Способ определения кислородной интоксикации при гипербарической терапии

(51)5 0 Я ЬСТВ не, в риче- ши- тике ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗС) БР АВТОРСКОМУ СВИ(71) Саратовский государственный мцинский институт(56) Авторское свидетельство СССРМ 936889, кл, 6 01 М 33/48, 1971.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КИСЛОНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ПРИ ГИПЕРБЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ(57) Изобретение относится к медицичастности к лечению методом гипербаской оксигенации (ГБО) и может найтирокое применение в клинической прак Изобретение относится к медицине, точнее к лечению методом гипербарической оксигенации (ГБО), и может найти применение в клинической практике для ранней (доклинической) диагностики кислородной интоксикации (КИ).Целью изобретения является повышение чувствительности способа,Цель достигается тем, что исследуют состояния мембран эритроцитов до и после сеансов ГБО, определяют их фосфолипидный состав и при повышении относительного содержания лизофосфатидилхолина (ЛФХ) и падении коэффициента окисляемости фосфолипидов (КОФЛ) по сравнению с исходным уровнем определяют начальные (доклинические) признаки КИ,Установлена противоположная тенденция в изменении КОФЛ и относительного содержания ЛФХ и МЭ в зависимости от для ранней (доклинической) диагностики кислородной интоксикации (КИ), Сущность способа заключается в том, что с целью повышения чувствительности способа до и после сеансов ГБО определяют фосфолипидный состав мембран эритроцитов (МЭ) методом тонкослойной хроматографии. Если после проведения ГБО относительное количество лизофосфатидилхолина в МЭ растет, а коэффициент окисляемости фосфолипидов падает по сравнению с исходным уровнем, то это указывает на появление начальных признаков КИ. От продолжения ГБО-терапии необходимо отказаться, так как это может привести к осложнениям. 7 табл. появления признаков КИ и эффективности ГБО-терапии.Падение КОФЛ свидетельствует об относительном увеличении количества трудноокисляемых ФЛ и уменьшении легкоокисляемых в МЭ, что вероятно вызвано усилением свободнорадикального перекисного окисления липидов (СР ПОЛ) при гепербароокситерапии. Результатом этого является повышение регидности МЭ, снижение ферментативной активности, процессов мембранного транспорта, гормональной рецепции и может рассматриваться как один из патогенетических механизмов токсического эффекта кислорода. Окисленные фосфолипиды более доступны для ферментативного расщепления фосфолипазами. Этим можно объяснить накопление в мембранах эритроцитов(МЭ) при КИ лизолецитина, оказывающего выраженныйКОФЛ -дестабилизирующий эффект на биомембраны, вызывающего гемолиз эритроцитов.В случае благоприятного воздействия гипероксии в процессе лечения уровень ЛФХ падает, а КОФЛ растет, что может быть связано с ликвидацией гипоксии, нормализацией интенсивности СР ПОЛ и сопровождаетсяя улучшением структурно-функционального состояния МЭ.Способ осуществляют следующим образом,Для исследования состава ФЛ эритроцитарных мембран кровь в количестве 2 мл брали из локтевой вены с добавлением антикоагулянта. Кровь центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин для выделения эритроцитов, которые затем трижды отмывали холодным изотоническим раствором КаС 1. Липиды из "упакованных" эритроцитов экстрагировали по фолгу. Учитывая, что липиды эритроцитов содержатся только в плазматической мембране, для изучения ее ФЛ состава можно проводить экстракцию из целых клеток,Фракционное исследование ФЛ проводили методом тонкослойной хроматографии на стеклянных пластинках размером 9 х 12 см с закрепленным слоем силикателя "Я 19 пта" (США) в системе растворителей хлороформ: метанол:уксусная кислота:вода (50:30:8:4), Идентификацию проводили методом "свидетелей", цветных реакций на функциональные группы ФЛ, а также по относительной подвижности фракций В. Силикагель из каждого пятна соскабливали и определяли содержание липидного фосфора, Рассчитывали относительное (в ) содержание каждого ФЛ, принимая за 100 сумму величин поглощения всех ФЛ.Для интегральной оценки изменений МЭ в процессе ГБО вычисляли КОФЛ, т.