Способ отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекции

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 20006 9) (11 я)5 601 И 33 ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИГКНТ СССРИТЕТКРЫТИЯМ ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВ КОМУ СВИДЕ ТВ ственныи медици Иэоименно для отб терийн видуал иммуниЦел сти отб терийн ифди ри чно- ифразом(71) Пермский государ нский институт(56) Совершенствование методов исследования иммунитета и иммунодиагностики,Пермь, 1982, т, 156, с. 26-28.(54) СПОСОБ ОТБОРА ЛИЦ ДЛЯ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ДИФТЕРИЙНОЙ И СТОЛБНЯЧНОЙ ИНФЕКЦИИ(57) Изобретение относится к медицине, а1 менно к эпидемиологии, и предназначенодля отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций, индивидуализированного подхода прииммунизации. Целью изобретения являетсяповышение точности отбора лиц для вакцинации. Указанная цель достигается путемопределения в сыворотке крови титров антител к специфическому антигену в реакциипассивной гемагглютинации. Новизна спобретение относится к медицинк эпидемиологии, и предназначра лиц для вакцинации против дй и столбнячной инфекций - к иизированному подходуации.ь изобретения - повышение тора лиц для вакцинации против дй и столбнячной инфекций.соб осуществляется следующим соба заключается в том, что определяют у лиц индивидуальные титры антител в сыворотке крови к специфическому и неспецифичес кому анти генам, а также среднестатические титры антител к данным антигенам с последующим вычислением индивидуального индекса в виде соотношения, где в числителе. - произведение титра антител к специфическому антигену и среднестатического титра антител к неспецифическому антигену, а в знаменателе - произведение титра антител к неспецифическому антигену и среднестатистического титра антител к специфическому антигену, и при значении индекса менее 3,0 отбирают лиц для вакцинации против дифтерийной, а при величине 1,2 и менее - против столбнячной инфекций. Предлагаемый способ по величине индекса в сравнении с прототипом повышает точность определения индивидуального уровня специфического изменения титра антител к анатоксинам до вакцинации с 85 - 86% до 92 - 97%. 1 табл. Не менее, чем у 25 лиц, предполагаемых для вакцинации, берут из пальца кровь в количестве 0,7-1,0 мл для микроварианта постановки РП ГА или 2-5 мл из вены для ее макроварианта. По инструкции получают сыворотку и определяют в ней титры антител к специфическому и неспецифическому антигенам (Наставление по использованию эритроцитарных диагностикумов из шигелл Флекснера, Ньюкестл и Зонне, приложенного к этим диагностикумам производства40 РП ГА, эритроциты равномерно покрывают всю сферу лунки; переходная форма, отмечается частичная гемагглютинация, широкое кольцо с заметной гемагглютинацией по краю; отрицательная реакция РПГА.Реакцию сопровождают обязательными контрольными исследованиями, проводят контроль диагностикума на отсутствие спонтанной гемагглютинации и на отсутствие агглютининов к эритроцитам баранаТитр антител к антигену Ньюкестл определяют в РПГА макровариантом ее постановки,Сыворотку в количестве 0,5 мл дозатором переносят в лунки 1 ряда планшета. Добавляют в лунки по 0,5 мл забуферного физиологического раствора(рН =7,2), Сыворотку раститровывают дозатором путем последовательного двухкратного разведения 45 50 55 ЛНИИВС, - Наставление по применению дифтерийного антигенного эритроцитарного диагностикума ЦНИИЭ МЗ СССР и др.).Для получения сыворотки взятую кровь для ее свертывания выдерживают при 1 = 5 3-7 С в течение 18 - 24 ч, Пробы центрифугируют при 3000 об/мин 15 - 20 мин. Сыворотку переносят в другую пробирку и при необходимости ее разводят в 2 - 10 раз физиологическим раствором, выдерживают 10 при 1.= 56 С в течение 30 мин, Сыворотку охлаждаютдо комнатной температуры и для освобождения от гетерогемагглютининов к ней добавляют 50% взвесь отмытых формалинизированных бараньих эритроцитов из 15 расчета 0,1 мл этой взвеси на 1,0 мл разведенной сыворотки, Смесь встряхивают и выдерживают при 1 = 3 - 7 С в течение 15-20 ч, центрифугируют при 3000 об/мин. Сыворотку переносят в другую пробирку, 20Приводим микровариант постановки РПГА, используемый в заявке.