Способ регенерации растений из пыльников вишне-черешневых гибридов
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1708211
Авторы: Жуков, Нафталиев, Олейникова
Текст
СОйИ СОВЕТСМИХшичепеаииРЕСПУБЛИН ОЕ 1 Ш 211 4/О(51) 5 А ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН Й АВТОРСКОМ,К Э У0 4 тлоает о н иотехно ся т з обр етени о в сех с плользов работ логии и может быть ислекционно-генетическидовыми культурами дляидных растений. астеникипыльи получения галл емл из куг регенератности опыт спешна Извести древе лукндал й, вча ных расте ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МОМИТЕТПО ИЗОВ ЕтЕНИЯМ И ЯНРЫТИЯМПРИ ГННТ ССО(71) Центральная генетическая лаборатория им. И.В.Мичурина(56) Легейда В.С. и др. Получениеи изучение каллусной ткани при культи"вировании пыльников черешни и земляники. - "Цитология и генетика", ,т. Х, 1976, 1- 6, с. 492-495.(54) СПОСОБ РЕГЕНЕРАЦЦИ РАСТЕНИЙ ИЗПЫЛЬНИКОВ ВИИНЕ-ЧЕРЕИНГВЫХ ГИБРИДОВ(57) Изобретение относится к областибиотехнологии и может быть использовано в селекционно-генетических работахс плодовыми культурами для получениягаплоидных растений. Целью изобретения является повышение выхода растений-регенерантов за счет индукцииморфогенеза каллуса, Поставленнаяцель достигается тем, что пыльникиэксплантируют на питательную средуХеллера, содержащую дополнительно,мг/л: гидролизат казеина 500-800;дрожжевой экстракт 100-200; 2,4 Д0,8-1,01 ИМК 1,0"1,5 ИУК 1,0-3,0,НУК 1,0-1,5 и 6-БАП 0,1-1,0. Получен-ный каллус культивируют на питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащеидополнительно, мг/л: О, 1 ф,9 кинетин;4,0-6,0 гибберелловая кислота:,4,0-6,0 ферулловая кислота,0,5-1,56 БАП, ИУК 0,5-1,5 и НУК 0,5-1,5.Культивирование осуществляют до образования корневой системы, после чегокаллусную ткань с корнями разделяютна Фрагменты, которые пересаживаютдля индукции побегообразования напитательную среду Мурасиге-Скуга,содержащую дополнительно, мг/л кинетин 1,0-2,0, 6-БАП 3,0-5,0, аденин1,0-2,0, гибберелловая кислота 1,02 0 Аерулловая кислота 0,5-0,7,2-0,4 НУК 0,2-0,4; ИМК 0,2 и 2,4 Д 0,1-0,3, 11 олученные растения-регенеранты пересаживают напитательную среду Мурасиге-Скуга,содержащую дополнительно гибберелловую Кислоту в количестве 1,0-3,0 мг/л,ИМК 0,3-1,0 мг/л. Культивируют дообразования нормально развитых растений. Использование способа позволяетповысить выход растений-регенерантовдо 80-92% от исходно взятых эксплантов. 2 табл,тополя, из пыльников. Одна довых культурах этот спосо положительного результат.Известен способ регенер ний из пыльников черешни и включающий получение каллу ников на среде Мурасиге и добавлением НУК - 2 мг/л, 1708211сусной кислоты (ИУК) 2 мг/л и кинетинд Ь мг/л, Ог(ндко образовдвиийсякдллус характеризовался сравнительноневысокими темпами роста и отсутстви 5ем образонания побегов, Органогенезиз обрдзонаниихся тканей не наблюдалини на одном из испытанньгх вариантахсредвЦелью изобретения является поньпце 10ние выхода растений-регенерантов засчет индукции морФогенеза каллуса,П р и и е р, Для испытаний взятниине-череиневый гибрид )". 1/1 и трехвариантах опыта: с минимальной, средней и максимальной концентрациямидополнительно вводимых компонентов(см, табл.1).Пыльники высаживают на питательнуюсреду Хеллерар содержащую, мг/л:макросоли КС 1 750 р ИаИз 600,М 880 2 НО 250 ИаНРО НО 25СаС 12 2 НО 75 рмикросоли - 7 лБО 7 Н О 1; НЬО з804 4 НО 0А 1 С 1 0,03; И)С 1 6 НО 0,03; Кг 0,01,РеЫОА /НО 557; Иа,)ДТА 745,витамины - В, (тиамин) 0,1, В(пиридоксин) 0 р 1 р ) Р (, никотино ваякислота) О, 5, мезо-инозит О, 5, глутдминовая кислота 1,0,сахароза 20,0 г/л, агар-агар7,0 г/л,Дополнительно вводят йитогормоныруказанные н табл.1.35После получения кдллусной тканиее пассируют на агдризованную питательную среду Мурасиге-Скугд, содержащуюр мг/л: )рНМО 1650; КР)1900Сас 1 2 НО 440; М 880( 7 нрО 37.0, (ОКВАДРО 1/О, 1 Ча ЭДТА 37,8, РеЯ)( 7 НО7, Ц; ИаИо 0 2 НО 0,25, СцБ 5 НО0,025 ИВО 6,2, Мп 80(.4 НО 22,3;/п 804 4 НО ЯрЬр КХ 0,83, СоС 1 6 НООр 025 р тиаин 0;4, мезоинозит 100,0, 45сахароза 30(И)0, агар-агар 10000,Дополнительно вводят в среду гитогормоны в количестве, указанном н табл.1.