Способ прогнозирования течения воспалительного процесса в легких

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 9) П 1 12 01 И 33/53 // С 3 49 3,:Е 8 ИоВ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ С ЛгБсБ 10 4218637/28-1425.02.8707.05,89, Бюл. Р 17Белорусский научно-исслкий институт туберкулезА,К.Абрамовская,. С.В.Сауркова и И.В.Коваленко615,375 (088.8)Авторское свидет3325, кл, А 61 В(57) СОБ ПРОГНОЗИРОВАН ЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА бретение относитс стности к пульмон ть использовано д ТЕЧЕНИЯЛЕГКИХк медици логии и я диагнос в чет б ти ных про шение т левания рактера ицине,ожет ики ных проереходаческое,ое тетия болезни. Целью шение точти преципитата.акции готовят д 1 - это 0,1 М б (3,410 г борной ры растворяют в де и доводят об2 готовят путем реактива "Полиэ Для пров ва раство оратный б дения реаРаствор уфер рН 8,4 4,275 г бу ованной во ). Раствор ия 10 гль" в ления хар неспецифи болеванияСпособ кислоты, дистилли ем до 1 растворе ипенглик зом. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ ктера течения воспалительссов в легких. Цель - повыности прогнозирования забоегких за счет выявления х ечения процесса при неспе Изобретение относится к ме в частности к пневмологии, и быть использовано для диагнос характера течения воспалитель цессов в легких и бронхах и п их в затяжное, первично-хрони прогрессирующее или осложнены чение на ранних стадиях разви зобретения является повыости способа за счет выявктера течения процесса при еских воспалительных залегких и бронхов.осуществляют следующим обцифических заболеваниях легких. Дляэтого определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов и титр антител к бактериям, вызвавшим воспали"тельный процесс и выделенным из мокроты или содержимого бронхов больныхколичественным микробиологическимметодом (при содержании в 1 мл мокроты микробных тел более 110), ипри значении уровня циркулирующихиммунных комплексов от 170,5 до267,5 усл.ед. и титра антител от1:40 до 1:150 определяют затяжнойосложненный характер течения процесса и иммуноповреждающее действиеиммунных комплексов в легочной ткани,при значении уровня циркулирующихиммунных комплексов от 90,4 до169,6 усл.ед. и титра антител от1:170 до 1:620 - благоприятное течение воспалительного процесса. Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) в сыворотке крови определяют по методу Наз 1 оча Ч. в модификации Гриневич Ю.А., основанному на селективной преципитации комплексов антиген + антитело в 3,753-ном полиэтиленгликоле с последующим спектрофотометрическим определением плотнос240 мл раствора 1. Кровь у больныхберут из вены в количестве 5 мл, выделяют сыворотку для исследования.В пробирку вносят 0 3 мл сыворотУ5ки, добавляют 0,6 мл раствора 1, перемешивают и переносят по 0,3 мл вдве пробирки. В одну из них добавляют 2,7 мл раствора 1 (контроль), вдругую 2,7 мл раствора 2 (опыт). Содержание пробирок тщательно перемешивают и оставляют на 60 мин прикомнатной температуре, после чегоопределяют оптическую плотность образцов на спектрофотометре СФвкюветах размером 11 см при 450 нм.Высчитывают разность показателейоптической плотности, результат умножают на 1000 и получают количествоПИК в 100 мл сыворотки крови. Ответ 20выражают в единицах оптической плотности,Реакцию непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) выполняют с аутоштаммомбактериальной инфекции, выделенным 25путем посева мокроты больного количественным методом с колибровочнойпетлей. Для этого полученную от больного мокроту разводят 1;2 изотоническим раствором натрия хлора, встряхивают, гомогенизируют. Затем петлейразмером 88 см (0,01 мл) вносятмокроту (1 петлю) в 5 мл 2 -ной пептонной воды, Получают разведение110-", После готовят второе разведение мокроты; 1 петля уже полученно 35го разведения (1 " 10 9 вносится в5 мл 2 -ной пептонной воды. Получаютвторое разведение мокроты 210Чашку Петри с 20 -ным кровянымагаром делят на два сектора и производят посев каждого разведения мокроты по О, 1 мл. Чашки Петри помещаютв термостат, Предварительный учет результатов производят через 24 ч,45окончательный результат получают через 72 ч. Идентификацию выделенногоматериала проводят с учетом культуральных и морфологических свойств.