Способ определения элеутерозидов а, в, в, д, е (его варианты)

Опубликовано 23.11.82, Бюллетеньтт 3Дата опубликования описания 25.11.82 ио делам изобретений и открытийА.В. Баевский, Г.М. Баренбойм и Л.Л. ПирузянНаучно-исследовательский институт по биологич скимч(7) Заявитель испытаниям химических соединении(5) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭЛЕУТЕРОЭИДОВ А, 81, В, Д, Е ( ЕГО ВАРИАНТЫ )Изобретение относится к медицине.,и фармакологии, конкретно к отизикохимическим методам количественного анализа лекарственных препаратов получаемых в виде экстрактов. из расти 5тельных обьектов, и может быть использовано для определения качества экстракта элеутерококка при его полу.чении и использовании в качестве лекарства, пищевой или кормовой добавки, для определения содержания биоло гицески активных веществ (элеутерози дов) в исходном сырье и в процессе производства, а таюв для выявления возможной Фальсификации этого пре парата.Элеутерококк колючий (Е 1 еегосос сцв Веп 1 сосцз Иах 1 гт.) представляет собой кустарник из семейства аралиевых и является близким родственником известного восточного лекарственного растения иен ьщенл. Вместе с хен ьшенем, родиолой,розовой, пантакрином и другими лекарственными средствамииз группы природных адаптогеновэлеутерококк повышает неспецибцческую резистентность, адаптации организмоо к различного рода неблагоприятным внешним воздействиям. Благодаряширокому спектру действия, этот лекарственный препарат назначается приочень многих заболеваниях и предболезненных состояниях, связанных с по"выщенной йизичесой нагрузкой, понижением выносливости организма, в пос"леоперационный период, при общей слабости организма и во многих другихслучаях. Элеутерококк имеет оценьширокое применение в медицине, а также в пищевой промышленности и сельс"ком хозяйстве и считается массовымлекарственным средством. Поэтому определение качества выпускаемого экстракта элеутерококка имет очень важное знацение, так как возможная передозировка его или отсутствие в про"дукте каких-либо компонентов может не только не принести пользу, а даже оказаться болезнетворным.Среди вецеств, составляющих действующее начало элеутерококка, выделяют 5 индивидуальных химических веществ, которые в химии природных соединений принято называть элеутеро" эндами А, В, В , Д, Е, в сумме по массе составляющих до 903 всех эле о утерозидов. Элеутерозид А " это даукостерин, В - 7глюкозид изоФраксидина, В - 4глюкозид синаптового спирта, 2 и Е - диглюкозиды сирингареэинола, различающиеся конФормацией. В 15 экстрактах элеутерококка соотношение между элеутерозидами варьирует незначительно и почти не зависит от периода вегетации, от органов расте, ния и составляет А:В:В;Э:Е = 4:5:15: 20 : 12:.1 .Известен способ количественного определения элеутерозидов А, Вс, 8, Р., Е, основанный на выделении из экстракта элеутерококка отдельно каждо - 25 го элеутероэида в кристаллическом виде, методом многократного последовательного хроматограФицеского разделения экстракта на колонке с последую,щим гравиметрическим определением ко зр лицества элеутерозидов. Особенностью данного способа является воэможность раздельного определения всех элеутерозидов, что позволяет применять этот способ для количественного анализа смесей с произвольным соотношением элеутерозидов 1 1.К недостаткам данного способа следует отнести его трудоемкость и длительность на анализ требуется 7"10 дней), невысокую точность (трудно оце нить потери веществ в процессе разделения), низкую чувствительность (для анализа. требуется несколько граммов сухого остатка экстракта), а для про- ведения анализа требуются квалиФициро. ванные химики-аналитики.Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способопределения элеутерозидов А, В, В, 3, Е путем разбавления или упаривания анализируемой смеси до требуемой оптической плотности и определения концентраций по оптическим характеристикам.55Анализируемая смесь в известном способе представляет собой элеутероэидную Фракцию, полученную в результате хроматограйического разделения на колонке исходного экстракта с использованием системы растворителей метанол, хлороФормв соотношении 1:4.Анализируемую смесь доводят до оптической плотности 0,1- 1,4 разбавлениемее метанолом или упариванием. В качестве оптического параметра используютвеличину оптической плотности при дли.не волны 270 нм. Способ определяет суммарную концентрацию элеутероэидов В, Э, Е, а их индивидуальные количества и содержание в смеси остальных элеутерозидов.расчитывают пользуясь известным соотношением между ними.Преимуществами известного способа определения по сравнению с описанным,:выше. являются большая точность опревыделения, простота й сокращение времени анализа 2. К недостаткам известного способа следует отнести то, цто данным методом непосредственно определяется только сумма элеутерозидов В, Р, Е и об индивидуальных количествах каждого эле" утерозида в отдельности можно судить только косвенно, используя известное соотношение между этими компонентами в природных смесях.Кроме того, поскольку действие каждого элеутерозида индивидуально и, по-видимому, механизм действия каждого из них различен, то для оценки качества экстракта совершенно необходимо знать содержание каждого элеутерозида в отдельности. Кроме этого, точность метода снижается в связи с не" воэможностью достаточно полно разде." лить исходную смесь элеутерозидов от примесей методом однократного хромато грж)и рова ния на колон ке (сопутст-; вующие примеси имеют близкие значе" ния ). Известный способ является также достаточно длительным..сЦелью изобретения является расширение Функциональных возможностей способа, повышение чувствительности и точности анализа.указанная цель достигается тем, что согласно способу определения элеутерозидов А, Вл, В, Э, Е путем разбавления или упаривания анализируемой смеси до требуемой оптической плотности и определения концентраций по оптическим характеристикам, два образца анализируемой смеси раэбав" ляют или упаривают до оптической плотности 0,08-0,1,.один - для оп"5 И 63 ределения элеутерозидов В, 3, Е на длине волны в диапазоне 270;300 нм, а другой - для определения элеутерозида Вл на длине волны в диапазоне 360"380 нм, возбуждают Люминесценцию 5 анализируемых образцов на затих же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентрации суммы элеутерозидов В, 3, Е по величине интенсивности люминесценции 1 О на длине волны 345 нм и концентрацию элеутерозида Вл по величине интенсивности люминесценции на длине волны 500 нм, а концентрацию элеутерозида А определяют по известному соотношению между элеутерозидами в их природной смеси по найденным значениям концентраций элеутерозида Вл и суммы элеутерозидов В,З ЕВо втором варианте способа цель 26достигается тем, что согласно спосо бу определения элеутерозидов А, В, В, 3, Е, включающем хроматографическое разделение анализируемой смеси, четыре образца анализируемой смеси, полученные хролатограйическим путем, содержащие в отдельности элеутерозиды А, В 1, В, и сумму элеутерозидов Д и Е, разбавляют или упаривают до величины оптической плотности 0,08- Зо 0,1 при длине волны в диапазоне 270- 300 нм для анализируемых образцов, содержащих элеутерозиды В и сумму Д и Е, и при длине волны в диапазоне р 60"380 нм для образца, содержащего элеутероэид В 1, проводят качественные реакции в соответствующих образцах на наличие элеутерозидов В и А и, в случае их присутствия, возбуждают люминесценцию образцов на тех же его раствором серной кислоты в уксусном ангидриде. По появлению интенсивного красного окрашивания судят о присутствии элеутерозида А.