е, отношение фракций ФЛ, содержащих в своем составе больше ненасыщенных жирных кислот, к фракциям ФЛ, включающих более насыщенные жирнокислотные остатки: где Ф Э - фосфатидилэтаноламин;Ф С - фосфатидилсерин;СМ - сфингомиелин;ФХ - фосфатидилхолин,Указанные показатели апробированы в клинике при лечении 105 больных с ишемической болезнью сердца, гипертонической болезнью, облетерирующим атеросклерозом нижних конечностей, остеохондрозом в возрасте 44 - 62 лет. Они изучались до нача 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ла ГБО - терапии, после 2 - 3-го и 9 - 10-го сеансов, проводимых в одноместной барокамере "ОКА - МТ" ежедневно по 40 - 60 мин при давлении 1,6 - 1,7 ата, Параллельно в плазме определялась концентрация другого показателя КИ - ВЭГ.У 11 больных (1 группа) проведение курса ГБО не дало положительного клинического эффекта: состояние пациентов практически не изменялось по роду основного заболевания, Кроме того, у 9 человек к окончанию курса появились раздражительность, ухудшение сна и аппетита, Эти симптомы расценивались как самые начальные признаки токсического действия кислорода. Однако они проявились лишь к 8 - 9-му сеансу, в то время как при исследовании состава ФЛ в МЭ уже после 3-го сеанса отмечалась статически достоверная отрицательная динамика по сравнению С исходными данными: количество ЛФХ выросло на 40,6 О, КОФЛ снизился на 5,7 (табл, 1).В табл. 1 - 3 приведены данные динамики содержания ЛФХ в МЭ, КОФЛ и ВЭГ в процессе лечения ГБО у больных 1, 11 и 111 групп соответственно.Фактически у больных 1 группы уже после первых 3 сеансов ГБО отмечались ранние признаки КИ, выражающиеся в дестабилизации клеточных мембран, и которые еще не выявлялись клинически. От дальнейшего проведения гипербарокситерапии у таких больных необходимо было отказаться, так как по мере нарастания мембранодестабилизирующего действия гипероксии к 9 - 10-му сеансу прогрессируют нарушения интегральных показателей жизнедеятельности: центральной нервной системы и т,д, Концентрация ВЭГ после 3-го сеанса даже несколько уменьшилась, что подтверждает недостаточную чувствительность данного метода и невозможность его использования для своевременной диагностики КИ (табл, 1).У 10 пациентов ( группа) наблюдалась непереносимость кислорода под давлением в более тяжелой форме, Уже в самом начале лечения они предъявляли жалобы на внезапное ухудшение самочувствия, головокружение, головную боль, чувство нехватки воздуха, в 1-м случае - судорожные подергивания мимической мускулатуры лица, в связи с чем дальнейшее лечение ГБО было прекращено, При анализе фосфолипидного состава МЭ у больных с явными клиническими признаками КИ отмечалась еще большая степень возрастания ЛФХ (на 64,8 оь) и падения КОФЛ (на 13,3) по сравнению с исходными значениями, свидетельствующая о глубоких структурных изменениях клеточной мембраны (табл, 2).Концентрация ВЭГ также увеличилась, но меньше, чем на 500 . Индивидуальная переносимость гипероксии в данной группе пациентов плохая. Лечение методом ГБО им противопоказано.В 111 группе больных (84 человека) был получен отчетливый положительный клинический эффект, при определении состава ФЛ в МЭ после 3-го сеанса ГБО отмечено уменьшение относительного содержания ЛФХ и увеличение КОФЛ с приближением их к контрольным величинам к окончанию курса (табл. 3).Анализ изменений фосфолипидного состава МЭ в процессе лечения позволил исключить, с высокой степенью вероятности, риск развития КИ у этой группы больных. При ГБО была достигнута постепенная нормализация соотношения фракций ФЛ, что может лежать в основе ее положительного терапевтического эффекта.Однако, несмотря на положительную клиническую динамику, практически после первых сеансов ГБО, концентрация ВЭГ у пациентов 11 группы увеличилась на 400 .Осуществление способа с использованием оценочных показателей КИ,П р и м е р 1. Больной Г,Б.С., 56 лет, Клиническийдиагноз: ИБС, стенокардия напряжения 11 функционального класса (ФК), остеохондроз шейного отдела позвоночника, Получил 9 сеансов ГБО. Проведенная терапия была неэффективной, так как в течение и после окончания курса гипероксигенации доза коронаролитиков и частота возникновения антигинозных приступов у больного не изменялись, Кроме того, после 9-го сеанса пациент впервые стал предъявлять жалобы на легкое недомогание, ухудшение сна, раздражительность, которые были расценены как начальные признаки КИ,Анализ изменений фосфолипидного состава МЭ у данного больного в процессе ГБО-терапии выявил, что уже после первых сеансов имел место прирост относительного содержания ЛФХ на 32,7 и падение КОФЛ на 4,2 опо сравнению с исходным уровнем. После окончания лечения определялось дальнейшее нарастание в МЭ концентрации ЛФХ (на 45 о ) при параллельном уменьшении КОФЛ (на 6),Резул ьтаты и ри веден ы в табл. 4.