Штамм 123, несущий ост, сам, ан плазмиды, используемый при биологической очистке воды от нефти и нефтепродуктов

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ц 1 612958 Союз Советских Сояиалистнческих РеспубликК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ вид-в ополнитсльн К 1/02 В 902 2) Заявлено 01.12.76 (21) 2425251/28-13 сп Ь присоедин ем за Государственнын комитет Совета Министров СССР по делам изобретенийи открытий 3) Приоритет 3) Опубликовано ень М 2.06 5) Дата опубликован описания 29.06.7(72) Авторы изобрстсни А. М, Боронин, А. Л, Пориц и Г. К, Скрябинститут биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР(71) Заявите 54) ШТАММ РЯЕ 111)ОМОМАЯ АЕЩ 61 МОЯА 123, НЕСУЩИ ОСТ+, САМ+, ХАН+ ПЛАЗМИДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ПРИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЧИСТКЕ ВОДЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ2 ван для очистки окружающе грязнений нефтью и нефтепр Мультиплазмидный штам 123 получен путем коньюгаци 5 в исходный штамм плазмид. плазмиды в исходный штам влен из штамма Р, рц 11 с 1 а С эксконьюгант обладает способ ровать октан и камфору в 10 венных источников углерода. ный штамм, растущий на ок был внесен также ХАН плаз Р. рц 1 Ыа 51, после чего он п собность деградировать октан 15 талин и салицилат.В таол. приведена частота и 1 чАН плазмид. На фиг. 1 приведены кривь 0 мов Р. аегцрпоза 121 н 123 н нефти. При выращивании штамм 123 на минеральной среде, со талин, камфору, октан, салиц 5 трации 4 мм, наблюдается уве сти роста (кривая а) по срав на среде, где в качестве истореноса е роста штама неочищенной а Р. аегцрпоза держащей нафтлат в конценличение скоро- нению с ростом чника углеродИзобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения мультиплазмидного штамма, используемого для очистки окружающей среды, в частности для резорбции пленки нефти и нефтепродуктов в воде.Известен штамм Рзецйотпопаз аегцрпоза РАО, содержащий плазмиды САМ, ОСТ, МАН, ЯА 1., контролирующие утилизацию углеводородов, используемый для микробиологической деградации нефти и нефтепродуктов 11.Недостатком известного мультиплазмидного штамма Р. аегцрпоза РАО является низкая скорость утилизации неочищенной нефти.Исходным штаммом для получения предлагаемого является штамм Р. аегцрпоза 121, способный утилизировать октан. Этот штамм использован в качестве реципиента для внесения в него методом коньюгационного переноса плазмид биодеградации 21,Недостатком этого штамма является также невысокая скорость утилизации нефтепродуктов.Целью изобретения является получение штамма, способного с высокой скоростью осуществлять деградацию нефти, мазута и смазочных масел, который может быть использои среды от заодукта м и.Р. аегцрпоза онного переносаПеренос САМ был осущест. Полученный ностыо утилизиачестве единстЗатем в исход- тане и камфоре, мид из штамма риобретает спо, камфору, наф612958 Таблица 1 асота СеленРециинент Донор переносация 10 - 3 Р. аегцрпоаа 121 ОСТ+Р, аетцдпоаа 122, ОСТ+ СЛМ Рр С, 19 СЛМ+ те 1Ре рц 1 Ыа 51 ЙЛНасс СЛМ ного питания присутствует только один из перечисленных углеводородов (кривая б).Штамм Р, аегцрпоза 123 хранится в коллекции Музея лаборатории внехромосомнойнаследственности ИЬФМ АН СССР и имеетследующую характеристику.Морфологические культуральные признаки.Клетки прямые, палочковидные, размеры(2 - 5) Х (0,5 - 0,7) мк. Подвижные монотрихи,грамотрицательные, неспороносные.Мясо-пептонный агар.Колонии гладкие бесцветные, край неровный, в среде накапливается пигмент зеленогоцвета,Мясо-пептонный бульон.Образуется муть, хлопьевидный осадок ифлуоресцирующий пигмент.На стандартных средах, перечисленных выше, образуется пигмент циоцианин.Картофель, Отмечается хороший рост с образованием слизи.Физиологические признаки. Аэроб. Растетпри температуре 30 - 42"С, при 4 С - не растет.Отношение к сахарам. Использует д-глюкозу, д-фруктозу, Й-рибозу, глюконат. Не усваивает трегалозу,Отношение к углеводородам, Используетнафталин, н-алканы, камфору.