Причем качественную реакцию на элеутерозид Вл осуществляют путем растворения соответствующего образца в воде и обработки полученного раствора солью Со , и наличие элеуте 2.фрозида 0,1 устанавливают по появлению в спектре поглощения раствора новой полосы с слаксииумом 400 нм 1 постепен ное покраснение раствора).С целью повышения точности определения злеутерозида В 1 возбуждение люминесценции и измерение концентрации элеутерозида В л проводят в среде с рН = 12- 13.В способе анализируемой смесью является исходный экстракт элеутеро- . кокка. Из анализируемого экстракта разбавлением водно-спиртовой смесью или водой, либо упариванием готовят два образца с оптической плотностью 0,08-0,1 при длинах волн 270-300 нм (образец для определения элеутерозидов В, О, Е ) и 360-380 нм (образец для определения элеутерозида Вл). Регистрируют спектры люминесценцйи пер" вого и второго образцов при возбужде" нии Ф-светом соответственно 270- 300 нм и 360-380 нм, контролируя при этом соответствие параметров этих спектров спектрам чистых элеутерозидов Вл, В, Э, Е и смеси элеутерозидов В,Э, Г, Параметры спектров люминесценции элеутерозидовположениемаксимума и полуширина полосы) пред-: ставлены в табл. 1.Таблица 1длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентрации элеутерозидов В и суты Д и Епо величине интенсивности люминесценции при 345 нм и концентрацию элеутерозида В по величине интенсивности люминесценции при 500 нм, концентрацию элеутерозида А определяют расчетным путем, сравнивая найденныесоотношения между элеутерозидами В,Ь, Д и Е с их известным соотношениемв природных слесях элеутерозидов. Полуширина полосы лю минесценции (нм) Обозначение элеутерозида Положение максимума люминесценции нсл 492 . 90 508 345 60 Смесь элеутерозидов В, , Е в соотношении 15;12:1 Второй вариант способа позволяет работать с любыми смесями, содержащими элеутерозиды. Качественную реакцию на элеутерозид А осуществляют путем растворения соответствующего анализируемого образца в хлороформе и обработки4 8В тои случае, если отношение интенсивностей люминесценции смеси в областях рН раствора 2-3 и 12- 13 при длине волны возбуждающего света 360- 380 нм значительно отличается от 4, в исследуемой смеси присутствует примесь, спектр люминесценции которой близок к элеутерозиду О, Предположив, что спектр люминесценции этой примеси не зависит от рН, значение интенсивности люминесценции для вычисления концентрации элеутерозида В, находят по соотношению= - (-), (2) гдеи- соответственно интен 2.сивности люминесценции образца при значениях рН 12- 13 и 2-3,В способе укаэанные интервалы длин волн возбуждения люминесценции и значение оптической плотности об-. разцов являются существенными, так как осуществление операций способа вне указанных пределов снижает точность определения ввиду уменьшения интенсивности люминесценции элеуте, розидов и увеличения люминесценции примесей, а также появпения нелинейности в зависимости интенсивности люС целью непосредтвенного, болееточного определения элеутерозидов А, 1 В 1, В,Э, Е исходный экстракт хроматограпируют в тонком слое в системе растворителей хлороформ, метанол, вода в соотношении 40:1 О;1. Местоположение элеутерозидов определяют по зна. чениям К, а также, вырезая полосы шириной 0,5-0,8 см с боков и из середины пластинки (обнаружение при нагревании до 200-250 С по характерной окраске пятен; сине-Фиолетовое - элеутерозид В; оранжевое - Д, Е; элеутерозиды А и Вна хроматограиме отчетливо не определяются ввиду их низкой концентрации и наличия близко расположенных примесей, Установлено экспериментальным путем, что область расположения элеутерозида В непосредственно граничит в областью элеутерозида В, находится над ней и имеет ту же ширину, а элеутерозид А аналогичныи образом располагается над элеутерози, дом В . Компоненты смеси разделяют, вырезая из