П р и м е р 2, Больной М.И.М., 47 лет. Клиническийдиагноз: ИБС, стенокардия напряжения 11 - 11 ФК, Курс ГБО был прерван после 2-го сеанса в связи с развитием у больного явной клинической картины кислородного отравления организма. Исследование спектра фосфолипидов МЭ50 тверждением клинического диагноза легкой 55 степени КИ, В примере 3 происходила некоторая модификация фосфолипидного состава эритроцитарных мембран, по-видимому, как реакция организма на гипербарическое воздействие, Однако увеличение относительного содержания ЛФХ после 3-го сеан 5 10 15 20 25 30 35 40 45 продемонстрировало резкое увеличение уровня ЛФХ (на 63,9%) и уменьшение КОФЛ (на 12,5 ) по сравнению с таковыми до начала оксигенобаротерапии (см. табл, 5),П р и м е р 3, Больная М.Ф.В., 42 года. Клинический диагноз: ИБС, стенокардия напряжения 1 - 1 ФК, астеновегетативный синдром. При поступлении предъявляла жалобы на слабость, головокружение, головную боль, плаксивость, приступообразные боли в области сердца, одышку при физической нагрузке, Был проведен курс ГБО из 10 сеансов, терапевтический эффект которого оценен как сомнительный, Однако пациентка не отмечала ухудшения самочувствия в связи с сеансами гипероксии. Процентное содержание ЛФХ в МЭ после 3-го сеанса ГБО увеличилось на 28,8 , КОФЛ снизился на 3,5 от исходных значений. К 10-му сеансу данные диагностические показатели оставались практически на том же уровне (см. табл, 6).П р и м е р 4. Больной С.Н,П., 50 лет. Клинический диагноз: ИБС, стенокардия напряжения 1 ФК, облитерирующий атеросклероз низких конечностей 1 ст. Получил 11 сеансов ГБО с отчетливым положительным клиническим эффектом. Улучшение состояния наступало постепенно к 4-му сеансу, достигая максимума к 9-му сеансу. При этом позитивные сдвиги в структуре липидной компоненты МЭ, выражавшиеся в уменьшении относительного содержания ЛФХ и возрастании КОФЛ, наблюдались уже после 3-го сеанса ГБО (см. табл, 7),Таким образом, начальная (доклиническая) стадия КИ при ГБО-терапии определялась только при увеличении уровня ЛФХ в мембране красных кровяных клеток на 300 и более и снижении КОФЛ на 4 ои более по сравнению с таковыми до начала лечения, как это имело место в примере 1. Такое изменение оценочных показателей указывает на трансформацию лечебного эффекта ГБО в мембрана-токсический и требует немедленного прерывания курса из-за возможности развития осложнений. При манифестной КИ (пример 2) повторное исследование спектра фосфолипидов в МЭ выявило еще более значительное ухудшение предлагаемых диагностических показателей, что может служить биохимическим под"р- достоверность различия по сравнению с контролем, р 1- с исходным уровнем 25 Табл ица 2"р - достоверность различия по сравнению с контролем, р - с исходным уровнем са не достигало 30 , а КОФЛ снижался менее чем на 4 ф . Несмотря на то, что у этой больной не было получено отчетливого положительного клинического результата, все сеансы ГБО она перенесла удовлетворительно,При благоприятном лечебном эффекте ГБО-терапии (пример 4) изменения ЛФХ и КОФЛ в МЭ имели противоположную направленность по сравнению с примерами 1 - 3, вероятно, вследствие нормализующего влияния гипероксии на интенсивность перекисного окисления липидов и тесно связанного с ним фосфолипидного гидролиза. Опасность развития КИ в процессе ГБО у данного больного невелика. Ф ар мул а из о 6 рете н ия Способ определения кислородной интоксикации при гипербарической терапии путем исследования состояния мембран 5 эритроцитов пациента, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения чувствительности способа, исследуют фосфолипидный состав мембран до и после сеансов гипербарической оксигенации и при увели чении относительного содержания лизофосфатидилхолина на 32,7 и более и снижении коэффициента окисляемости фосфолипидов на 4,2 и более по сравнению с исходным уровнем определяют кислород ную интоксикацию.1727080 10 Таблица 3 с исходным уровне Таблица 4 блиц блица 6 Показател Этапы иссле овани после 3- го сеанс осле 10- го сеанс лечен блиц Этапы исследования казате ле 3- го сеанс лечения после 10- го сеанс Составитель А Агуреедактор Т.Лазоренко Техред М.Моргентал Корректор А.Осауленк аказ 1277 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 оизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина ЛФХ,фОФЛ,ф Л ФХ, ф КОФЛ,71