Способ получения вакцины против трансмиссивного гастроэнтерита свиней

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ТРАНСМИССИВНОГО ГАСТРОЭНТЕРИТА СВИНЕЙ, включающий культивирование аттенуированного штамма вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней в культуре ткани с последующим добавлением в полученный вируссодержащий материал стабилизатора из желатина и сахарозы в фосфатном буфере, расфасовку и лиофилизацию вакцины, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенной активности вакцины, в качестве штамма вируса используют штамм Transmissible gastroenteritis virus МК-25, в качестве культуры ткани используют 2 3%-ную суспензию эксплантатов из тканей легкого и/или кишечника плодов свиней, извлеченных через 30 40 мин после забоя свиней, при этом перед введением стабилизатора вируссодержащий материал разделяют на твердую и жидкую фракции, твердую фракцию дезагрегируют и затем смешивают с жидкой.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой вирусвакцину из аттенуированного штамма вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней для перорального применения.
Целью изобретения является повышение иммуногенной активности вакцины.
Вакцина получается на основе штамма МК-25 вируса трансмиссивного гастроэнтерита (ТГЭ) свиней, который депонирован в коллекции штаммов микроорганизмов Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов и имеет регистрационный N 2.
Штамм МК-25 вируса ТГЭ свиней получен в результате адаптации штамма N 5 ВГНКИ в течение 25 перемежающихся пассажей в монослое почки плода свиньи и суспензии эксплантатов легких и кишечника плодов свиней. При этом вирус изменил некоторые биологические свойства.
Сравнительная характеристика биологических свойств штаммов N 5 ВГНКИ и МК-25 вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней приведена в табл.1.
Штамм МК-25 вируса ТГЭ свиней сохранил исходные морфологические свойства, безвреден для лабораторных животных, непатогенен для новорожденных поросят, не реактогенен и не передается при контакте от вакцинированных невакцинированным свиньям.
П р и м е р 1. Получение вируса в суспензии эксплантатов из ткани легких плодов свиней.
Для получения ткани используют свиноматок 3-3,5-месячной супоросности. Плоды свиней получают через 30-40 мин после забоя свиноматок. Легкие плодов извлекают и измельчают до получения эксплантатов диаметром 2,5-4,0 мм. В сборник (бутыль) вносят эксплантаты легких плодов свиней (ЭЛПС) в концентрации 2,0-3,0 к объему среды, штамм МК-25 вируса ТГЭ свиней в дозе 3,5-5,5 Ig ТЦД_50/мл на 1 мл суспензии, комплекс антибиотиков (гентамицин и ампициллин по 10 мкг/мл и нистатин 30 ед/мл) и оставляют на 2 ч для адсорбции вируса. В реакторы или роллерные бутыли загружают последовательно инфицированную суспензию ЭЛПС с комплексом антибиотиков и питательную среду 0,5%-ный гидролизат лактальбумина на растворе Эрла (ГЛАЭ) без сыворотки. Реакторы заполняют суспензией на 0,8 объема, роллерные бутыли на 1/3 объема. Вирус культивируют в течение 5-6 сут при постоянном перемешивании, температуре 37 0,5^оС и рН среды 6,9-7,2. Аэрацию суспензии воздухом и СО₂ проводят в автоматическом или ручном режиме. Ткань ЭЛПС отделяют от вирусосодержащей культуральной жидкости, гомогенизируют при 1000-1500 об/мин в течение 30-60 с, гомогентат соединяют с вирусосодержащей культуральной жидкостью, фасуют в бутыли, замораживают, хранят при температуре минус 20-40^оС и в дальнейшем используют для изготовления вакцины. Выход вируса в зависимости от концентрации ткани и дозы заражения приведен в табл.2.
В вирусосодержащую суспензию с титром 10^8,0 10^9,5 ТЦД_50/мл, вносят стабилизатор и антибиотики, перемешивают, фасуют во флаконы, лиофилизируют, укупоривают, этикетируют и контролируют.
П р и м е р 2. Получение вируса в суспензии эксплантатов кишечника плодов свиней.
Условия получения эксплантатов кишечника (ЭКПС) плодов свиней такие же, как в примере 1. Суспензию ЭКПС 4-5-кратно отмывают рабочим раствором Хенкса или средой ГЛАЭ. Концентрация ткани, доза заражения, условия адсорбции, уровень заполнения реакторов или роллерных бутылей, условия культивирования вируса, гомогенизация инфицированных тканей ЭКПС, условия замораживания и хранения вируса, составления вакцины, расфасовка, лиофилизация, укупорка и этикетировка такие же, как в примере 1. Выход вируса в зависимости от концентрации ткани и дозы заражения приведен в табл.3.
П р и м е р 3. Получение вируса в суспензии эксплантатов легких и кишечника плодов свиней.
Условия получения ЭЛПС и ЭКПС такие же, как в примерах 2 и 3. Суспензию ЭКПС и ЭЛПС объединяют в соотношении 2:1-1:2 и используют для культивирования штамма МК-25 вируса ТГЭ свиней. Концентрация ткани, доза заражения, условия адсорбции, уровень заполнения реакторов или роллерных бутылей, условия культивирования, гомогенизация инфицированной смеси тканей ЭЛПС и ЭКПС, условия замораживания и хранения вируса, составления вакцины, расфасовка и лиофилизация такие же, как в примерах 2 и 3. Выход вируса в зависимости от условий культивирования приведен в табл.4.
Выход штамма МК-25 вируса ТГЭ свиней в зависимости от метода обработки инфицированной суспензии эксплантатов тканей легких и кишечника плодов свиней приведен в табл.5.
П р и м е р 4. Получение вакцины против ТГЭ свиней.
Для получения вакцины вируссодержащую суспензию штамма МК-25 вируса ТГЭ свиней готовят так же, как в примерах 1, 2 и 4. К вируссодержащей суспензии при постоянном перемешивании добавляют стабилизатор, состоящий из желатина и сахарозы в фосфатном буфере, и комплекс антибиотиков (пенициллин 100 ед/мл и стрептомицин по 100 мкг/мл). Смесь расфасовывают во флаконы, замораживают при температуре минус 50^оС, лиофилизируют, укупоривают, этикетируют и готовую вакцину контролируют. Титр полученной вакцины достигает 10^7,5-10^9,0 ТЦД_50/мл. Соотношение компонентов образцов вакцины и их иммуногенная активность приведены в табл.6.
В опыте была проведена сравнительная оценка иммуногенной активности вакцин из штамма N 5 ВГНКИ (прототип) и штамма МК-25 вируса ТГЭ свиней, репродуцированного в суспензии ЭЛПС и ЭКПС в реакторе. Результаты приведены в табл. 7.
Опыт проводили на супоросных свиноматках, которых иммунизировали против ТГЭ свиней перорально с сухим кормом за 10-14 дней до опороса в течение 5-7 дней подряд в раститровке дозах 6,0-7,0 Ig ТЦД₅₀. Чистым контролем служила супоросная свиноматка, не привитая против ТГЭ свиней.
В день опороса у всех свиноматок взяли кровь и молозиво, и исследовали в (РНГА) реакции непрямой гемагглютинации на наличие антител против ТГЭ свиней. Новорожденных поросят-сосунов от опытных и контрольной свиноматок на 3 сут после опороса заразили перорально вирулентным штаммом Миллер-2 в дозе 10³ ИД₅₀. Эффективность вакцины оценивали по выживаемости поросят в течение 30 сут после заражения.