В лунки первого ряда полистироловых пластинок для микроварианта постановки РПГА переносят дозатором по 0,025 мл сы вороток. Добавляют в лунки первого ряда и последующих рядов по 0,025 мл фосфатного буфера с рН = 7,2. Микродозатором последовательно раститровывают каждую сыворотку так, что в 1 лунке ее разведение будет 30 двухкратное, во 2 - четырехкратное и т,д. Добавляют в каждую лунку по 0,025 мл 0,3% взвеси эритроцитов дифтерийного или столбнячного диагностикума. Планшеты осторожно встряхивают и выдерживают при 35 комнатной температуре в течение 1,5-2,0 ч.Учет результатов реакции проводят по следующей схеме:+- положительная реакция в объеме 0,5 мл, В каждую лунку прИливают по 0,2 мл 1%-ной взвеси эритроцитов диагностикума Ньюкестл. Планшеты осторожно встряхивают и выдерживают при т = 6 - 10 С в течение 16-18 ч и оценивают результаты, Титром антител сыворотки считают максимальное ее разведение, которое оценивается не менее, чем на три креста,Абсолютные величины титров антител (величина, обратная титру антител) к специфическому и контрольному антигенам складывают. Полученные величины делят на количество обследуемых лиц и получают средние величины титров антител.В дальнейшем вычисляют индивидуальные величины индексов соотношения титров антител по формуле, где в числителе произведения титра антител к специфическому антигену и среднестатистического титра антител к неспецифическому антигену, в знаменателе - произведение титра антител к неспецифическому антигену и среднестатистического титра антител к специфическому антигену.Затем эту группу обследуемых лиц вакцинируютанатоксином и через месяц исследуют титры антител к специфическому и контрольному антигенам,Изучают связь между исходными уровнями титра антител к бактериальным анти- генам, индекса соотношения титров антител и специфическим изменением титра антител после вакцинации.По результатам исследований выделяют две группы обследуемых: у первой группы с низким индексом определяют специфическое повышение титра антител, у второй группы с высоким индексом изменение титра антител не выявляют или отмечают специфическое снижение его величины.Результаты исследований возможности определения индивидуального уровня специфического изменения титров антител с использованием для оценки титра антител антигенных эритроцитарных диагностикумов различных серий отражены в ниже приведенных примерах.П р и м е р 1, Определение специфического изменения титра антител к дифтерий- ному анатоксину.Проведены две серии исследований.В первой серии брали кровь в количестве 0,7-1,0 мл из пальца у проживающих в городе Перми 100 обследуемых лиц в возрасте от 17 до 56 лет. Получали сыворотку и определяли в РПГА титр антител к дифтерийному анатоксину с использованием дифтерийного эритроцитарного диагностикума С. 3. активностью 1:3200, выпуска 1987 г.0 НИИЭ МЗ СССР и титр антител к антигену10 15 30 35 40 РПГА с использованием дифтерийного 45эритроцитарного диагностикума С.100, активностью 1:3200, выпуска 1987 г. ЦНИИЭМЗ СССР и контрольному антигену шигеллНьюкестл эритроцитарным диагностикумом С, 37 М 695, годн, 1988 г, ЛНИИВС. 50 55 шигелл Н ьюкестл с применением эритроцитарного диагности кума из этого антигена, С.72. М 387. годн, 1988 г, ЛНИИВС.Показано, что средняя исходная абсолютная величина титра антител к дифтерий- ному анатоксину у 100 обследуемых лиц составила 96 в РПГА. Однако отмечались значительные индивидуальные вариации от 1 до 1280,Средняя исходная величина титра антител к антигену шигелл Ньюкестл у этой группы обследуемых лиц равняется 145, индивидуальные колебания составляли - от 20 до 1280,Средняя величина индекса соотношения титров антител к дифтерийному анатоксину и антигену шигелл Ньюкестл равнялась 3.00. Индивидальные вариации этого показателя колебались от 0.005 до 96,6, По величине этого показателя обследуемых лиц делили на две группы, К первой группе отнесли пиц с индексом менее 3,00, ко второй группе - 3,00 и более.Обследуемых лиц вакцинировали вакциной АДС-М в дозе 0,5 мл С, 6-7, К 1 830, годн. 1988 г.