Способ определения активности пищевого пепсина

СССР ИЗОБРЕТЕНИЯМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ИСАНИ К АВТО Г, С. Инихов, Г, Ф. Вайнберг и А, В. СлиозбергОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПИЩЕВОГО ПЕПСИНА Заявлено 15 января 1951 г. за М 441500 в Гостехнику СССР цвете следук - 00 мл сборного ш стакан с поемого порошидалона (сычужртыванпя моло по пзвестной пищевого пепспна прддмд акала отмеривают по 1 огревают до 35. В первь %-ного раствора цспыту 1 г 1%-ного раствора эт отмечают начало све ь пепсцна вычисляют При опре щий метод. В натуральногоактивности мцческце ст которое под двают 1 мл 1 во второй - екундоиеру Актцвност еленид два хд олока, ком вл дна, аПо догретым моло образного цепс ного фермента ка в каждом с формуле. кане Недостатком этого метода является то, что применение в качеств. среды для свертывания натурального молока, хцмцческцц состав которого является очень изменчивым, дает неодинаковые показатели активности пепсина для одной и той же партии прц проверке в разных местах или даже в одном месте на разном молоке. Это приводит к невозможности унифицировать оценку качества выпускаемого разными предрпятиямп пепсцна,Описываемый способ отличается тем, что натуральное молоко, как среду для.,свертыванця пепспна, заменяют искусственным молоком, изготовленным путем растворения сухого казецна в растворе гпдрата окпси кальция (известковой воде). Активность исследуемого денсдна определяется по специально разработанной шкале.Способ определения активности пищевого пепсцна состоит ддз: а) приготовления искусственного молока; б) проверки искусств ппог э молока на створажцванпе сычужным ферментом; в) опреле;пнця активности пищевого пепсцна.Способ осуществляется следующим образом.Приготовление искусственного молока, Готовят 10%-ный раствор окиси кальция (известковой воды), который выдерживают не менее 24 час. Раствор гидрата окиси кальция можно хранить в теченце года в герметически закрытом сосуде. Перед употреблением раствор гцдрага окиси кальция фильтруют через плотную фильтровальную бумагу.(азеии растираот в ступке, просеивают через марлю, после чего отвешивают 15 г и растворот в 400 мл профильтрованного 10 О-ного раство 1)а гндрата окиси кальция Растворение казеина проводят в течение 21 чхс. н колбс, закрытой рс)зцново 1 или корковой пробкой. В теч- нне нерных нисти часов растворение ведут при нагревании, для чего. колбу савт в те)Мостат, нредварцтельно нагретый до 30.П 1)н теысратуре 30 ьыдерживают два часа. Затсм постепенно новьннаот темн ратуру до 50, Д;5 лучшего растворения через каждые 30 м н и.рлсн и н,нот и расти рают казеин в колбе стеклянной пало - кой с )с знновым наконечником. После шестичасового растворинри тлНс ратуре 30 - .50" казснн 1 в известковой воде выдерживают сн ннри комнатной тесНсратурссще 18 час., а затем проводят фильтрация) через ыре ело марли.10;уннн 1 ф 1 льт)ат 5 н 55 сстся цскусственнь 1 м молоком, кот 01)ы 1 иснользуют дл анализа иНцсвого ипсина в течение 24 часов с. Момента НЗГОТОВЛЕНН ЕГО,(,0;сср)кНи Окиси ка;ьци 51 в пем должно находптьс 51 1 пределах 0,006 ),01 г.Проверка искусственного молока на створаживание сычужным ферментом, Правлюк)сть приготовления искусственного молока проверяют по его снособности створаи;нваться от сычужного фермента.Д,5 проверки готовят раствор сычужного фсрмента следующим ооразом: 0,25 г сычужного фс 1 рсита актииостью 85 цли 100 тыс. ед. растворот в 100 мл дистиллированной воды и выдерживают 15 - 20 мии, ц водяной бане нри темнс 1 ратурс 35 . Приготовленный раствор сычужного 11)ср)та ирсност в бОретку иа 25 миллиметров, капилляр которой одбнрНот с таким расчетом, чтобы три каЛи составляли 0,1 дес 1 ни бОрсткн и скорость надпня капли равнялась одной капли в секунду.Псъ 1)сд 1 роверко 1 а створа)кивание к искусственно 1 у молоку ОстОгрожно каплями (нри постоянном перемсшиваииц, во цзоежанце выпадснн хлопьев азеина), прибавляют 0,1 х раствор солянои кислоты до 05 учснН нсзотности молока, раНО 6 - 9,5 д. Ооычно на 00 мл, молока требуется 18 - 26,5 мл кислоты. (Нслотность молока в отдельных пробах онределяют тнтрованием его 0,1 Х раствором МаОН. Молокоес требусмой кислотностью наливают в две прооиркн по 10 мл и иом- щают в водяную бано с тесНс)атуро до 40, где пробирки должны находиться на протяжении к его анализа.