Для подсчета количества микробовв 1 мл мокроты количество микробных50колоний в секторе с разведениеммокроты 2 10 делят на 2 и умножа 1ют на 10.Если роста в секторе с разведениеммокроты 210 нет, то учитываютпервый сектор с разведением 1 10 ,Для этого количество колоний умножают на 10. Результат выражают в количестве микробных тел выделенного возбудителя в 1 мл мокроты (например, 8104 микробных тел в 1 мл мокроты или 310 микробных тел в 1 мл мокроты).Бактериальную культуру, полученнуюпри посеве мокроты больного, используют для постановки реакций непрямой иммунофлюоресценции в качестве аутоштамма. Постановку реакции проводятпо общепринятой методике. На тщательно обезжиренных предметных стеклах петлей готовят мазки выделенных бактериальных культур (6 стекол), После подсушивания на воздухе мазки фиксируют над пламенем или в метаноле (на 10 мин погружают в стакан),Сыворотку обследуемого больного разводят физиологическим раствором от 1:20 до 1:640 (в разведении). Затем каждое разведение сыворотки наслаивают на приготовленные предметные стекла с мазками бактериальных культур и помещают стекла на 30- 40 мин в термостат, Диагностическую люминесцентную кроличью сывороткупротив иммуноглобулинов человека разводят в указанном на этикетке ампулы объеме дистиллированной воды (1:32). Предметные стекла вынимают из термостата и промывают водопроводной водой (2-5 мин), Люминесцентную сыворотку наслаивают на промытый препарат и выдерживают при комнатной температуре 15-20 мин, Затем мазки тщательно промывают водопроводной водой (по 10 мин каждый), подсушивают на воздухе и просматривают под люминесцентным микроскопом.1Результаты оценивают по интенсивности свечения (люминесценции) по периферии микробной клетки в различных разведениях исследуемой сыворотки и выражают в титрах антител, За титр антител у данного больного принимают то наибольшее разведение сыворотки, при котором еще регистрируется свечение периферии клеток, Специфичность реакции контролируют путем нанесения люминесцентной сыворотки непосредственно на мазок микроорганизмов - антигенные препараты, подлежащие исследованию. В этом случае свечение всегда отсутствует.Предлагаемый способ диагностики характера течения неспецифичных воспалительных заболеваний легких апробирован в клинике БелНИИ туберкулезана 40 больных, из них 28 мужчин и12 женщин в возрасте от 25 до 55 лет.Больные были распределены по клиническим формам заболевания органовдыхания: больные острой пневмонией -10 человек, хроническим бронхитом -13 человек, хронической пневмонией -7 человек, абсцессами легких - 7 человек, бронхоэктомической болезнью -3 человека.Всем больным проводилось комплексное клинико-лабораторное обследование в начале и в процессе леченияс обязательным исследованием содержа ния циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови и титраспецифических антител к бактериям,вызвавшим развитие воспалительногопроцесса в легких и .бронхах и выделенным из мокроты или содержимогобронхов больных,Для установления диагностическогоуровня ЦИК в крови были исследованысыворотки 30 здоровых лиц, (контроль 25ная группа). В этой группе уровеньЦИК составил 91,0+3,6 услед. Этопозволило установить диагностическийтитр ЦИК (М + 2 6, где б - стандартное отклонение), выше которого(128 усл.ед.) результаты расценивались как положительные.За диагностическое значение титраантител в реакции непрямой иммунофлюоресценции с аутоштаммом бактерий были приняты следующие показатели; для пневмококка 1;40 и выше, дляостальных возбудителей 1:20 и выше. Анализ содержания ЦИК и титров антител к выделенной у больных бактериальной аутоинфекции в сыворотке ,крови производили с учетом результатов ретроспективной оценки характера течения воспалительного процесса в бронхолегочной системе. Это позволило выделить две подгруппы больных по характеру течения заболевания,Первую подгруппу (20 человек) составили больные, у которых в течение 2-3 недель проводимого комплексного 50 лечения наступало клиническое выздоровление или стойкая ремиссия болезни с дезинтоксикацией организма (отмечалась нормализация общего состояния больного, показателей анализов 55 крови, физикальных данных) и рассасыванием воспалительных изменений в легких и бронхах, подтверждаемое рентгенологическими методами исследования и динамическим наблюдением.