Способ определения эффективности действия гормонов на мозговые структуры

ОП ИСАНИЕИЗОЗРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеслублик,3 верьянова твенный кий госу) Заявитель 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЙСТВ ГОРМОНОВ НА МОЗГОВЫЕ СТРУКТУРЫИзобретение относится к медицине, а именно к способам экспериментального анализа нейрохимического механизма влияния гормонов на поведение животных.Известен способ определения эффективности действия гормонов на мозговые структуры, при осуществлении которого в хронических опытах у крыс производятся с помощью микроканюли микроинъекции в мозговые структуры гормонов или веществ, избирательно возбуждающих и блокирующих мембранные белки-рецепторы и используются изменения электроэнцефалограммы. Эти изменения оцениваются путем сопоставления с энцефалограммой, зарегистрированной после микроиньекции в исследуемую структуру физиологического раствора 1.Однако при осуществлении известного способа исследование выполняется в условиях спонтанного поведения, оценка которого не производится. Изменения же электрической активности мозга не эквивалентны изменениям поведения, Кроме того, микро- инъекции создают искусственно высокие локальные концентрации гормона, и деятельность первых клеток в этих условиях может существенно отличаться от нормальной. 1 с едицинский ийститут, -,"щ. .щ1 ЦЧ Между тем, в естественных условиях нейроны .различнйх мозговых структур обладают неодинаковой способностью извлекать гор.моны из околоклеточной структуры и аккумулировать их. Таким образом, известный 5 способ не позволяет производить в условиях,близких к физиологическим, анализ механизма системного влияния гормонов на целостную интегративную деятельность мозга, обеспечивающую целенаправленное поведение.Целью изобретения является повышениеточности определения направленности системного действия гормона на рецепторы головного мозга.Поставленная цель достигается тем, что 1 согласно способу определения эффективности действия гормонов на мозговые структуры, лабораторным животным вводят фармакологические вещества, вызывающие возбуждение или блокирование соответствующих рецепторов, далее внутрибрюшинно вводят гормон, затем проводят болевое раздражение электрическим током, увеличивая напряжение от 2 до 170 В до возникновения ответных реакций животных на раздражение регистрируют пороговое напряжение дляэтого крысам Вводили внутримышечно0,1 О/О-ный раствор амизила в дозе 2 мг/кг.Через 30 мин крысы попарно были исследованы в камере и получены количественныепоказатели агрессивно-оборонительного поведения (табл. 1 и 2).На 6-й группе животных исследованодействие АКТГ на фоне блокады М-холинорецепторов. При этом крысам вводили внутримышечно амизил - 0,1/,-ный раствор вдозе 2 мг/кг - и через 10 мин внутрибрюшинно - АКТГ в дозе 1 ед,/кг. Затем через20 мин регистрировались показатели агрессивно-оборонительного поведения (табл. 1и 2).Затем для каждой группы животных производился расчет средних величин пороговвозникновения реакций и продолжительности позы угрозы, а также частоты драк впроцентах от числа испытаний (табл. 3).Количественные показатели, полученные наразличных группах были сопоставлены покритерию Стьнедента с целью определениядостоверности различий.Результаты, полученные в описанных опытах, суммированы в табл. 3.Приведенные результаты опытов позволяют сделать следующие выводы.Примерение АКТГ ускоряет нарастаниестраха и развитие агрессивно-оборонительного поведения крыс при болевом раздражении, что выразилось в снижении пороговвсех компонентов поведения, увеличениипродолжительности позы угрозы и высокойчастоте драк.Активация центральных М-холинорецепторов пилокарпином сопровождается усилием агрессивно-оборонительного поведения, а их блокада амизилом - ослаблением.Величины в В порогов реакций писка,вставания и драки представлены в табл, 1.Продолжительность стояния в позахбоксеров ВС представлены в табл, 2.Количественные показатели поведения иих анализ представлены в табл. 3,Влияние АКТГ на агрессивно-оборонительное поведение усиливается на фоневозбуждения и ослабевает на фоне блокады М-холинорецепторов.По аналогичной схеме поставлены опытыс применением веществ, возбуждающих иблокирующих Н-холинореактивные мозговые структуры. Установлено, что влияниеАКТГ на агрессивно-оборонительное поведение существенно не изменялось при возбуждении и выключении Н-холинорецепторов.Исследовано также значение функционального состояния альфа и бета-адренорецепторов.Полученные с помощью предлагаемогоспособа экспериментальные данные позволяют заключить, что усиливающее влияниеАКТГ на агрессивно-оборонительное поведение включает облегчение активации М-холинорецепторов мозга. 990183 каждой пары исследуемых животных, продолжительность отдельных фаз реакции и частоту появления ответной реакции к общему числу испытаний и по изменениям средних величин порогов реакций, продолжительности и процента ответных реакций опреде- Ь ляют направленность системного действия гормона на рецепторы головного мозга.Способ осуществляют следующим образом.Пример. Опыты поставлены на крысах- самцах весом 160 - 200 г. Группе из 10 мар 1 О кированных крыс ввели внутри брюшинно физиологический раствор хлористого натрия в дозе 0,5 мл на 100 г веса. Через 2 мин в той же последовательности животные были подвергнуты попарно электрическому раздражению в камере. В решетчатый пол камеры подавали переменный ток, напряжение которого увеличивали от 0 до 60 В, наращивая напряжение по 2 В через каждые 2 с. Ток увеличивали до возникновения четко выраженных реакций писка, 20 вставания и драки животных. При возникновении драки раздражение прекращали.