Устройство для проведения электрофореза в геле

(51)5 А 61 И 1/30 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(56) Авторское свидетельство СССРМ 997672, кл, А 61 Й 1/30, 1979.(54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯЭЛЕКТРОФОРЕЗА В ГЕЛЕ.(57) Использование: в кардиологических иинфекционных отделениях больниц и клиник, медицинских учреждениях помощи матерям и детям, инвалидам и престарелымдля выявления дислипопротеидемий (атеросклероз, ишемическая болезнь сердца),Сущность изобретения; держатель с двух Изобретение относится к медицинской технике и может быть. использовано в кардиологических и инфекционных отделейиях больниц и клиник, медицинских учреждени- ях помощи матерям и детям, инвалидам и престарелым.Известно устройство для проведения встречного иммуноэлектрофореза Австрийской фирмы "1)УИМКО",содержащее камеру, разделенную по длине перегородкой на две полости и устанавливаемый на перегородку держателя геля, в который предварительно заливается гель. Держатель с гелем электрически соединяет катодно-анодное пространство камеры. В слое геля на рабочей поверхности выполнены два ряда выемок круглой формы для внесения в них исследуемых сывороток и антисывороток,Однако с помощью такого устройства нельзя определить Фракционный состав листорон от рабочей поверхности содержит планки, верхняя поверхность которых параллельна верхней поверхности держателя, на которые натягиваются одна или несколько ацетат-целлюлозных мембран,. которые крепятся прижимами, вставляемыми в прорези держателя, причем с двух сторон держателя между его наружной стенкой и мембраной помещается прокладка из пористого материала. На держатель с мембраной устанавливается шаблон, по краям которого расположены буртики, по ширине совпадающие с верхней поверхностью планок держателя, имеющей ряд окон, содержащих с двух сторон ряд направляющих прорезей для аппликатора. 1 з.п.ф-лы, 6 ил,попротеидов в сыворотке крови с целью выявления нарушения липидного обмена, возникающего при ишемической болезни сердца и атеросклероза. а также фракционный состав белков с целью выявления злокачественных опухолей. аллергических заболеваний, острых и хронических воспалительных процессов,Для осуществления этой задачи необходимо новое конструктивйое рещение, с применением мембранных носителей, обеспечение постоянного свободного натяжения мембраны во время работы и возможность многократного фиксированного нанесения пробы.Прототипом заявленного устройства является устройство для проведения электрофореза в геле, содержащее ряд камер, каждая из которых содержит крышку, электроды, перегородку. разделяющую камеруна две полости, устанавливаемый на перегородке держателя, имеющий рабочую поверхность, при этом рабочая поверхностьдержателя параллельна верхней поверхности держателя геля и расположена от нее нарасстоянии 1,2 - 1,6 мм,Недостаток известного устройства указан выше.Целью настоящего изобретения является возможность определения фракционного состава липопротеидов в сывороткекрови с целью выявления нарушения липидного обмена, возникающего при ишемической болезни сердца и атеросклероза, атакже возможнасть ойределения фракционного состава белков с целью выявления злокачественных опухолей, аллергическихзаболеваний, острых и хронических воспалительных процессов. И вместе с тем, какизвестное устройство и прототип, предлагаемое устройство позволяет определить ан тигеньГи антитела с-целью диагностикивирусного гепатита типа В и других вирусных и баКтериальных инфекций в геле,Поставленная цель достигается тем, чтона деркателе с двух сторон от рабочей поверхности размещены планки; верхняя поверхность которых параллельна рабочейповерхности держателя, на планки уложенапо крайней мере одна ацетэтцеллюлознаямембрана, концы которой введены в снабженные прижимами вертикальные прорезидержателя со стороны его нерабочей поверхности, при этом пористые прокладки рас-.положены с двух сторон между боковымиповерхностями держателя и мембраной. Устройство при этом снабжено шаблоном сдвумя параллельными буртиками, соприкасающимися с мембраной и верхними повер-хностями планок, имеющим ряд окой, двестороны каждого из которых выполнены свыемками для нанесения проб.На фиг. 1 изображена камера для проведения электрофореза; на фиг, 2 - держатель, разрез; на фиг. 3 - прокладка,поперечное сечение; на фиг, 4 - держатель,вид сверху; на фиг. 5 - .шаблон, вид сверху;на фиг. 6 - шаблон, разрез,Устройство для электрофореза содеркит камеру и блок питания (на рис. не показан). Камера содеркит кювету 1,разделенную по всей длине перегородкой 2на две полости, образующие два буферноэлектродные пространства, заполненныебуферным раствором 3, На перегородку 2установлен держатель геля 4, имеющий рабочую поверхность 5, которая параллельнаверхней поверхности 6 и расположена отнее на расстоянии 1,2-1,6 мм.10 15 20 30 планок 11,35 Шаблон 16 имеет ряд окон 18, две стороны каждого из которых выполнены с вы 45 50 55 В основании держателя 4 по всей длине с обеих сторон сделаны вертикальные углубления 7 с одной или несколькими прорезями 8 с каждой стороны. Электроды 9 крепятся к крышке 10, и при установке крышки на кювету 1 располагаются в буфере 3. На края деркателя 4 с двух сторон от рабочей поверхности 5 размещены планки 11, верхняя поверхность 12 которых параллельна рабочей поверхности 5 держателя и расположена от нее на расстоянии от 3 до 5 На планки натягиваются одна или несколько ацетатцеллюлозных мембран 13, концы которых крепятся прикимами 14, вставляемыми в прорези держателя 8.