непроявленной части пластинки полосы, соответствующие обнару 3 59 Значение коэффициента К 0,9763В качестве контроля на точность определения элеутерозида 0 следует пропйсать спектр его люиинесценции при значении рН раствора в области 2-3 и 12-13. При этом интенсивность 3 люминесценции во втором случае должна быть в 3,8-4,2 раза больше, чем в кислой среде. Концентрации суммы элеутерозидов 0 Е, а также элеутерозида В находят по формуле где С - искомая концентрация элеутерозида, моль/л; - интенсивность люминесценции, измеренная в максимуме полосы люиинесценции; и - разбавление изиеряеиого раст. вора по сравнению с исходным экстрактои. 20 К щ -- константа, не зависящая 1 с сцд от прибора, где 11 4 и йу 4 - танген"э сы углов наклона линейных участков кривых зависимости интенсивности лю- Ю минесценции соответствующего элеутерозида или их смеси и эталонного ве"ества соответственно, снятые в ода время, на одном приборе, в одинако" вых условиях. ,ЭОВ качестве люминесценции эталонных веществ в предлагаемои способе исполь зуются аминокислота триптойандлина волны возбуждения 290 нм и люминесценции 345 ни) для определения концентраций элеутерозидов В, Ъ, Е и их, суииы и 1"анилинонашталин-сульфонат длина волны возбуждения 370 нм и люминесценции 500 нм) для определения концентрации элеутерозида В . Величи- щ ны констант К в случае возбуждения люминесценции Уф-светом 290 нм и 370 нм для элеутерозидов В, З, Г и В, соответственно и изиерения люминесценциисоответственно при 3 й 5 нм и 500 нм при ведены в табл. 2, Значение коэффициента К в случае элеутерозида В приведено для его люминесценции при рН 12-13.Таблица 2,минесценции от концентрации элеутерозидов.женным элеутерозидам и элюируют" их затем водныи этанолом или водой, Довс" дя оптические плотности образцов до 0,08-0,1 упариванием или разбаолением бидистиллятом, регистрируют их спект. 5 ры люминесценции при возбуждении в 270-300 нм для элеутерозидов В, Д, Н и в 360-380 ни для элеутерозида В, (при. значениях рН 2-3 и 11-12), прокалибровао предварительно спектро" флуориметр эталонными веществами (для получения значений сф). Параметры полученных спектров люминесценции сравнивают с табличными (табл. 1), Затем измеряют интенсивность люминесценции фракций, содержащих элеутерозиды В, Д, Е при 345 ни и элеутерозид В при 500 нм.Использование в качестве предварительной операции тонкослойной хроиа тограФии позволяет быстро и достаточно полно разделить и очистить элеутерозиды.Так как о наличии элеутерозида А в смеси невозмомно судить по люминес ценции и поглощению, и это вещество трудно различимо на хроматограмме, то его присутствие о экстракте элеутерококка устанавливают по качественной реакции на агликоновую часть молекулы 36 (реакция Либермана"Бурхарда), заключающейся в добавлении к хлоройормному раствору анализируемого вещестоа (в данном случае вещество, элюированное ,из соответствующей области хроматогра 5 1 ической пластинки) одного миллилитра свежеприготовленного раствора нескольких капель концентрированной сер ной кислоты в 5 мл охлажденного льдом уксусного ангидрида. При этои через несколько секунд должно появиться постепенное покраснение раствора, Количество элеутерозида А в случае положи тельной качественной реакции можно оценить по количеству элеутерозида Вт при совпадении количественного соотнощен я д я элеутерозидов В В Д Е в анализируемом экстракте и в природной смеси. Поскольку концентрация э 3 теутерозида А в анализируемом экстЮ ракте расчитыоается из концентрации элеутерозида Вл, точное и достоверное определение последнего является для этого необходимым условием. Поэтому, определяя содержание элеутерозида Вл в исходном экстракте и поле хромато 5 графического разделения, необходимо проверить зависимость спектра люми" несценции при длине волны возбуждения 360-360 нм от рН раствора (при этом люминесценция образца при рН 12 в 3,8-4,2 раза интенсивнее, чеи при нейтральных и кислых рН), а также появление новой полосы с максимумом 400 нм о спектре поглощения элеутеразида В, через несколько минут после добавления к нему соли Со . В тоиЯ л. случае, если соотношение интенсивностей люминесценции при различных эначе" ниях рН не попадает в указанную область, для .