Отношение к источникам питания, Ассимилирует аммонийный и нитратный азот.11 р и м е р. Штамм Р. аегцрпоза 123 выращивают па минеральной среде следующего состава, г:КНРО, 10КНР 04 1Ь 1 1-14 ХОа 2Мц 504 7 НО 0,05Ее 50 7 НО 0,01СцЬ 04 7140, мг 2НаЫОа НО, мг 0,06Мп 504 НО мг 0,3ИаМо 04 2 НО, мг 3Лп 504 НО 20СаС 1 6 НО 10МС 1 6 НО 0,5НО, л 1 В 250 мл колбы вносят 50 мл минеральной среды, 2,5 мл источника углеродного питания (нефть, мазут и смазочное масло) и 5 К 10 а клеток (до конечной концентрации 10"). Куль 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 тивирование производят на качалке при 30 С. Ежесуточно берут пробы, количество жизнеспособных клеток определяют высевом разведений на среду М 11 Л. Подсчет колонии осуществляют через 24 часа.Кривые роста штаммов Р, аегцрпова 121 и 123 на неочищенной нефти демонстрируют разницу в способности деградировать неочищенную нефть у экспериментально полученного штамма и исходного, выражающуюся в скорости роста (см, фиг. 1).Кривая а показывает изменение плотности клеток (количество клеток в мл среды штамма) штамма Р. аегцрпоза 121 во времени при концентрации нефти в 5-ной среде. Кривая б показывает существенное увеличение скорости роста штамма Р, аегцрпова 123 при наличии САМ, ГАН и ОС 1 признаков, контролирующих деградацию алканов, бициклических, полициклоароматических, ароматических углеводородов нефти, Максимальную плотность клеток 5 К 10 штамм Р. аегцрпоза 123 достигает на нефти на третьи сутки, исходный штамм плотность 3 10 а клеток/мм достигает на пятые сутки,На фиг, 2 представлены ростовые характеристики двух штаммов Р, аегцрпоза 121 и 123, утилизирующих мазут, как единственный источник углеродного питания,Максимальная плотность клеток штамма Р, аегцр 1 поза 121 на мазуте 5 10 - 10" клеток/мл (кривая и). Кривая б показывает увеличение скорости роста штамма Р, аегцрпоза 123 на мазуте и степени его деградации за счет включенных в клетку плазмид биодеградации. Минимальная плотность клеток штамма Р. аегцрпоза 123 на мазуте 10" клеток/мл.За двое суток экспериментально полученный штам Р. аегцо 1 поза 123 осуществляет резорбцию нефтяной пленки, утилизируя составные части нефти и мазута,При сравнении предлагаемого мультиплазмидного штамма с известными видно, что скорость роста штамма Р, аегцрпоза 123 на неочищенной нефти и мазуте значительно превышает скорость роста штамма аналога Р. аегцрпоза РАО, так как штамм Р. аегцо 1- поза РЛО нарастает до максимальной плотности за 5 - 6 суток, а сконструированный нами штамм Р. аегцрпоза 123 - за 2 - 3 суток.Таким образом, характерной особенностью мультиплазмидного штамма Р, аегцрпоза 123, 612958сконструированного путем коньюгационного переноса плазмид биодеградации, является способность утилизировать алканы, ароматические, циклические и полициклические органические соединения, а также способность деградировать нефть и нефтепродукты с высокой скоростью,Формула изобретенияШтамм Рзецйогпопаз аегпрпоза 123, несущий ОСТ+, СЛМ+, ХАН+ плазмиды, используемый при биологической очистке воды от нефти и нефтепродуктов. Хранится в коллекции музея лаборатории внехромосомной наследственности ИБФМ ЛН СССР,Морфологические признаки. Клетки прямые, палочковидные, размеры (2 - 5) 0,5 - 0,7) мк, Подвижные монотрихи, грамотрицательные, неспороносные.Культуральные признаки. Мясо-пептонный агар. Колонии гладкие, бесцветные, край неровный, в среде накапливается пигмент зеленого цвета.Мясо-пептонный бульон. Образуется муть, хлопьевидный осадок и флуоресцирующпй пигмент.Картофель, Отмечается хороший рост с об разованием слизи.Физиологические признаки.Отношение к углеводам. Усваивает Й-глюкозу, д-фруктозу, с-рибозу, глюконат. Не усваивает трегалозу.5 Отношение к углеводородам. Используетнафталин, н-алканы, камфору.Отношение к источникам питания, Ассимилирует аммонийный и нитратный азот.Келатину разжижает.10 Молоко свертывает.Растет при температуре 30 - 42 С.Аэроб. Рост не наблюдается при 4 С,Предлагаемьш штамм в отличие от извест ного позволяет за двое суток осуществлятьрезорбцию нефтяной пленки, утилизируя составные части нефти и мазута. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе20 1. Патент США Мо 3813316, кл. 195 - 28,опублик. 1974.25 2. Штамм Рзецдогпопа аегцрпоза 121.Хранится в коллекции музея лаборатории внехромосомной наследственности ИБФМ АН СССР, 1976.612958 10" 08 а 7 Я Й 10 О10.У Времв(дни) Фи 2,1 10108Е10 10 2Вреин(дни) Фиг,2 Подписное Заказ 1258/16 Изд.520 Тираж 568 НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5