Из бюреткц, заполненной доверху раствором сычужного фермента, наливают в одну пробирку с молоком 3 капли, через 15 сек. во вторуо пробирку 4 - капли раствора сьчужпого фермента. После прибавления фермента содержимое прооцрок тщательно перемешивают и по секундомеру засекают врем с момента иесения в первую пробирку последней капли сычужного раствора,По истеченииМин, молоко проверяют на створаживаемость. Если оно свернуюсь во второй цробпркс от четырех капель в интервале между четвертой минутой и дес 5 То 1 секундой пятой минуты, а в первой пробирке, от трех капель - ио истечении пяти минут, то искусственное молоко считают приготовленным правильно и его используют для определения активности пищевого ипсина.Если молоко в первой пробирке свернулось раньше пятой минуты, то такое молоко следует считать непригодным для определения активности пищевого иепсцна вследствие повышенной кислотности его.В зтом случае необходимо взять новую порцию молока, подкислпв его меньшим количеством кислоты.Л" 94614 У пробирки в которой свернулось молоко Лктнвност, нисвого несина, ВЫРа)КЕННЛ 53 В ТЫС. ЕЛ. 1(30Я) - 85807570б 501-555( - 45435 4 1 сли же ВО Второй пробирке мо;10 ко пе с 31 р 13 у 110 сь 13 указпиге 131)емя то к молоку следует прибавить кислот)н Добавление кислота не;одолжно превышать кислотности молока, рашн)и 9,5 Т.В том случае, когда сычужиьш фермент имсчт активость 100 тьс. ед., то проверку створйжпаемости молока осу)цсстиля)от следу)опгим образом: в одну пробирку с нйгрстым молоком наливают " капли. в другую через 15 сек. - 3 капли раствора сс,пу)кпого с)ермеита.Если молоко свернулось в пробирке от трех капель в интервале м- жду четВертОЙ мпнутои и дсс 51 т 011 Гекуидоп 1351 топ минуты, й В нрооирк от двух капель - по истечении пяти минут, то молоко считают приготовленным правильноОпределение активности пищевого иепеииа. П шцевой )н псп. подле)кащий испытанию, растирйсот в ступке, н)еле чпо отвсшивают 0,25 г и переносят и колбу емкостью ий 100 мл. в кото 1)ую наливают 70 мл дистиллированной воды и пс 11)емс 1 пп 13 а)от. После этого колоу погружают в водяную баню с темпе 1)туро 1 40, г;н 311;сср)кп 3110 Т "0 - 30 мпн. Ирп периодическом пс.ремешпванпп.П 0 Окопчйипи нйг 1)е)3 йпи 51 рйст 3 ор пспсппй ох;йж)сйн)т и доводят дистиллированной водой до метки. тцйтельпо стрнхпйют и фильтруют через плотньш бумажный фильтр,В 9 пробирок наливают по 10 мл пскуссти нного молока, подкисленного ц проверенного иа створажпванпе сычужным фермс птом.Из бюретки в каждую пробирку пйси 33 от раствор испытуемого щевого пепсипа в следуюием порядке: в )нрвую пробирку на;спвйк)т одну каплю, после:)того содержпмос пробирки перемегппвйОт и по секундомеру засекают время.Через 15 сек. наливаот из бюрсткп О вторую проопрку;1 е капли раствора пеисина, через слсдующие 15 сс к. наливают трс тью пробирку три капли раствора и так вкл)очительио до девятой пробиркиНа протяжении всего анализа, кйк и В случае проверки молок и створаживаемость, все пробирки выдержийют водяной оапе при температуре 40.По цдтечении 4 мип. после добавле)пся раствора 1 ннина нерву 0 пробирку производят просмотр всех пробирок;сля Определсппя образования хлопьев створаживаемостп путем легкого 1)стр 51 хп)3 нп 5.Просмотр пробирок начинают с первой пробирки, через 15 сек. просматривают вторую пробирку. затем чсрсз 15 сек. третью пробирку и т.дОтмечают номер пробирки, в которой образовались хлопья моло(1 в интервале между четвертоц минутой и десятой сскундой пятой минуты, и по следующеи таблице устанавливают активность испытуемого пепсина.Шкала для перевода номеров пробирок на активности пшцевогопепсцна.- ч Ме 94614 Предмет изобретения Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Редактор Л. Н. Токмаков Гр. 173 Подп, к геч. 5/1-1960 г.Тираж 300. Цена 50 коп. Информационно-издательский отдел,Объем 0,34 и. л, Заказ 258. Гор. Алатырь, типография 1 Че 2 Министерства культуры Чувашской АССР. 1. Способ определения активности пигцевого пеисцна путем фиксации начала свертывания казециа иод дс 1 сствием испытуемого ппсина, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, в целях достижения большей точности определения, в качестве средьс для свсртывания применяют вместо натурального молока подкпслесиый раствор сухого казвина и гцдрате окиси кальция.2. Прием вынолис иия способа ио и, 1, о т л и ч а ю ьц и й с я тем, что приготовлеиць 1 й раствор сухого казенна в гидрате окиси кальция разливают в 9 пробирок, в которые при темисратуре 40 досав.иют испытуе - мый пецсцн, постнинино увеличивая его количество в каждой пробирк. от одной до девяти капель и ио порядковому номеру пробирки, где прсизошло свертывание искусственного молока, в зависимости от количества прибавленных капель ио специально разработанной 1 пкале оирсдсляют активность иепсииа в принятых единицах.