Способ повышения жизнестойкости оплодотворенной икры рыб

Союз СоветскихСоциалистнчеснмхРеспублнк ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 789063(23)Прнорнтет до делам изооретений н открытий(72) Л вторн изобретения В. И. Чернышов и А. Х. Тамбов1Московский ордена Ленина и ордена Трудового КрасногсгЗнайейигосударственный университет им. М. В. Ломоносова:,:,; .(54) СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЖИЗНЕСТОЙКОСТИ ОПЛОДОТВОРЕННОЙ ИКРЫ РЫБ Данное изобретение относится к рыборазведению, в частности к способу пси вышения жизнестойкости оплодотворенной икры рыб.Известен способ, заключающийся в выдерживании оплодотворенной икры в водном растворе биологически активных соединений. В качестве соединения используют молоко 1).Недостатки известного споссба заключаются в невысоком выходе личинок из икры и высокой смертности выклюнувшихся личинок в постнатальный период.Цель изобретения - повышение выхода личинок путем снижения смертности последних в постнатальный период.Для достижения этой цели в качестве биологически активных веществ, используют смесь-каротина, с. -токоферола, убихинонаО пирогаллола, пропилгаллатаЫи аскорбиновой кислоты соответственно при концентрации их в растворе 10 10 моля и в соотношении (0,2-2):14:(0,75-5,5) при . этом выдерживание икры осуществляют в течение 10-60 мин.Способ основан на том, что антиоксиданты и их синергисты предотвращают последующее развитие в липидах икры и эмбриона свободно радикальных реакций, приводящих к накоплению плазматических ядов (липидных перекисей и продуктов их распада), например у вьюновых и осетровых рыб в период эмбрионального развития при недостаточном запасе в яйцеклетке биоантиоксидантов возникает к развивается свободно-радикальная патология, для которой характерно несвойственное нормальным физиологическим про цессам повышение концентрации продуктов свободно-радикальных реакций. Эти продукты обладают активностью плазматических ядов, в повышенных концентрациях нарушают активную и пассивную проницаемость клеточных мембран и оболочек икры, угнетают энергетический и пластический обмен в клетках эмбриональных тканей, индуцируют уродства и вызы063 4 3 789 ваог гибель эмбрионов, При обогащении воды антиоксидантами и синергистами антиоксидантного действия икра сорбирует эти вещества и таким образом оптимизируется эмбриогенез.Способ осуществляют, следующим образом.Икру вьюновых либо осетровых рыб непосредственно после оплодотворения и обесклеивания выдерживают в течение 10-60 мин в смеси водных растворов антиохсидантов и синергистов антиоксидантногодействия, например-каротИна, (, -токоферола, убихинона Я , пирогал 1 О лола, пропилгаллата, аскорбиновой кислоты в соотношении 0,2:0,4; 0,5:0,8: :0,6;0,75 - 2:5:2,5:3:1,5:5,5, Действующие агенты берут в виде двухкомпонентных либо трехкомпонентных смесей, тогда преимущественным соотношением для тех и других смесей является соотношение соответственно 1;1 и 1:1;1. Концентрацию для отдельных компонентов-14 -берут 10 - 10 моля/литр, что составляет в г/л для всех веществ 10 - 10 умноженное, соответственно, на-каро- тин - 468, д, - токоферол - 416, убихинон 0. - 754, пирогаллол - 126, пропилгаллат - 196, аскорбиновая кислота - 176.После этого икру переносят в инкубационный аппарат и инкубируют обычным образом.П р и м е р 1. Готовят смесь антиоксидантов Ы, -токоферола и убихинона Яов соотношении 1:1 при концентрации каждого 10 моля (соответственно 416 т 10 и 754 х 10 г/л) после чего ,смешивают ее с Твином 80 в соотношении 1:10. Затем к 100 мл полученной смеси добавляют 900 мл отстойной водопроводной воды, получив таким образом-8раствор, содержащий 10 антиоксидантов,Оплодотворенную и обесклеенную икрувьюна помещают на 30, мин в эксикаторс полученным водным раствором антиок-,сидантов, после чего икру переносят вэксикатор с отстойной водопроводнойводой, где инкубируют икру при темпеоратуре 18 С. Каждые 8 часов воду меняют:и удаляют погибшие личинки, На2-3 сутки получают выклев личинок.П р и м е р 2. Берут производителей вьюна одинакового размера и состояния и инициируют созревание половыхпродуктов общепринятым методом путемвнутримышечной инъекции хориогонина.При температуре 21 С получают через 24 часа "текучую" самку. Самку заворачивают в марлю и выдавливают икру всухую чашку Петри. Забивают самца,извлекают семенники, помешают их в туже чашку Петри не приводя в соприкосновение с икрой и мелко измельчаютножницами. В чашку с половыми продуктами приливают немного воды и осторожными покачиваниями чашки приводят икруи сперму в контакт, Такое покачиваниепроводят 3-5 мин для того, чтобы икра,которая в первый момент осеменения(активации) становится клейкой, не прилипала ко дну чашки и не склеиваласьв комки13 Активированную икру делят на 2 равные части и одну помещают на 30 минв эксикатор с водным раствором антиоксидантов и из сийергистов одной изуказанных ниже концентраций. Обработан ную таким образом икру партиями по500 штук помешают в 3 эксикатора, вкоторых находится по 1 литру отстояннойводопроводной воды. В контрольные эксикаторы, идентичные экспериментальным,помещают по 500 активированных икринок из части, необработанной воднымирастворами антиоксидантов. Через каждые8 часов во всех эксикаторах меняютводу и удаляют погибшие икринки. Температура воды в эксикаторах комнатная(15-20 С)Смесь антиксидантов (с гокоферолаи убихинона 910) готовят в соотношении1:1 при концентрации каждого 10 моля, 35Берут навеску А-токоферола и убихинона 4 и в любой последовательностисмешивают с полиоксиэтиленсорбитан моноолеатом (Твином 80) в соотношении1:10. Берут 100 мл полученной смесии добавляют 900 мл отстойной водопроводной оды. Полученный раствор содержит 10 моля антиоксидантов. Аналогичным приемом получают растворы сконцентрациями антиксидантов 10,10, 1 СГ10 10 моля.