Через 1 мин, когда животные были уже спокойны, испытание повторяли. Полученные данные приведены в табл. 1, Зарегистрированы соответствующие величины напряжения и продолжительность стояния в позе боксеров по окончании драки. Таким образом, для реакций писка и вставания получили по 2 измерения на отдельном животном - всего по 20 для группы - и для зО реакции дракй - 8 измерений, так как на одной паре животных реакция не была получена при наращивании тока до 60 В,Параллельно на группе крыс исследовано влияние АКТГ на агрессивно-оборонительное поведение. При этом внутрибрю- З 5 шинно вводился АКТГ (кортикотропин Всесоюзного НИИ гормональных препараторов и кровезаменителей) в дозе 1 ед./кг, или 0,033 мг на 1 кг, в объеме физиологического раствора, соответствующем дозе 0,5 мл на 100 г. Через 20 мин после введения гормона исследовано указанным способом агрессивно-оборонительное поведение и получены количественные показатели (табл. 1 и 2).Параллельно группе крыс вводили внутримышечно 0,1/,-ный раствор пилокарпина 4 з в дозе 2 мг на 1 кг и через 30 мин производили регистрацию показателей агрессивно- оборонительного поведения.Наконец, на группе животных исследовано действие АКТГ на фоне возбуждения М-холинорецепторов. Для этого животным 50 внутримышечно вводили пилокарпин в дозе 2 мг/кг и-через 10 мин внутрибрюшинно - АКТГ в дозе 1 ед./кг. Затем через 20 мин регистрировались показатели агрессивно- оборонительного поведения, которые представлены в табл. 1 и 2.Параллельно на группе крыс агрессивно- оборонительное поведение исследовано на фоне блокады М-холинорецепторов. Для990183 5Материалы испытаний позволяют счи,тать, что предлагаемый способ обеспечивает объективные, достаточно точно измеряемые количественные показатели уровня поведенческой возбудимости и выраженности исследуемой формы поведения; проведение исследования в условиях, близких к физиологическим, поскольку происходит поступление гормона в кровоток и изменения его концентрации, близкие к физиологическим подъемам; определение направленности и степени изменения поведения, вызванных 1 О введением гормонов и веществ, возбуждаюсТаблица 1 физиологическийраствор1г ) 3 Анизил + Актг Пилокарпин+ Актг Аиизил Пилокарпин е етГ т тете е т е 3 1 2 3 26 40 50 28 16 30 22 26 26 14 12 16 34 30 44 50 24 50 38 42 44 44 24 38 18 23 19 16 12 1 О 36 46 52 46 56 14 16 4 8 24 38 30 52 40 60 18 24 6 8 22 38 38 58 46 60 28 40 31 26 30 12 32 36 38 34 50 16 42 4 о 46 16 го 16 24 го Зг 32 10 26 22 14 26 42 42 24 22 18 16 22 30 28 32 -40 50 25 24 32 22 24 30 42 28 15 34 20 50 3640 44 24 46 22 24 32 20 Зо 28 36 32 44 28 18 12 25 18 16 24 28 48 42 44 22 32 26 24 28 45 1818 28 26 14 24 42 32 28 50 гг гг 18 10 Зг 5 о 36 30 28 25 24 40 20 26 1 О 38 56 18 16 26 26 12 22 18 40 26 4 о г 8 17 26 16 48 28 16 16 46 32 16 22 30 44 22 зо гг 50 26 14 гг 20 1636 34 40 56 18 18 зо 24 48 56 ;50 58 22 16 30 32 20 1630 32 12 17 Зг 34 ,26 30 40 44 40 25 24 22 Зо гг 3217 22 22 32 гг 40 ВЕРТИКАЛЬНЫЕ ГРАФЫ: 1 - писк, 2 - вставание, 3 - драка Зо Зг зо 28 36 24 30 24 30 24 34 34 38 22 24 чо., 26 22 32 18 16 30 15 30 24 26 30 24 45 30 6щих и блокирующих синаптическйе реактивные структуры мозга; определение изменения гормонального эффекта в зависимости от функционального состояния реактивных,мозговых структур и, следовательно, определение нейрохимического механизма действия гормона на поведение.Таким образом, предлагаемые способ обеспечивает изучение нейрохимического механизма, системного влияния гормона на. интегральную деятельность мозга, проявляющуюся в формировании целостной поведенческой реакции.+ АКТГ Пилокарпин + АКТГ Пилокарпин Контроль АКТГ Амизил 60 Нет 10 30 180 20 70 30 60 50 50 50 90 10 180 40 90Величина показателей поведения р (0,02 р(0,00 р(0,001р (0,00990183 формула изобретения Способ определения эффективности действия гормонов на мозговые структуры, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения направленности системного действия гормона на рецепторы головного мозга, лабораторным животным вводят фармакологические вещества, вызывающие возбуждение или блокирование соответствующих рецепторов, далее внутрибрюшинно вводят гормон, затем проводят болевое раздражение электрическим током, увеличивая напряжение от 2 до 70 В до возникновения ответных реакций животных на раздражение, регистрируют пороговое напряжение для каждой пары исследуемых животных, продолжительность отдельных 1 Офаз реакции и частоту появления ответной реакции к общему числу испытаний и по изменениям средних- величин порогов реакций, продолжительности и процента ответных реакций определяют направленность системного действия гормона на рецепторы головного мозга,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Малышенко Н. М. Примое влияние 10 гормонов коры надпочечников на адренергические и холинэргические системы головного мозга. Сб, Актуальные проблемы физиологии, биохимии и патологии эндокринной системы, Тезисы докладов Всесоюзного съезда эндокринологов 8 - 12 октября 1972 г., Медицина, 1972, с, 16 - 117.Составитель Л. Соловьев Редактор А. Шандор Техред И. Верес Корректор М. Шароши Заказ 11030/5 ТиражТ 1 1 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская иаб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4