Способ глубинного культивирования

(В 1) Дополнительное к авт. сви 1)М, Кл, А 01 й 15/00 С 12 К 1/06 Заявлено 24.03.78 (21) 2593545/30-15 с присоединением заявки аче(23) Приоритет кем нтет СССР дв делам кзебретеела, И. Козлов, Г. С, Смолина, В. Б, Фрейман, А. А. Ч и И. А. Софиенко союзный научно-исследовательский институт микробиологическихредств защити растений и бактернальных препаратов(54) СПОСОБ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВАС. ТНОВ М 61 Е 1 ч 818 Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть, в частности,использовано для получения энтомопатогенныхбактериальных препаратов в условиях крупно.тоннажного производства,Известны способы глубинного культивирования энтомопатогенных бактериальных препаратов - дендробациллина - ЗА 111 и энтобактерина 21.Сушество этих способов основано на глубинном культивировании штаммов.продуцентов,засеваемых в рабочие ферментеры, загруженные жидкой питателвной "средой" определенногосостава.Однако в крупнотонкажном производствеэти способы малоэффективны, так как требуютбольшого количества сырья на единицу готовой продукции. В качестве сырья используютглюкозу и кукурузный экстракт, которые являются дефицитными.Наиболее близким к изобретению являетсяспособ глубииюго культивирования Вас. Фцпп 9 епыя ферментацией на жилкой питательнойсреде с послелушими сепарированием и сушкой полученного споро-.кристаллического комплекса 13. В качестве жидкой питательной среды используют дрожжеполисахаридную питательную среду Фабича, содержащую (%) 3 кормовых дрож. жей (БВК), 1,5 кукурузной муки и 95,5 воды.На 1 т такой среды расходуют 45 кг кормового сырья. Выход из 1 т культуральной жидкости после глубинного культивирования продуцента не более 5 - 10 кг споро-кристаллического ком. плекса.Такой высокий расход сырья на единицу сухого концентрата приводит к весьма неэконо. мичному использованию дрожжей и кукуруз. ной муки. Кроме того, в процессе приготовления жидкой дрожжеполисахаридной питательной среды вместе с сухими дрожжами и куку. рузной мукой в питательную среду попадает большое количество термоустойчивых фагосо. держаших спор Вас. йцггдепыз, которые выдерживают режимы стерилизации и затем, когда осуществляется процесс глубинного куль. тивирования продуцента, постоянно пбнаружи. ваются в виде размножающейся вегетативной Фагопродуцируюшей культуры.Целью изобретения является сокращение расхода кормового сырья и ликвидация в питательной среде фагопродуцирующего материала.Указанная цель достигается за счет гого, что в способе глубинного культивирования Вас.тЬцгпрелаа ферментацией на жидкой питательной среде с последуннцими сепарированием и сушкой полученного споро-кристаллического комплекса ферментацию проводят в два этапа: на 1 этапе ферментацию ведут в течение 10 - 14 ч до стадии грануляции вегетативных клеток, которые эатем убивают прогреванием культуральной жидкости при 90-100 С, наэтапе прогретую культуральную жидкость разбавлякт5 водой в 2 - 3 раза, стерилизуют, засевают свежим стерильным посевным материалом продуцента н проводят процесс до спорообразования й высыпания культуры Вас, йогпочепаа. Причем прогрев культуральной жидкости после 20 1 этапа осуществляют в течение ЗО - 40 мин, а после гроведенияэтапа в культуральную жидкость добавляют 0,5 вес.% каолина.П р и м е р. В рабочий ферментер, заполненный стерильной регламентной питательной 25 средой, поме 1 цают обычным способом посевной материал продуцента энтомопатогенного бактериального препарата и ведут ферментацню наэтапе при 30 С.в течение 14, 10 или 12 ч ссо стадии,грануляции вегетативных клеток; За ЗО этот промежуток времени глубинного культивирования культура продуцента дает максимальное число генераций и успевает частично пере.работать и усвоить компоненты питания. Успе.вают также прорасти и размножиться фагопродуцируюшие термоустойчивые споры, попав.шие в среду при ее приготовлении и выдержавшие режимы стерилизации. В этом состояниикультуральную жидкость в ферментере подогревают сухим паром, температура прогрева 100,90 нли 95 С, время выдержки при такой температуре 40, 30 или 35 мин,Наэтапе ферментации культуральную жидкость с убитыми клетками продуцента и убитыми клетками фагопродуцента разбавляютводопроводной водой в 3, 2 или 2,5 раза,Перемешивают, вновь стерилизуют любым известным способом, заполняют ферментеры, засевают их новой порцией посевного материала иосуществляют процесс наработки биомассы,Питанием для продуцента наэтапе служатостатки в культуральной жидкости дрожжейи кукурузной муки, а также биомасса убитыхвегетатнвных клеток от 1 этапа. Неосредственно перед сепарацией в культуральную жидкостьдобавляют каолин из расчета 0,5% для лучшегоотделения споро-кристаллического комплексапри сепарации,В таблице приведены данные, покаэывающи.преимущество способа согласно изобретениюв сравнении с известными.