Вторую подгруппу (20 человек)составили больные с затяжным, прогрессирующим или осложненным течением воспалительного процесса, стенденцией к переходу острого заболевания в первично-хроническую фазуего развития. У больных второй подгруппы в течение первых трех неделькомплексного лечения наступало только частичное улучшение общего состояния (исчезновение некоторых клинических проявлений болезни) с длительным сохранением патологических изменений в бронхолегочной системе, выявляемых физикальными, лабораторнымии рентгенологическими методами исследования и результатами динамическогонаблюдения,Клинико-лабораторные исследованиянаблюдаемых больных производили вначале и в процессе лечения (через2-3 недели).Результаты иммунологических исследований показали, что содержаниеЦИК в сыворотке крови и титры антител к аутоштаммам выявленной бактериальной инфекции в начале и ь процессе лечения достоверно различны убольных указанных двух подгрупп изависят от характера течения заболевания.У больных первой подгруппы (сблагоприятным течением-процессаклиническим выздоровлением или развитием стойкой ремиссии) в началелечения определялось умеренно повышенное содержание ПИК от 90,4 до169,6 усл,ед, (у 852 больных) и высокие титры антител в сыворотке крови от 1:170 до 1:620 в сравнении сконтрольной группой, и средний уровень их составил соответственно135, О+3, 1 усл.ед, и 5, 76+0, 15 (приперечислении титров антител в 1 п).В процессе лечения уровень ЦИК всыворотке крови больных этой подгруппы снизился до нормы и составлялв среднем 99,0+4,7 усл.ед,У больных второй подгруппы (с затяжным, прогрессирующим или осложненным течением) содержание ЦИК в сыворотке крови в начале лечения былов 1,7 раза выше, чем у больных первой подгруппы, зарегистрировано повышенным у 957 больных от 107,5 до267,5 усл.ед. и средний уровень их( 0,001), тогда как уровень антителв крови был заметно снижен от 1:40до 1:150 в сравнении с первой под 5группои больных и в среднем составил4,38+0, 13 1 п (Р ( О, 001),В процессе лечения у больных этойподгруппы уровень ЦИК продолжал оставаться высоким и составил в среднем180,5+10,5 усл.ед являясь неблагоприятным прогностическим показателем,В результате статистической обработки имевшихся данных были полученыпограничные значения показателей ЦИК 15и титров антител, характеризующих переход болезни в затяжное, прогрессирующие и осложеннное течение.Для показателей ЦИК пограничныезначения были получены: для больных 20первой подгруппы М, = Г 1 - с, М т == М +;, т.е. М, = 135,0 + 34,690,4 уел.ед., М д = 135,0 + 34,6169,6 усл.ед., для больных второйподгруппы М, = М - 3, М, = М + 8, 25т.е. М, = 219,0 - 48,5 = 170,5 усл.ед.М= 219,0 + 48,5 = 267,5 усл.ед.Для показателей титров антител вреакции НИФ пограничные значения были получены: для больных первой подгруппы М, = М - б, М = М +й, т.е.М, = 5,76 - 0,62 = 5,14, М= 5,76 ++ 0,62 = 6,38 (в титрах антител М,- 1:170, М= 1:620), для больныхвторой подгруппы М = М - Ь М35= М +г т,е, М= 4,38 - 0,60 =- 3,76, М = 4,38 + 0,60 = 4,98 (втитрах антител М, = 1:40, М =- 1: 150) .При сравнении ЦИК и титра бактериальных специфических антител в сыворотках крови наблюдаемых больных была замечена их обратная корреляционная связь, рассчитан коэффициент корреляции (г = -0,91, Р0,001), чтооценивается как сильная корреляцион 45ная связь.1Таким образом, неблагоприятным прогностическим признаком течения неспецифического воспалительного иро цесса в бронхолегочной системе является высокое содержание уровня ЦИК и низкие титры антител к аутоштаммам бактериальной инфекции, определяемым в сыворотке крови больных в начале заболевания. При таком соотношении указанных иммунологических показателей в сыворотке больного накапливается в избытке антиген, который не/может быть элиминирован из организмабольного в силу дефектного иммунногоответа организма больного (об это свидетельстнуют низкие титры антителк аутоштамму бактериальной инфекции).