определения значения пользуются соотношением (2).. П р и м е р, Проанализирован водно- спиртовый экстракт элеутерококка выпуска хи:лико-фармацевтического завода Санитас" (г. Каунас 1, ноябрь 1980 го" да.1Готовили разбавления бидистиллятом анализируемого экстракта в 20, 50, 100, 200 и т.д. раз, используя для каждой пробы 0,1 мл исходной сиеси. Измеряли оптическую плотность каждого образца при длинах волн 370 и 290 ни при помощи двухлучевого дибйеренциаль" ного спектроботоиетра, отбирая из проб те, оптическая плотность которых при одной из указанных длин волн была в пределах 0,08-0,1. Такому требованию удовлетворили образцы, полученные от разбавления исходного экстракта в 500 раз, - оптическая плотность 0,097 при 290 ни (образец Р 1), и в 200 раз - оптическая плотность 0,093 при 370 нм (образец Г 2). Прокалибро" вали спектроФлуорииетр двумя эталона" ми; триптойан - при длине волны воз"буждения 290 нм и люминесценции.345 нм и 1-анилинонайталин-сульйонат " при длине волны возбуждения 370 ни и люминесценции 500 ни, получив значения г 0 э(Фиг. 1 и 2), кото; рые оказались ровными 4,8 10 и 8.10 соот ветст оенно. Ре гистрирова"ли спектры люминесценции образцов1.и 8 2 при возбуждении Уб-светом290 ни и 370 нм соответственно, добавив-:к образцу 1 2 одну каплю 0,1 н раствора соляной кислоты, а затем после добавления к нему трех капель 0,1 н. раствора едкого натра. Параметры полученных спектров совпали сданными табл. 1, а соотношение. между интенсивностями люминесценции при кислых и щелочных значениях рН среды в случаях возбуждения УО"светом 370 нм оказалось раоныи 3,9. Измеряли интенсивность люминесценции976354 1для образцов 1." 1 и Г 2 при 345 нм и 500 нм соответственно. Найденные по соотношению (1) концентрации элеутерозидов оказались равными, мг/мл.Элеутероэид В 0,7-0,8 зЭлеутерозид В 2,3"2,5Элеутерозид Д 1,9-2,1Элеутерозид Е 0,15-0,25 а найденная по содержанию элеутерози.да В концентрация элеутерозида А в 10 исследуемом экстракте оказалась равной 0,55-0,65 мг/л.Для непосредственного и более точного определения элеутерозидов хроматограФировали 0,5 мл анализируемо го экстракта в тонком слое, используя пластинки пириы "51 цГо" (ЧССР), в системе растворителей хлороформ, метанол, вода в соотношении 40:10:1. От хроматограйической пластинки с обоих 20 боков и в середине отрезали полоски шириной по 0,5 см, Каждую из трех по" лосок проявляли нагреванием на электроплитке о течение 2 мин при 250о По значениям Р, характерной окраске 25 пятен идентифицировали элеутерозиды: В - сине"фиолетовое пятно, Д и ораневое пятно. Зона элеутерозида В располагается непосредственно над В и имеет ту же ширину. Зона элеутера- зО зида А находится выше элеутерозида :В. Используя проявленные полоски в качестве маркера, вырезали из непроявленной основной части пластинки об. .ласти, соотоетстоующие индивидуаль- З ныи элеутерозидам, элюировали их би" дистиллятои (4 мл на каждую пробу), счищая слой силикагеля, и доводили оптическую плотность до 0,08-0,1 при соответствующих длинах волн (370 нм 4 о для элеутерозида В 1 и 290 нм для эле. утерозидов В, Д и Е). Регистрировали спектры люминесценции образцов, содержащих элеутерозиды В, Д и Е при возбуждении УО-светом длины волны 290 ни, которые по параметрам совпа" ли с данными табл. 2, По интенсивности люминесценции 345 нм, калибровочным прямым для злеутерозидов, построенным по калибровке эталонным вещест" вои и значением коэМициентов