Как видно из таблицы, через 4 недели после введения вакцины титр антител к дифтерийному анатоксину повысился, по средним данным, в 7,72 раза. У лиц первой группы, как и ожидалось, у большинства лиц отмечается повышение титра антител к анатоксину - из 83 у 76 (92 О). У лиц второй группы, наоборот, из 17 у 16(94 О) выявлено снижение титра антител к анатоксину или его величина не меняется. В целом величина индекса в сравнении с известным способом повышает точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции с 85 Д до 92 О, Во второй серии исследований брали кровь из вены у 29 обследуемых лиц мужского пола в возрасте от 20 до 50 лет, По инструкции определяли исходный титр антител к дифтерийному анатоксину в Показано, что средняя величина титра антител в РПГА у обследуемых лиц к дифтерийному анатоксину составила 10, индивидуальные величины равнялись от 1 до 80. Средняя исходная величина титра антител к антигену шигелл Ньюкестл у этих обследуемых составила 50, индивидуальные вариации - от 10 до 320, Величина индекса колебалась от 0,05 до 20,0. К первой группе,20 25 как и в первой серии, отнесли лиц с индексом менее 3,00, ко второй - 3,00 и более.Обследуемых лиц вакцинировали вакциной АДС-М в дозе 0,5 мл серии 6, К 2781, М166, годн, 1989 г. Из таблицы видно, что титр антител кдифтерийному анатоксину, по средним данным, повысился в 21,20 раза. У лиц первойгруппы, как и предсказывалось, у подавляющего большинства лиц отмечается специфическое повышение титра антител канатоксину - из 27 и у 25 (93 О), и только у 1 реакция не выявляется, а у 1 отмечается специфическое снижение титра антител к этому анатоксину, Следует отметить, чтоспецифическая депрессия титра антител отмечается у обследуемого лица с очень низким индексом (0,06), что, по-видимому, связано со специфической иммунологической толерантностью исходной активностифакторов иммунитета к дифтерийному анатоксину,И, наоборот, у обследуемых лиц второйгруппы с индексом 3,00 и выше, как и прогнозировалось, отмечается снижение титров антител или их величина не меняется,Таким образом, по исходной величине индекса в сравнении с известным способом в этой серии точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции повышается с 86 О до 93 оь, а с учетом обследуемого со специфической иммунологической толерантностью, о отбора повышается до 97.П р и м е р 2. Определение специфического изменения титра антител к столбнячному анатоксину,Для исследования исходный титр антител брали кровь в количестве 4 - 5 мл из вены у 29 мужчин в возрасте от 20 до 40 лет. По инструкции определяли исходный титр антител к столбнячному анатоксину в РПГА и использованием эритроцитарного антигенного диагностикума серии 80 - 200 активностью 1:2560, выпуска 1987 г. ЦН И И Э МЗ СССР и контрольному антигену шигелл Ньюкестл эритроцитарным диагностикумом серии 37, М 695, годн. 1988 г. ЛНИИВС,Показано, что у обследуемых лиц средняя величина титра антител к столбнячному анатоксину составила 87, индивидуальные вариации - от 1 до 1280. Средняя величина титра антител к антигену шигелл Ньюкестл равнялась 50, индивидуальные копебания - от 20 до 160. Индивидуальная величина индекса колебалась от 0,003 до 18,4. По величине этого показателя обследуемых лиц делили на две группы. К первой группе отнесли лиц с индексом 1,2 и менее, ко второй - выше 1,2.354050 Через 4 недели после вакцинации АДСМ в дозе 0,5 мл серии К 2781, М 166, годн.1989 г. отмечалось, по средним данным, специфическое повышение титра антител к столбнячному анатоксину в 12,5 раза, Изменение титра антител к анатоксину носило строго специфический характер, Титр антител к антигену щигелл Ньюкестл не менялсяили отмечалось несущественное колебаниеего величины, У лиц первой группы с низкиминдексом, как и прогнозировалось, у подавляющего большинства отмечается повышение титра антител к столбнячному анатоксину - из 25 лиц у 24 (96 оь), и только в 1 наблюдается снижениетитра антител, И, наоборот, у лиц второй группы с большим индексом у всех трех обследуемых лиц изменения титра антител к столбнячному анатоксину не выявлено,Таким образом; в этой серии исследований точность отбора лиц для вакцинации против столбнячной инфекции по величине индекса в сравнении с прототипом повышается с 9 Зо до 97 О.Предложенный способ может быть использован и для отбора для вакцинации против других инфекций, а также изучения закономерности специфического изменения титра антител при йммунизации экспериментальных животных бактериальными антигенами.