В результате на 2 - 3-и сутки получают выклев личинок и на 3-и суткиимеют в контроле в 1 - 3-ем эксикаторах соответственно мертвых (к моменту выклева) 178, 231, 287 икриноки вышедших из оболочки личинок 50, 33,20 штук. На 6-е сутки от начала инкубации имеют уродливых личинок 160,138, 102 штук и нормально развиваюшихся 162, 131, 111 штук. В партииобработанной антиоксидантами, напримерю 1концентрациями 10 М/литр, на 3-и суткиимеют в 1 - 3-ем эксикаторах соответственно мертвых (к моменту выклева)789063 64, в равных соотношениях при концентрации каждого 1 бМ) например севрюги, и дальнейшем выдерживании икры в экспериментальных условиях выход личинок на 4-е сутки больше, чем в контроле, а, начиная с 9-х суток, процент выживших личинок значительно превышает контроль ный, где на 12-е сутки не остается живых особей, в то время как при ис 1 о пользовании предлагаемого сопсоба сохраняется около 70% личинок севрюги. 5131, 138) 167 икринок, вышедших изоболочки 108, 130, 139 личинок. На:6-е сутки от начала инкубации имеютуродливых личинок 66, 35, 28 штук инормально развивающихся ЗОЗ, 327,305 штук. При обработке после оплодотворения икры осетровых рыб согласно предлагаемому способу двухкомпонентной смесью антиокидантов-токоферол и убихинон Таблица 1 Время(сутки) оличество икры и личинокКонтроль (%) Опыт (%) 100 100 100 98-0) 6 10010010096 х 2) 5 1 2 3 4 Икра Личинки Нормально развиваюши- Минимальный и максимальеся личинки на 30-й ный размер личинок (мм)день (%) 8-12 8-12 80 х 10 9-+6 3-10 Контроль Из таблицы 2 видно,.что при сбравотке после оплодотворения икры в течение 30 мин водными: растворами антиоксидантов и, их синергистов всех компонентов выживаемость личинок на 30-й день равна 80-85% при контроле,равном 9%. Длина личинок на 30-й день колебалась в контроле от 3 до 10 мм, при обработке икры антиоксидантами и их синергистами была 8-12 мм при большей однородности особей.П р и м е р 3. Берутсмесьантиоксвдантов (пирогаллола, А -токоферола и убихинона Й ) в соотношениях 1:1:1 приЩконцентрации каждого 10 моля. Дальнейшие операции проводят согласно способу.В результате получают в течение 2-3сутоквыклевличинок и на 3-и суткиимеютвконтроле в 1 - 3-ем эксикаторах соответственно мертвых (к моменту выклева)180, 200, 296 икринок и вышедших изоболочки личинок 54, 38, 18. На 6-е сутки от начала инкубации имеют уродливых личинок 164, 121, 94 штуки и нормально развивающихся 156, 179, 110штук. Выклев личинок в контроле наблюдают от 60 до 75 часа эмбриогенеза,при основной массе выклюнувшихся особей на 72-75 час,6 7 8 9 10 11 12 13 Антиоксиданты (равные соотношения при концентрации 10 ф М) В-каротина;токоферол+убихинонЯ +в пирогаллол+пропилгаллат+аскорбиновая кислотаПропилгаллат+токоферол+убихинон 0 94 ф 3,8941,693-+422 х 4,312110-100 932,6 93 х 1) 6 902,3 86 х 2) 8 77-1,3 7 1-3 7 1-+1,5 69-4Составитель Е. ЛебедюкТехред М. Рейвес Корректор Г. Решетняк Редактор А. Судын Заказ 8918/1 Тираж 723ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Подписное Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 7 78В партии, обработанной антиоксидантайи, например концентрациями 10 моля, на 3-и сутки имеют в 1 - 3-ем эксикаторах соответственно мертвых (к моменту выклева) 44, 23, 6 икринок и вышедших иэ оболочки 486, 477, 494 личинок. На 6-е сутки от начала инкубации имеют уродливых личинок 21, 31, 42 штуки.,н нормально развивающихся 435, 446, 452. Выклев в партии, обработанной антиоксидантами, наблюдают от 46 до 82 часов инкубации при основЪ. ной массе выклюнувшихся особей на 48- 82 час.. Технико-экономический эффект способа заключается в том, что способ позволяет ,увеличить выход личинок из икры в 3 раза, уменьшить их смертность в постнатальнйй период в 8 раэ и получать однородные популяции развивающихся личинок по скорости роста и приросту биомассы и размерам. 9063 8формула изобретенияСпособ повышения жизнестойкостиоплодотворенной икры рыб, заключающийся в выдерживании оплодотворенной икрыв водном растворе биологически активныхсоединений, отлич ающи йс я тем, что, с целью повышения выходаличинок путем снижения смертности последних в постнатальный период, в качестве биологически активных веществ. используют смесь ф -каротина,д, -токофе рола, убихинона,д пирогаллола, пропилгаллата и аскорбиновой кислоты соответственно при концентрации их в растворе110 Я 10 моля и в соотношении (0,2-2): (0,4-5): (0,5-2,5): (0,8-3): (0,6-1,5); (0,75-88), при этом выдерживание икры осуществляют в течение 1060 минут,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Авторское свидетельство СССР