К(табл. 2), используя соотношение (1) нашли концентрации элеутерозидов В и суммы Д, Е, которые оказались рав" ными (учитывая потери вещества приМ проявлении полосок хроматограммы), мг/ил:Элеутерозид В 2,0"2,2Элеутерозйдь Д,Е 1,8-2,0 Образец, содержащий элеутерозид В)после элюирования разделили на дверавные части, К одной из них добавили 0,1 ил О 1 И р-ра СоС 1 в Н О и черезЯ.5 мин увидели постепенное покраснение раствора. Через 30 мин был прописан спектр поглощения образца, который соответствовал спектру поглощения комплекса элеутерозид В- Го и имелг полосу поглощения с максимумом 400 ни. Ко второй части образца последователь" но добавляли 1 каплю 0,1 н. раствора соляной кислоты и 3 капли 0,1 н. раствора едкого натра, регистрируя после обеих операций спектр лниинесценции при возбуждении 370 нм. Параметры обоих спектров, соотношение их интенсивностей (в щелочной среде интенсивность в 4 раза больше / полностью соответствовали оптическим характеристикам элеутерозида В (табл. 1), По интенсивности люминесцеНции этого образца при щелочном значении рН при длине волны 500 нм, калибровочной зависимости (фиг. 2), значению коэфФициента К (табл. 2), используя соотношение (1), нашли концентрацию элеутерозида В, которая составила (учитывая потери вещества при проявлении полосок хроматограмиы) 0,7-0,8 мг/ил. Пробу, содержащую вещество, элюирооанное из области, соответствующей расположению элеутерозида А, упарили, перерастворили в хлороформе, добавили 1 мл свежеприготовленного раствора 1 капли концентрированной серной кислоты в 1 мл охланденного льдом уксусного ангидрида. Через несколько секунд раст" вор окрасился в бледно-розовый цвет, что говорит о присутствии в нем элеутероэида А. Соотношение между количествами непосредственно определенных элеутерозидов В, В, Д и Е составляет 8:21:19 и несущественно отличается от литературных данных. Есть все 1 основания полагать, что это касается, М элеутерозида А, наличие которогов сиеси было установлено качественно.Его количественное содержание в ис;следуеиом,экстракте, оцененное по концентрации элеутерозида В, и их соотношению в природных смесях, окаЬалось равным 0,6-0,7 иг/ил.Аналогично проводится количественное определение элеутерозйдоо при других длинах волн возбуждения люми. несценции о диапазонах 270"300 нм (для элеутерозидоо В, Д, Е) и 360380 нм (для элеутерозида В,).9763Предлагаемый способ позволяет определить непосредственно раздельно содержание основных элеутерозидов в экстракте элеутерококка. В то же время он достаточно прост, не требует вы-з сококвалиицированных исполнителей, быстр в осуществлении ( 2-3 ч. Поэтому, с одной стороны, он удовлетворяет всем современным требованиям Фармакологии, фармацевтики и медицины, а 10 с другой " для внедрения его в промыш ленность не требуются дополнительные технологические разработки. Предложен ный способ повышает точность и чувст" вительность определения, позволяет : достоверно судить о присутствии в экстракте элеутерококка биологически активных веществ. Способ позволяет более точно использовать сырье и значительно снизить отходы производ о ства. Разработанный способ позволит значительно повысить конкурентоспособ ность отечественного элеутерококка, продаваемого за рубеж, продавать его как лекарственное средство 1 в насто ящее время элеутерококк продается за рубеж как пищевая добавка) что принесет дополнительные прибыли государству за счет повышения рыночной цены. В конечном итоге внедрение предлага- зО емого метода в производство позволяет увеличить объем продаж элеутерококка за границу в 2-2,5 раза. Формула изобретения351. Способ определения элеутерозидов А, В 4В, Д, Е путем разбавления или упариванил анализируемой смеси до требуемой оптической плотности и определения концентраций по оптическим40 характеристикам, о т л и ч а ю щ и йс:я