Способ получения экстракта рогов сайги

(51)5 А 61 К 35/3 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) АНИЕ ИЗ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ я к медицине и ости, а именно к кта рогов сайги. ся интенсификацель достигает- дополнительно огов, сырье изе до порошкообкцию проводят ри 20-25 С в теениисырье расновременным . 2 ил., 4 табл.(21) 491772 (22) 10.12.9 (46) 15.05.9 (75) М.А,Ал горный, Л С.М. Верме гацкий и В (56) Нестер фармаколо рата из рог (54) СПОСО ГОВ САЙГИ. (57) Изобретение относитс медицинской промышленн способам получения экстра Целью изобретения являет ция способа, Поставленная ся тем, что в качестве сырья используют средний слойр мельчают на дезинтегратор разного состояния, экстра дистиллированной водой и чение 5-7 мин, при соотнош творитель 1:50 с од воздействием ультразвуком 3. Бюл. Я 18 иев, В.П.Верболович, Ю.К.Под.М,Подгорная, Ю.П.Еремин, ничев, Г.А.Денисов, Л.П,ЗароА.Загороднийенко И.ф., Брехман И,И. и др. гические исследования препаов сайги. Владивосток, 1984.Б ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРАКТА РОИзобретение относится к биологиче- дорода обусловлена их восстановительныской и медицинской химии и касается пол- ми свойствами, К известным соединениям, учения биологически активных веществ, обладающим такой способностью, можно обладающих фармакологическим действи- . отнести глутатион, свободная ЯН-группа ко- Б ем. торого обуславливает его свойства как внут- .Целью настоящего изобретения являет- римолекулярного восстановителя и в связися расширение сырьевой базы, используе- с, этим его широкое участие в метаболизме.мой для получения биологически активных С присутствием подвижного водорода свясоединений, повышение выхода продукта и зана биологическая роль НАДН и НАДФН.ааиЪ увеличение его активности. Для расшире- Донорами водорода выступает ряд восста- Фь ния сырьевой базы предлагается использо- новленных форм органических соединений, вать рога сайги, а препарат, получаемый например аскорбиновая кислота, выполня- О) этим способом, назвать сайгорином. ющая роль природного антиоксиданта и др. ОВ экспериментах, позволяющих оце- установлено, что между продолжительно- нить резервные возможности организма по стью плаванья животных идонорными свой- времени плаванья животных было установ- ствами введенного препарата имеется ф лено, что экстракт из рогов сайги оказывал линейная зависимость (фиг.1), в связи с чем стимулирующее. действие (табл.1). Метод в дальнейшем при отработке способа пол- .плаванья и ему подобные являются исклю- учения сайгорина контроль за его активночительнотрудоемкими. При отработке мето- стью осуществляли по этому показателю.да получения сайгорина было установлено На фиг,1 показана зависимость време- наличие у препарата донорных свойств, т.е. ни плаванья мышей от количества введен- наличие соединений с подвижным атомом ного препарата, оцениваемого по наличию водорода, Высокая биологическая актив- донорных свойств; на фиг,2 - зависимость ность соединений с подвижным атомом во- выхода продукта от условий экстракции, где1 - традиционные методы экстракции; 2 - метод дезинтеграции со сдвигом; 3 - дезинтеграция со сдвигом + воздействие предгиперзвука.Для Ьпределения донорных свойств существуют различные методы, однако в силу целого ряда присущих им недостатков нами использован собственный способ определения этого показателя. Для этого в кювету люминометра вносят 250 мкл и 0,1 М осфатного буфера, рН 8,0; 50 мкл 5 10 М раствора пероксидазы хрена и помещают в кюветный блок прибора. Реакцию запускают введением 200 мкл 5 10 з М раствора люминола, содержащего 7 10 М переиси водорода и на ленте самописца записывают кинетику реакции вплоть до ее полного завершения, Площадь под кинетической кривой принимают эа 100 о . Регистрируют кинетику реакции в присутствии исследуемых проб, определяют площади под кинетическими кривыми и по величине их снижения судят об активности исследуемых проб. За единицу активности принято количество препарата, которое вызывает 50 ингибирование свечения, возникающего в реакции пероксидазного окисления люминола.Проведенные исследования показали, что биологической активностью обладают только чехол и средний слой рогов, в отличие от ядра, где такие свойства не обнаружены (табл.2), В связи с этим в дальнейшем для получения сайгорина берут только чехол и средний слой что позволяет уменьшить количество примесей в целевом продукте, приблизительно на 300 снизить колйчество перерабатываемого в дальнейшем сырья, повысить его удельную активность.Для достаточно полной и эфФективной экстракции необходимо сочетание нескольких факторов: правильный выбор экстрагентов, степень измельчения, условия экстракции (температура, время и т,п.).В прототипе при анализе предшествоФвавших методов получения препарата отмечается, что простое иэмельчение пантов с многократным эмульгированием не обеспечивает ни высокого качества препарата, ни его удовлетворительного выхода, Для повышения выхода целевого продукта в прототипе предложено перед измельчением проводить обработку пантов острым паром. Такая обработка очевидно позволяет снизить требования к качеству измельчения, однако не может способствовать улучшению качества продукта, Это обусловлено тем, что высокая температура при термической обработке является причиной денатурации термолабильных белковых соединений и, в первую очередь, обладающих биологической активностью, Снижениебиологической активности пантов при тер 5 мообработке водой температурой 98 - 99 С втечение 100+ 40 мин отмечено при разработке способа консервации пантов, в связис чем авторами предложено сократить время заварки пантов до 30 мин + 30 мин и за10 счет этого на 18,7 Оповысить их биологическую активность,Проведенный анализ недостатков, присущих аналогам и прототипу приводит к заУключению, что для повышения выхода15 продукта и увеличения активности препарата (а следовательно, повышения эффективности производства) необходимо: 1)улучшение технологии измельчения, 2) использование зон, обладающих биологиче 20 ской активностью. 