П р и м е р 3, Определение специфического повышения титра антител к щигеллам Зон не. Исследования проведены с кровью 6 кроликов породы шиншилла весом около 3 кг, Животных вакцинировали антигеном шигелл Зонне подкожно в дозе 600 млн, микробных тел в 0,2 мл. До и после вакцинацииопределяли титры антител к специфическому антигену шигела Зонне и контрольному антигену шигелл Ньюкестл в РПГА макровариантом ее постановки.Показано, что, несмотря не существенные индивидуальные колебания исходныхтитров антител к антигенам шигелл Зонне и Ныюкестл, отмечается прямая корреляционная связь между этими величинами, Коэффициент ранговой корреляции(г) составляет+0,73 + 0,21, Р 0,05. В связи с этим индивидуальная величина индексов соотношения титров антител колеблется незначительно - от 0,32 до 2,56.Через 1 неделю после вакцинации от-.мечается специфическое повышение титров антител к антигену шигелл Зонне, по средним данным, в 51 раз, Однако определяются значительные индивидуальные колебания кратности повышения его величины - от 4 до 256 раз. 101520 2530 Преимущества предлагаемого способа наиболее четко прослеживаются при сравнительной оценке связи между исходной величиной титра антител к антигену шигелл Зонне, индексом соотношения титров антител и уровнем специфического повышения титров антител к вводимому антигену. Установлена склонность к обратной корреляционной связи между исходным титром антител к антигену щигелл Зонне и специфическим изменением его величины после вакцинации, Однако эта связь носит статистически недостоверный характер (г = -0,60 +0,29, Р 0,05),Наиболее ярко проявляется обратная корреляционная связь между исходной величиной индекса и уровнем специфического повышения титра антител к энтигену шигелл Зонне (г = -0,96 + 0,04, Р 0,001), У кролика с низким индексом (0,32) отмечается значительное повышение титров антител - в 256 раз. И, наоборот, у животных с относительно высоким индексом (1,28 - 2,56) наблюдается четырехкратное повышение титра антител.Таким образом, полученные результаты исследований убедительно подтверждают возможность и по индивидуальной исходной величине индекса проводить отбор обследуемых для вакцинации против различных инфекций,Установлено, что для точного определения специфического повышения титра антител до введения анатоксинов в организм по величине индекса к специфическому и контрольному антигенам необходимо определение титров антител не менее чем у 25 обследуемых лиц. При снижении количества обследуемых точность способа снижается. Исследования титра антител в РПГА следует проводить с использованием энтигенных диагностикумов одной серии.Для определения индивидуальной величины индекса во всех сериях исследований изучали титр антител к антигену шигелл Ньюкестл. Этот выбор основан на литературных данных, в которыхустановлена прямая корреляционная связь между исходными титрами антител к антигенам этой группы микробов у здоровых людей, Данные литературы полностью подтвердились в наших исследованиях, что позволяет сделать обоснованное заключение, что именно исходный титр антител к антигенам дизентерийной группы микробов лучше всего отражает индивидуальный уровень неспецифической гуморальной защиты организма от микробов, участвующей в регуляции специфического изменения титра антител к анатоксинам.Точность отбора лиц для вакцинациипротив дифтерийной и столбнячной инфекций повышается при исследовании исходного титра антител у однородной группылюдей: одной местности, одинакового возраста и т.д.Преимущества предлагаемого способав сравнении с известным прежде всего заключается в повышении точности, Предлагаемый способ по индивидуальной 10величине индекса в сравнении с известнымповышает точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции с 8586 . до 92 - 970 , а против .столбнячнойинфекции с 93 до 97% в различных сериях 15исследований.Следует отметить, что у небольшого количества лиц по величине индекса труднопроводить отбор лиц, подлежащих для вакцинации. Однако эти трудности связанв, 20как правило, с лицами, индекс которых близок к пограничному - к средней его величине, что требует дополнительногоприцельного исследования активности факторов иммунитета, 25Отличительные особенности предлагаемого способа с известным способом иммунодиагностики инфекций отражены втаблице,Как видно из таблицы, предлагаемый 30способ рекомендуется использоать преимущественно в области эпидемиологиидля отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций,В то же время известный способ используется для иммунодиагностики инфекций.