Избыточное содержание антигена в сыворотке больного вызывает образование малых (менее 158) и промежуточных (158-198) ЦИК, которые длительноциркулируют в кровотоке больных, плохо элиминируются и откладываются ворганах-мишенях (в частности, в легких и бронхах), оказывая иммуноповреждающее действие в тканях органов,тем самым еще более усугубляя течение воспалительного процесса.11 атогенность высокого уровня ЦИКв сыворотке крови больных неспецифическими воспалительными заболеваниями легких при одновременно низкихтитрах специфических антител в сыворотке крови была подтверждена морфологическими исследованиями. У 11 больбольных с прогрессирующим течениемвоспалительного процесса во времяоперативного вмешательства бралибиоптаты легких и бронхов для исследования. На биопсийном материалепроводили гистологические и иммуноМморфологические исследования. На серийных криостатных срезах легкихприменяли прямой и непрямой вариантыиммунофлюоресцентного метода Кунса смоноспецифическими антисывороткамипротив иммуноглобулинов человекакласса А, 1, С, М и Сз-фракции комплемента и метод гетерологического комплемента по Гольвассеру-Шепарду (спостановкой контрольных реакций) длявыявления фиксирующих иммунных комплексов (ФИК) в тканях. Полученныеданные сопоставлены с морфологическими исследованиями.Был обнаружен высокий уровеньФИК в легочной ткани у больных с неспецифическими заболеваниями легкихи установлена связь между распространенным (зона патологического процесса и вне ее) иммунокомплекснымповреждением и прогрессированиемвоспалительного процесса в легких.П р и м е р 1, Больной Д.,36 лет поступил в клинику институтас диагнозом: очаговая пневмония внижней доле правого легкого, При поступлении общее состояние среднейтяжести. На рентгенограмме органовгрудной клетки в нижней доле правоголегкого определялись очаговоподобцыеинфильтративные тени. Иэ мокротыбольного выделен пневмококк (810микробных тел в 1 мл мокроты), В сыворотке крови больного титр антител 5к выделенному пневмококку составил1:640 (1 п 6,5), ЦИК 138 усл,ед, Впроцессе лечения (через 3 недели)содержание ЦИК снизилось до нормы(90 усл.ед.). Общее состояние больного нормализовалось. При аускультациы в легких определялось везикулярное дыхание, хрипы не прослушивались.Анализ крови: СОЭ - 12 мм/ч, количество лейкоцитов - 7,210 9 /л,э - 47., п - 27., с - б 27 лимф.287, мон. - 47. Рентгенологическиинфильтративные изменения в легкихрассосались. Наступило клиническоевыздоровление больцого в относительно короткий период времени,0 благоприятном течении остройпневмонии свидетельствовали иммунологические исследования - умеренное25увеличение ЦИК и высокий уровень антител в сыворотке крови больногоопределялись в начале лечения,П р и м е р 2. Больной Л.,38 лет поступил в клинику институтас диагнозом: острая очаговая пневмония в нижней доле слева. При поступлении общее состояние средней тяжести. На рентгенограмме органов грудной клетки слева в прикорневой зонелегочный рисунок усилен, определяется инфильтрация легочной ткани. Измокроты больного выделец гемолитический стрептококк (1210микробныхтел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови больного титр ацтител к выделенному стрептококку составил 1;80(1 п 4,4), ЦИК 180,0 усл.ед.В процессе лечеция (череэ 3 недели) содержание Ц 11 К увеличилось до190 усл.ед. Признаки общей ицтоксикации организма больного уменьшились,нормализовалась температура, однакопо-прежнему беспокоила общая слабость, кашель с выделением мокроты,При. аускультации определялось жесткое дыхание. Рецтгецологически в легких выявлялось некоторое рассасывание инфильтративцых изменений, попрежнему сохрацялцсь перибронхиальные и периваскулярцые ицфильтративные 55изменения н прикорневой зоне левоголегкого.В данном случае имело место затяжное течение воспалительного процесса в легких с выраженной тенденцией к его первично-хроническому течению. О затяжном течении воспалительного процесса в легких можно было су-дить по высокому содержанию в сыворотке крови больного ЦИК и низкомууровню специфических антител, определяемым в начале развития заболевания.П р и м е р 3. Больная Д.,28 лет (история болезни Р 912) поступила в клинику института с диагнозом: хронический бронхит в фазеобострения. На рентгенограмме органов грудной клетки легочные поля безвидимых очаговых теней, усилен легочный рисунок в нижних отделах обоихлегких. Из мокроты больной выделензеленящий стрептококк (15 " 10микробных тел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови титр антител к выделенной культуре составил 1:320 (1 п 5,3),ЦИК 150,0 усл.