С двух сторон держателя между его наружной стенкой и мембраной помещается прокладка 15 из пористого материала.В. процессе работы мембрана, пропитанная буфером, увеличивается по длине и провисает.Прокладки 15 осуществляют постоянное натяжение мембраны в процессе работы, обеспечивают дополнительную подпитку мембран буфером и задерживаютпопадание на нее продуктов электролиза иионов,На держатель 4 с мембраной 13 устанавливается шаблон 16, по краям которого расположены буртики 17, по ширине совпадающие с верхней поверхностью 12 емками (направляющими) 19 для нанесенияпроб аппликатором.Устройство работает следующим образом, Ацетатцеллюлозную мембрану "ВЛАДИПОР" МФА-МА К. 4 или К. 5 режут на полосы во всю длину прорези 8, (Например, при 6 прорезях на каждой сторонедержателя ширина мембраны - 28 мм),Готовят буфер, г;Барбиталнатрия (мединал) 12,75 Барбитал(веронал) 2.3, .заливают дистиллированной водой до 1000 мл.Ацетатцеллюлозную мембрану помещают в буфер на 15-20 мин, затем слегка подсушивают между двумя листами фильтрованной бумаги.Далее мембрану закрепляют следующим образом;реркатель 4 верхней поверхностью кладут на стол. Край мембраны закладывают в прорезь 8 и.крепят прижимом 14, Далее1780513 10 ля 4 20 дицинской практике 25 30 50 55 между наружной стенкой держателя 20 и мембраной 13 помещают прокладку 15 из пористого материала, Затем мембрану натягивают на планки 11 и аналогично закрепляют другой край мембраны прижимом 14. Такая конструкция обеспечивает постоянное натяжение мембраны за все время проведения электрофореза и исключает касание ее рабочей 5 поверхности держатеВ каждую часть буферного пространства кюветы 1 заливают по 43+1 мл буфера 3.Далее держатель 4 с мембраной 13 устанавливается на перегородку 2. На держатель устанавливается шаблон 16. На специальный трафарет (на рис. не показан) на расстоянии, соответствующем шагу зубьев. аппликатора, наносится при помощи пипеточного дозатора исследуемые образцы сывороток, Далее эти сыворотки при помощи эппликатора многократно (в зависимости от необходимого количества вещества) переносят на мембрану через наи равл я ющие выемки 19. Направляющие выемки 19 служат для точного нанесения пробы в одно и то же место, поскольку перенос многократный. Окна 18 служат для визуального наблюдения оператором момента соприкосновения аппликатора с мембраной, что исключает разрыв мембраны. Шаблон 16 фиксируется по внутреннему (можно наружному) периметру кюветы 1, а также имеет, кэк и держатель 4, замок 21, исключающий неправильную установку Каждое окно 18 имеет несколько направляющих выемок 19, что необходимо для нанесения проб в разное место мембраны. (Выбирается оператором), Буртики 17 служат для того. чтобы шаблон прижимал по 40 краю мембрану, но не соприкасался с еерабочей йоверхнастью в тех местах, гдепроисходит фракционирование при электрофорезе,Кювета с держателем закрывается 45 крышкой и подключается к разъему блокапитания,На камеру подается напряжение, Послеэлектрофореза белков ( - 30 мин) ацетатцеллюлозная мембрана помещается в 0,25%-ный раствор амидно-черного 7% раствора уксусной кислоты в течение 1 - 2 мин, после чего проводится отмывание мембраны в 7%- ной уксусной кислоте. После электрофореза липопротеидовацетэтцеллюлозная мембрана помещается в раствор судана черного. 5 мл изопропанолэ и 10 мл 5% МаОН, Окрашивание проводится от 1 до 3 ч, После скрашивания мембрана отмывается в воде,Устройство позволит увеличить область применения прибора путем определения фракционного состава липопротеидов на ацетатцеллюлозной мембране с целью выявления нарушения липидного обмена, возникающего при ишемической болезни сердца и атеросклерозе; фракционный состав белков на ацетатцеллюлозной мембране с целью выявления злокачественных опухолей, аллергических заболеваний, острых и хронических воспалительных процессов; антигены и антитела в агаровом геле с целью диагностики вирусного гепатита В, и других вирусных и бактериальных инфекций,Обработка результатов легко поддается полной автоматизации, Предлагаемое устройство найдет широкое применение в меФормула изобретения 1, Устройство для проведения электрофореза в геле, содержащее ряд камер, каждая из которых включает. кювету сперегородкой, разделяющей ее на две полости для буфера, на которой размещен держатель геля с рабочей поверхностью. с двух сторон от кбторбй выполнены параллельные вертикальные прорези, а также крышку с электродами и пористые прокладки, о т л и ч а.ю щ е е с я тем, что, с целью определения фракционного состава белков и липопротеидов в сыворотке крови-, на-держателе с двух сторон от рабочей поверхности размещены планки, верхняя поверхность которых параллельна рабочей пбверхности держателя, на планки уложена по крайней мере одна ацетатцеллюлозная мембрана, концы которой введены в снабженные прижимами вертикальные прорези держателя со стороны его нерабочей поверхности, при этом пористые прокладки расположены с двух сторон между боковыми .поверхностями держателя и мембраной.2, Устройство пои. 1, о тл и ч а ю щеес я тем, что оно снабжено шаблоном с двумя параллельными буртиками, соприкасающимися с мембраной и верхними повеохностями планок, имеющим ряд окон, две стороны каждого из которых выполнены с выемками для нанесения проб,780513 Составитель В,СоболевТехред М.Моргентал Корректор А.Мотыль едактор С,Кулак енно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 Произ каз 4443 Тираж . ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5