тем, что, с целью расширения пункциональных возможностей, повышения чувствительности и точности анализа, два образца анализируемои смеси раз45 бавллют или упаривают до оптической плотности 0,08-0,1, один - для опре 1 еления элеутероэидов В, Д, Р на дли. йе. волны в диапазоне 2700-300 нм, а другой - для определения элеутероэи-. ф да В на длине волны в диапазоне 360-380 нм, возбуждают люминесценцию образцов анализируемой смеси на этих же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентра цию суммы элеутерозилов В, Д, Е по величине интенсивности люминесценции на длине волны 345 нм и концентрацию 54 14элеутерозида В по величине интенсивности люминесценции на длине волны500 нм, а концентрацию элеутерозидаА определяют по известному соотношению между элеутероэидами в их природных смесях по найденным значениямконцентраций элеутерозида В и суммыэлеутерозидов, В, Д, Е.2. Способ определения элеутерозидов А, В, В, Д, Е путем хроматограического разделения анализируемойсмеси, разбавления или упариванияполучаемых образцов до требуемой.оп"тической плотности и определения концентраций элеутерозидов по оптическим характеристикам, о т л и ч.а ющ и Й с я тем, что, с целью расширения пункциональных воэможностей спосо"ба, повышения чувствительности и точности анализа, Полученные хроматогра"фическим путем четыре образца анализируемой смеси, содвржащие в отдель"ности элеутерозиды А В 4, В и суммуэлеутерозидов Д и Е, разбавляют илиупаривают до величины оптической плотности 0,08-0,1 при длине волны в диапазоне 270-300 нм для анализируемыхобразцов, содержащих элеутерозиды Ви сумму Д и Е, и при длине волны вдиапазоне 360-380 нм для образца, содержащего элеутерозид В, проводяткачественные реакции в соответствующих образцах на наличие элеутерозидов В и А и, в случае их присутствия, возбуждают люминесценцию образ"цов на тех же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определя"ют концентрации элеутерозидов В исуммы Д и Е по величине интенсивностилюминесценции при 345 нм и концентрацию элеутерозида В по величине интен-сивности люминесценции при 500 нм,концентрацию элеутерозида А определяют расчетным путем, сравнивая найденные соотношения между элеутерозида"ми В 4 В, Д и Г с их известным соотношением в природных смесях элеутерози",дов,3. Способ по и. 2, о т л и ч а ющ и Й с я тем, что качественную ре" ацию на элеутерозид А осуществляют путем растворения соответствующего анализируемого образца в хлороформе и обработки его раствором серной кислоты в уксусном ангидриде, и наличие элеутерозида А устанавливают по появ" ление интенсивного красного окрашиванир,97639 15Способ по и. 2, о т л и ч а. ю щ и й с я тем, что качественную реакцию на элеутерозид В осуществляют путем растворения соответствующего образца в воде и обоаботки полу- з ценного раствора солью Со+ и наличие элеутерозида В устанавливают по покраснению раствора,5, Способ по пп. 1 и 2, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью 10 повыаения точности определения элеутерозида В 1, возбуждение люминесценции .и измерение концентрации элеутерозида В проводлт в среде с рН 12" 135 16 Ист очи и ки и ндюр маци и,принлтые во внимание при экспертизеОводов Ю,С, и др. Гликозидыэлеутерококка колючего (Е 1 еойегососсцз Яапасосы), Выделение и некоторые свойства элеутерозидов В и Е.нХииия природных соединений", 1965,Мф 1, с. 3"7.2. Лапчик В.Ф., фролова Г.И.,Оводов Ю.С. количественное определение гликозидов элеутерококка колючего. Методика исследований, - "Растительные ресурсы", 1968, т. У, вып 3,с. 155 (прототип),оваКорректор ЕПодписноеа СССРтийб, 8, 4/л, Проектная,Рева ктвв вЗаказ вко Щ 71 в е е ее и Составитель С. Соколатилло Техрев Т.МаточкаТираж МИИПИ Государственного комитепо делам изобретений и откра35 Москва ЖРачшская не Э е е е е ее е 1ввл"ППП "Патент", г. ужгород, у