ед, В процессе лечения(через 20 дней) содержание ЦИК снизилось до 115 усл.ед, Общее состояние больной нормализовалось, исчезли все жалобы. Фиэикально в легкихперестали прослушиваться хрипы, Показатели общего анализа крови нормализовались. Рентгенологические исследования патологию в легких не выявили. В данном случае обострение хронического бронхита было купировано втечение 20 дней. Бопьная выписанапод наблюдение участкового терапевта в удовлетворительном состоянии. Втечение года обострения хроническогобронхита на наблюдалось, следовательно, после лечения наступила стойкая ремиссия заболевания. Благоприятный прогноз течения болезни был установлен в начале лечения (умеренноеувеличение 11 ИК в сыворотке кровибольной и высокий титр антител к выделенному из мокроты больного стрептококку).П р и м е р 4. Больная Н., 34 года. Поступила в клинику институтапо поводу хронического гнойногобронхита в фазе обостроения. Больнахроническим бронхитом около 10 лет.Последние 5 лет отмечала частые и затяжные обострения (2-4 раза в году).При поступлении общее состояние средней тяжести. На рентгенограмме органов грудной клетки: в обоих легкихизбыточен легочцый рисунок, в правомлегком перцброцхиальцая инфильтрация,левый корень расширен,1478123 течения неспецифических воспалительных болезней органов дыхания в начале лечения и перехода острогопроцесса в хроническую фазу заболевания, хронического процесса - впрогрессирующую и осложненную фазуболезни в 953 случаев. Способ прост, удобен, нетрудоемок и точен, для своего проведения не требует больших затрат рабочего времени и может быть внедрен в работу практического лечебно-профилактического учреждения любого уровня. Формула изобретения Составитель Г.КрюковаТехред Л.Олийнык Корректор С.Черни Редактор С.Пекарь Заказ 2357/44 Тираж 790 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина, 101 Из мокроты больной выделен пневмококк (10 " 10 микробных тел в 1 мл мокроты) и р-гемолитический стрептококк (1410 микробных тел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови титр антител к пневмококку составил 1:80, к стрептококку 1:40, содержание ЦИК 220,0 усл.ед. В процессе лечения (череэ 4 недели) содержание ЦИК возросло до 276,0 усл.ед. Общее состояние больной улучшилось, однако рентгенологически в нижней доле легкого сохранялись перибронхиальные и периваскулярные воспалительные изменения. 15 На бронхограмме в этой зоне легкого определялись бронхоэктаэы. Через 1,5 мес консервативного лечения произведено оперативное вмешательство (частичная резекция ижицей доли левого легкого). Послеоперационный пе" риод протекал без осложнений. В ткани удаленного легкого обнаружены фиксированные иммунные комплексы, что подтвердило иммунопатологическое действие иммунных комплексов на ткань легких. Через 3 недели после оперативного вмешательства больная выписана иэ клиники в удовлетворительном состоянии без признаков интоксикации.В данном случае проводимое консервативное лечение в течение первых 2 мес было неэффективным. Течение заболевания оказалось прогрессирующее и осложненное (развились бронхо эктазы).Таким образом, предлагаемый способ дает возможность повысить точность диагностики прогноза характера Способ прогнозирования течениявоспалительного процесса в легких путем исследования крови, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения точности прогнозированияза счет выявления характера теченияпроцесса при неспецифических воспалительных заболеваниях легких и бронхов,в исследуемой крови определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов и титры антител к бактериям,выделенным из мокроты больного, ипри уровне циркулирующих иммунныхкомплексов от 170,5 до 264,5 ед. оптической плотности и титре антителот 1:40 до 1: 150 прогнозируют затяжной осложеннный характер течения заболевания, а при уровне иммунных компкомплексов от 90,4 до 169,6 ед. оптической плотности и титре антител1:170 до 1:620 - благоприятное течение воспалительного. процесса,