Культивирование осуществляют при14-16-часовом йотопериоде в течение2-3 мес до образования хороио развитой корневой системы, затем кдллуснуюткань с корневой системой разрезаютна отдельные кусочки и помещают ихна питательную среду Мурасиге Скугд,В питательную среду Мурасиге иСкуга вводят, мг/л; кинетин 1,0-2,0;6 БАП 3,0-5,0 аденин 1,0-2,0, ГК 1,02,0 р феруллоная кислотд 0,5-0,7, ИУК 0,2 - 0,4, НУК 0,2-0,4,2,4 Д 0,1-0,3 (см. табл.1).После образования побегов с листьями, чтобы устранить аномалии в росте корней и стеблей у растений-регенерднтов в питательную среду Мурасиге и Скуга вводят 1,0-3,0 мг/и ГК и 0,3- 1,0 мг/л ИМК.Культинировдние каллусон и выращивание растений-регенерантов нд питательных средах производят на светуот люминесцентньгх ламп интенсивностью3000-3500 при 14-16-часовом йотопериоде и 25-270,Влияние различных добавок йитогормонов на получение каллусной ткдни,корней и побегов, а также на устранение аномального развития растенийрегенерантов показано и табл. 2.На минимальной среде получено498 посеянных пьгпьниковрпьгпьников с кал,пусом получено 06 и:т, или 41,4 Хр на средней среде - 453 посеянных пыпьников,пыльников с каллусом 175 ит, или38,6/, на максимальной среде -391 посеянный пьгпьникр пыльниковс каллусом 149 или 38 р 1/.Иа минимальной среде получено50 каллусньгх тканей, каллусон с корнями 10 ит. или 20/, на среднейсреде - 38 каллусных тканей, каллусовс корнями 10 шт. или 26,3/, на максимальной среде - 34 каллусных тканей,каллусов с корнями 8 ит. или 23 р 5/На минимальной среде при 140 исходных тканей получено 25 побеговс листьями игги 17 р 9/р на среднейсреде при 1 ЬО исходных тканей - 30побегов или 18,8/; на максимальнойсреде при 120 исходных тканеи - 21побег или 17 р 5 И,На минимальной среде при 25 нормально развитых исходных растениях получено 20 растений или 80/, на средней среде при 2 Ь исходных растениях - 21 нормально развитое растение или 80;Я/р на максимальной среде при 25 исходных растениях - 23 нормально развитых растения"или 92/. Таким образом использование предлагаемого способа обеспечивает 80- 92,0/-ный выход нормальнс: развитыхрастений,Изобретение может найти иирокое применение н селекционно-генетическихТаблица 1 Концентрация компонентов добавки экзогенных регуляторов роста в питательных средах и количество получаемых растений тапы осуще егенерации ереиневого ри 14-16-ч иоде и 25 твления спо растений ви гибрида Р 1 савом Йотоп 7 С 1, 1 олучение каллчсной а 50 ГидролизазеинаДрожжевойэкстрактИМК2, 4 ДИУКРУКбйА 1 650,0 . 800 ткани из пыльников. нсреде Хеллера 200,0 1,5 1,0,5 ,0 2. Вызывание роста корну пыльцевых каллусов насреде Мурасиге и Скуга 1 ь 4., О. 5 , Кинетин1.КФеруллокислота 6 ф,0 6 работах с плодовыми культурами для получения гаплоидных растений.Способ прост, эййективен и не требует дополнительного оборудования и5 помещений,Способ позволяет создавать новые Йормы винне-череюневых гибридов для работ по селекции винни или непосред О ственно для сельскохозяйственного- производства, получать ценные генотипы, ускорять селекционный процесс в 23 раза по сравнении с обычными способами селекции,15 Формула изобретения Способ регенерации растений из пыльников видне-черешневых гибридов, включающий эксплантации в пыльник на питательную среду, получение каллусной ткани и последующее ее культи.вирование, о т л и ч а и щ и й с я тем, что,.