился внутрибрюшинно и подкожно за час до ожога в дозе 10 мг/кг и 50 мг/кг соответственно. В контрольные группы входили животные, одним из которых подкожно вводилось персиковое масло, а другим внутрибрюшинно ди- метилсульфоксид в соответствующих количествах. Для сравнения был постав- лен эксперимент с животными, которым вводился индометацин в дозе 20 мг/кг. Следует отметить, что в этой дозе (20 мг/кг) индометацин уже про- являет токсическое действие (двигательная активность животных была зна- чительно угнетена).
Установлено, что препарат N 2 в дозе 50 мг/кг в виде 2% раствора в масле, вводимого подкожно, проявляет выраженное про- тивовоспалительное действие. Максимум прироста объема конечности при применении препарата не превышал 96,8 6,8% в сравнении с контро- лем (142,9 9,1%). На протяжении 24 ч воспаление развивалось очень медленно. В данной дозе выраженное действие препарата проявляется уже через 1,5-3 часа и сохраняется в течение всего срока наблюдения.
При введении препарата в виде 0,4% раствора на диметилсульфоксиде в дозе 10 мг/кг на данной модели воспаления отмечена противовоспалительная ак- тивность, превышающая активность индометацина в дозе 20 мг/кг. Действие препарата развивается быстро и через 1,5 ч прирост объема конечности не превышает 38,5% в сравнении с 92,6% в контрольном опыте. Препарат оказы- вал выраженное противовоспалительное действие на протяжении всего срока наблюдения. Так, через 1,5 ч после ожога препарат уменьшил прирост объ- ема конечности по сравнению с контролем в 2,4 раза (индометацин в 2 раза). Через 3 ч прирост объема конечности у контрольной группы был в 1,9 раза, а через 5 ч в 2,3 раза больше чем у животных, которым вводился препарат N 2. В первые 5 ч препарат в дозе 10 мг/кг обладает более выра- женным противовоспалительным действием, чем индометацин в дозе 20 мг/кг. При этом препарат N 2 не оказывает видимого токсического действия в про- тивоположность индометацину.
Изучение влияния препарата N 2 на экс- судативный и полиферативный компоненты асептического воспаления проводи- лось на модели "ватной гранулемы". Животным под легким эфирным наркозом под кожу спины в асептических условиях вшивались стерильные ватные шари- ки весом 10 мг. Препарат вводился внутрибрюшинно в дозе 5 и 10 мг/кг ви- де раствора на диметилсульфоксиде. В первой серии экспериментов препарат вводился в течение 3 дней после операции, второй 23 дней до и 3 дней после операции. В конце эксперимента животные забивались. Гранулемы взвешивались в свежеотсепарированном виде и в высушенном до постоянного веса состоянии. Изучение активности препарата проводилось в сравнении с индометацином в дозе 1 мг/кг и 20 мг/кг, который вводился внутрибрюшинно в виде раствора в 2,5%-ном растворе карбоната натрия. Контрольным груп- пам животных соответственно вводились: 0,9% раствор натрия хлорида, ди- метилсульфоксид и 2,5% раствор карбоната натрия. Результаты эксперимен- тов показали, что препарат N 2 в дозах 5 и 10 мг/кг значительно снижает образование грануляционной ткани. При применении препарата N 2 в течение 6 дней наиболее активной оказалась доза 5 мг/кг, при этом не было отме- чено никакого видимого токсического действия препарата.
Таким обра- зом, 5-метил-9b-окси-2-фенил-1,3,4-тиадиазино[5,6-b]индол обладает выра- женным противовоспалительным действием, не уступающим и даже превосходя- щим действие широко применяемого препарата индометацина. Препарат об- ладает более выраженным действием на экссудативный компонент воспаления. Кроме того, при его длительном применении в противоположность индомета- цину не наблюдается никакого видимого токсического действия, в том числе на желудочно-кишечный тракт.
5-метил-9в-окси-2-фенил-1,3,4- тиадиазино-[5,6-в]индол формулы

обладающий противовоспалительной активностью.