3) применение щадящихрежимов экстрзкции.С целью повышения выхода продукта1был разработан способ дезинтеграции ткани рогов до протоплазмы, Для этого сырье25 растирают до порошкообраэного состоянияв зазоре между поверхностями охвать 1 вающего и охватываемого тел, последнему изкоторых придают прецессионное колебание, обеспечивающее удельное давление,30 равное пределу прочности клеток обрабатываемого слоя рогов, Сочетание сжатия с одновременным сдвигом создает условия дляповышения эффективности последующейэкстракции. Для подтверждения целесооб"ЗБ разности такого подхода был проведенсравнительный анализ эффективности традиционных методов измельчения (удар, давление, строгание и т.п.) и использованногометода дезинтеграции. С целью сохранения40 активности препарата экстракцию проводятпри температуре 20-2 БОС, используя для перемешивания магнитную мешалку.Для упрощения и удешевления процесса была предпринята попытка заменить эта 45 нол дистиллированной водой.Предпосылкой и обоснованием этого послужило то, что в ряду растворителей для хроматографии дистиллированная водаявляется более полярным соединением. Ре 50 зультаты сопоставительного анализа представлены в табл.З. Видно, что водныеэкстракты при одном и том же объеме пробыв большей степени снижают светосуммусвечения (т.е. содержат большее количество55 активного вещества) как для чехла, так и длясреднего слоя. Нами проведен расчет количества экстракта, который необходим дляснижения светосуммы свечения на 50%(Чво). Как видно иэ табл.2,водного экстрактаиз чехла и среднего слоя нужно в 1,6 и 2,31814900 Таблица 1 Зависимость времени плавания мышей от количества введенного препарата раза меньше, чем спиртового, т,е, во столько же раз соответственно эффективнее экстракция дистиллированной водой в данныхусловиях, В связи с этим можно считать, чтоданная методика экстракции значительно 5дешевле и экономически оправдана,При излучении зависимости выходапродукта от времени экстракции (фиг,2) видно, что использование описанного методадезинтеграции сырья по сравнению с традиционным позволяет в 1,8-2,0 раза повысить выход целевого продукта при болеечем десятикратном сокращении времениэкстракции, замене этанола широко доступной дистиллированной водой, проведение 15процесса извлечения при температуре 20 -25 С,Учитывая данные, свидетельствующиео повышении биологической активностиконсервируемых пантов при сокращении 20сроков термообработки было исследовановлияние 60-минутной инкубации полученного экстракта при 80 С, которое обнаружило снижение активности препарата на30-50%. 25С целью более полного извлечения целевого продукта из сырья проведено воздействие на систему сырье-растворитель впроцессе экстракции ультразвуковыми колебаниями мГц-диапазона (Р = 2,64 мГц, 1- 300,6 - 1,0 вт/см, Т = 600 - 900 с), что позволилоповысить выход продукта дополнительнона 10 - 12% (фиг,2, кривая 3),Экстракцию проводят при соотношении сырье;растворитель Н 20) 1;50 (вес 35сырья в гр: объемводы в мл), Это соотношение было выбрано при обработке методакак оптимальное, позволяющее извлечь 9096% целевого продукта, Дальнейшее увеличение обьема экстрагента, не приводя к 40существенному увеличению выхода продукта, затрудняет дальнейшую работу, по-.скольку на последующих этапах выделенияприходится иметь дело с большими обьемами жидкости, уменьшение количества Н 20 45 ниже указанного соотношения ведет к быстрому росту потерь активного вещества на этапе экстракции, Перемешивание осуществляют на мешалке любого типа при комнатной температуре в течение 10-15 мин, после чего жидкость центрифугируют при 4500в течение 10 мин, Надосадочную жидкость сливают, подвергают лиофильной сушке и собирают целевой продукт, Лиофилизация не приводила к снижению активности, что было установлено при сопоставлении активности вещества до и после процесса лиофилизации (табл.4).Способ осуществляют следующим образом (конкретный пример):Иэ исходного сырья (рога сайги) удаляют сердцевину (ядро). Оставшуюся часть растирают до порошкообразного состояния, как указано в описании на стр,5. Десять грамм порошка заливают 500 мл дистиллированной воды, помещают на магнитную мешалку, сверху помещают излучатель генератора УЗ-колебаний ( Р=2,64 м Гц, 1=0,7 Вт/см) таким образом, чтобы поверхность излучателя касалась воды, проводят процесс экстракции 10-15 мин, центрифугируют 10 мин при 4500 д, надосадочную жидкость собирают и подвергают лиофилизации, получают 2,5-3,5 г целевого продукта,Формула изобретения Способ получения экстракта рогов сайги, включающий измельчение наружного слоя рогов, экстракцию с последующим отделением осадка, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью интенсификации способа, в качестве сырья дополнительно используют средний слой рогов, сырье измельчают на дезинтеграторе до порошкообразного состояния, экстракцию проводят дистиллированной водой при 20-25 С в течение 5-8 мин при соотношении сырье;вода 1:50 с одновременным воздействием ультразвука,Активность препарата по светосумме подавления свечения в оь Зависимость активности экстракта от вида экстрагента Влияние лиофильной сушки ктивность и епа ата, Е . Покаэат ный раствор препарата осле лиофильной суш 1814900 ивность препарата 83+4 01+5 Таблица 2 Таблица 3 Таблиц