с целью повьпцения выхода растений-регенерантов за счет индукции морйогенеза каллуса, получение каллусной ткани осуществляют на питательной среде Хеллера, в которую дополнительно вводят 500-80 И мг/л гид 30 ролизата казеина, 100-200 мг/л дрожжевого экстракта, 0,8-1,0 мг/л 2,4 Д,ИМК в количестве 1,0-1,5 мг/л, ИУК1,0-3,0 мг/л, НУК 1,0-1,5 мг/л и6 БАП в количестве 0,1-1,0 мг/л, последующее культивирование каллуснойткани до образования корней проводятна питательной среде Мурасиге-Скугав присутствии О, 1-0,3 мг/л кинетина,4,0-6,0 мг/л гибберелловой кислоты,4,0 6,0 мг/л Йерулловой кислоты, 0,51,5 мг/л Ь-бензиламинопурина, 0,51,5 мг/л ИУК и 0,5 1,5 мг/л НУК,после чего осуществляют разделениекаллусной ткани с корнями на отдельные кусочки и пассирование их напитательную среду Мурасиге-Скуга,в которую вводят дополнительно кинетин в количестве 1,0-2,0 мг/л, 6 бензиламинопурин в количестве 3,05,0 мг/л, 1,0-2,0 мг/л аденина, 1,02,0 мг/л гибберелловой кислоты 0,50,7 мг/л йерулловой кислоты, 0,20,4 мг/л ИУК,. 0,2-0,4 мг/л НУК,0,2-0,4 мг/л К"К, О, 1-0,3 мг/л 2,4 Ди культивируют до образования побеговс листьями, образовавииеся растениярегенеранты пересаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащуюдополнительно 1,0-3,0 мг/л гибберел.ловой .кислоты и 0,3-1,0 мг/л ИМК, икультивируют до образовачия нормальноразвитых растений,1708211 Продолжение табл.1Концентрация компонентов добавки экзогенных регуляторов ростав питательных средах и количество получаемых растений 11 УК НУК 11,5 0,5 1,5 1,5 3, Стимуляция роста побегов с зелеными листьямии почками на среде Мурасиге и Скуга КинетинЬ БА 11Ад енинГКйерулловаякислотаИУКНУКИИК2 р 4-Д 2,0 5,0 2,0 2,0 1,0 3,0 1,0 1,0 1,5 4,0 1,5 1,5 0,6 0,3 0,3 0,2 0,5 0,2 0,2 0,1 0,7 0,4 0,4 0,4 0,3 4. Устранение аномалий вросте корней и стеблей урастений-регенерантов насреде Иурасиге и Скуга ГКИ 1 К 1,00 2,0 0,5 3,0 1)О 5, Количество получаемыхрастений-регенерантов 18-22 2 2-24 Таблицами Влияние модификаций питательных сред на достижение положительногоэффекта на каждом этапе процесса получения растений-регенерантовпри культивировании пыльников винне-черенневого гибрида и всравнении с прототипом 1. Получение каллуснойткани из пыльников насреде Келлера Частота каллусообразования 500,0 650,0 8000 из пыльников ГидролизатказвинаДрожжевойэкстрактИМК2, 4-1КУКПУКб-БЛП 1 ОО,О1,0 1,0 1,0 0,1 150,0 1,2 0,9 2,0 1,2 0,517118211 Таблиц с Влияние модификаций питательных сред на достижение положительногоэффекта на каждом этапе процесса получения растении-регенерантовпри культивировании пыльников вишне-черешневого гибрида и всравнении с прототипом 2, Вызывание роста корней у пыльцевых каллусовна среде Мурасиге иСкуга 0,3 В ряде,сл 6,0 наблндали 0,2 0инетиь в разованиеней, ЦиФрданные неводятся. ор 0 выепри 0 0 азовани 2,0 Сбр 5,0 бего 2,0 вова 2,0 3. Стимуляция ростбегов с зелеными лна среде Мурасиге е,4ф 01,00 3 К 0 МК 1 р и чани ель С,Ку .Олийнык аевКорре СоставитРедактор Н,Ивыдкая Техред Л И 11 ус Заказ 372ВНИИПИ Госуд Подписноеобретениям и открытиям пРаущская наб д. 4/5 Тиражственногс омитета по 113035, .осква, Ж-З Т СС издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,10 роизводств Устранение аномалииросте корней и стеблерастений-регенерантова среде Еурасиге икуга йерулловаякислота6-БАПИУКНУККинетин6 БАПАденин ФврулловкислотаЬУКНУКИМК За граничньпп регуляторов рдения снижаетспособа в 2-3 0 1,0 1,0 1,0 1,5 4,0 0,6 0,3 0,3 0,3 0,2 2,0 параметрами концентраций экзогенныхста дополнительныи эффект от их ввея на всех этапах осуществления
СмотретьЗаявка
4732755, 29.03.1989
ЦЕНТРАЛЬНАЯ ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ ИМ. И. В. МИЧУРИНА
НАФТАЛИЕВ НАФТАЛИ МИШИ-ХАИМОВИЧ, ЖУКОВ ОЛЕГ СЕРГЕЕВИЧ, ОЛЕЙНИКОВА ОЛЬГА ЯКОВЛЕВНА
МПК / Метки
МПК: A01H 4/00
Метки: вишне-черешневых, гибридов, пыльников, растений, регенерации
Опубликовано: 30.01.1992
Код ссылки
<a href="https://patents.su/5-1708211-sposob-regeneracii-rastenijj-iz-pylnikov-vishne-chereshnevykh-gibridov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ регенерации растений из пыльников вишне-черешневых гибридов</a>
Предыдущий патент: Способ получения гомозиготных линий сахарной свеклы
Следующий патент: Доильный аппарат
Случайный патент: Электропривод постоянного тока с потенциальным моментом нагрузки