Предлагаемый способ позволяет проводить отбор лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций до 40иммунизации анатоксинами,При известном способе определениеиндекса проводится в период инфекционного процесса,Важным преимуществом предлагаемого способа является возможность его использования для отбора лиц длявакцинации не только против дифтерийнойи столбнячной, но и против других инфекций. 50Применение известного способа иммунодиагностики инфекций ограничено. Этотспособ невозможно использовать при рядеинфекционных заболеваний, в том числедифтерии и столбняка. Ограничения связаны прежде всего с тем, что иммунодиагностика инфекций осуществляется повеличине индекса соотношения титров антител больного, превышающий соответству- .ющую. величину здоровых доноров не. менее, чем в 4 раза. Этот диагностический критерий выведен по результатам исследований, свидетельствующих о высокой прямой корреляционной связи между исходными титрами антител у здоровых лиц к антигенам дизентерийной группы микробов, сальмонелл, кишечной палочки и стафилакокков. В связи с этим индекс здоровых доноров не превышает величину, равную 4.Однако в наших исследованиях не установлена прямая корреляционная связь между титрами антител к дифтерийному, столбнячному анатоксинам и антигенам дизентерийной группы микробов. Как было отмечено, у здоровых лиц до их вакцинации определяются значительные индивидуальные колебания величины индекса к дифтерийному анатоксину и антигену шигелл Ньюкестл от 0,005 до 966; к столбнячному анатоксину и антигену шигелл Ньюкестл от 0,003 до 18,4. Индивидуальные вариации величины индекса до вакцинации, по-видимому, связаны с массовой активнойпрофилактикой дифтерии и столбняка. В связи с этим по величине индекса иммунодиагностика этих инфекций невозможна, И, наоборот, в предлагаемом способе индекс позволяет проводить отбор лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций.Таким образом, определяемые в предлагаемом способе конкретные исходные величины индексов, позволяющие проводить. отбор лиц для вакцинации анатоксинами не только по общему состоянию организма, оцениваемого по клинической картине, но и по уровню специфической (антитела к вводимому анатоксину) и неспецифической (антитела к контрольному антигену) гуморальной защиты от бактерий конкретного организма, что позволяет индивидуализированно подходить при вакцинации.Учитывая, что титры антител к бактериальным антигенам в РПГА определяются с использованием коммерческих, выпускаемых отечественной промышленностью антигенных эритроцитарных диагностикумов предлагаемый способ может быть использован для отбора лиц вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций практически в любой иммунологической лаборатории.Ф ар мула изобретенияСпособ отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекции, включающий определение в сыворотке крови титров антител к специфическому антигенч в реакции пассивной гемагглютинации,1720006 12 П изнэк П агаемый Известный Область применения В эпидемиологии для отборалиц для вакцинации противдифтерийной и столбнячнойинфекцийДо вакцинации В клинике инфекционных заболеваний для иммунодиагностики инфекций Сраки исследования Возможности использованияВ период инфекционного процесса Ограничено при ряде инфек.ций, в том числе при и те ии и столбняке, При вакцинации практически любым бактериальным антигеномСоставитель П.БонарцевТехред М.Моргентал Корректор О.Кравцова Редактор И.Сегляник Заказ 769 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, у лиц выявляют индивидуальные титры антител к специфическому и неспецифическому .антигенам, определяют среднестатистические титры антител к данным анти- генам с последующим вычислением индивидуального индекса в виде соотношения, где в числителе - произведение титра антител к специфическому антигену и среднестатистического титра антител к не- специфическому антигену, а в знаменателе - произведение титра антител к неспецифическому антигену и среднестатистического 5 титра антител к специфическому антигену,и при значении индекса менее 3,0 отбирают лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции, а при величине индекса 1.2 и менее отбирают лиц для вакцинации про тив столбнячной инфекции,