Установка для получения и разлива клеточной суспензии из почечной ткани

Йооз Ьвесниз Соцналистичеснии РеслублинЗависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 23.Х 1.1971 ( 1715443/30-15) Кч С 121 о писоединением заявки Приоритет Комитет оо деламизобретений и атирыт УДК 578.085.23(088.8 бликовацо 23.Ч.1973. Бюллетень23 а опубликования описания 24.1 Х.1973 и Совете Министре СССР. Курносов, Д. Е, Сухиц, В. И, Морозов, В. Н. Кадетов,Д, Ф. Осидзе, В, А. Зуев и В, Н. Опарицесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарнойвирусологии и микробиологии Заяви,тел ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ И РАЗЛИВА КЛЕТОЧНОСПЕНЗИИ ИЗ ПОЧЕЧНОЙ ТКАНИ ТАНОВК Изобретение отцосится к области биологических исследований прн культивировании тканей.Известная установка подобного назначения, содержащая камеру для дезагрегации почек, емкости для разлива суспензии и рабочих жидкостей и систему трубопроводов, не приспособлена для дезагрегации почечной ткани путем ферментативной перфузии изолированных почек и не обеспечивает разлива суспензии в виде беспрерывного цикла.В предлагаемой установке в отличии от известных камера для дезагрегации имеет закрепленный на внутренней поверхности крышки коллектор, состоящий из соединенного с насосом патрубка с канюлями, на которые надевают артерии подготовленных для дезагрегации почек, и блок установленных горизонтально на валу плоских ножей с вертикально расположенными противорежущими пластинами, имеющими радиальные пазы для прохождеция ножей при измельчении почки. При этом камера для дезагрегации расположена над емкостью для разлива суспецзии ц соединяется с последней через фильтр.На фцг. 1 схематически изображена предлагаемая установка, ца фиг. 2 - камера для дезагрегации ц емкость для разлива суспензци, вцд сбоку (в разрезе); на фцг, 3 разрез по А - А на фиг. 2,Предлагаемая установка содержит аппарат, состоящий цз камеры 1 для дезагрегации почек, соединенной трубопроводами 2, 8, 4 через перцстальтический насос 6 с емкостью 5 6 для ферментативного раствора и емкостью7 с питательной средой ц разливочной емкости 8, соединенной трубопроводамц 9 ц 1 Г) с емкостью 6 и дозатором 11.На всех трубопроводах смонтированы вец тили. Емкость для фермецтативцого растворапомещена в водяную ванну 12, температура которой автоматически поддерживается ца заданном уровне. Разлив клеточной суспецзиц производится из разливочной емкости в 15 культуральные сосуды с помощью поршневого дозатора промышленного выпуска. Камера ц емкости снабжены воздушцымц фильтрами 13, препятствующими проникновению мцкрофлоры цз окружающей среды. Для слц ва отмывочной жидкости предусмотрен отдельный трубопровод с запорным вентнлет 14.Корпус камеры 1 выполнен цз прозрачноготермостойкого стекла, позволяющего осу ществлять визуальный контроль за процессамц отмывки и дезагрегации почечной ткани животных. Оца герметично закрывается крышкой 15 с резиновой прокладкой 16 посредством фланца 17. В крышке смонтирован 30 вентиль 18 с воздушным фильтром 19, в цен 38268,3тряльОЙ части крышки кянеры сделано Отверстие, которое герметично закрывается откидной крцКой 20, по,лкнмаемой винтовымстройством 21, На гиутреиией :Ове 1 эхиости это р.;Нк смонтировано устройство для фсрмситативной пер"узи по 1 Ск, сос,оящее из -.рубчатого коллектора 22 с канюля.и 23 для подсоединения артерий почек и вывсдсн- НОГО няржу натру ока 24, слукян,его для сосди;ения ко,лектора с насосом, осществляО- щим ГОдяч ряоочих кдкостси. Камера Герметично крепится на крышке 25 разливочной емкости 25 и сообщается с ией посредством выполненного в днище 27 отверстия 28, плотно закрыьасмого заслонкой 29, соединенной со штоком 30, проходящим;ерез камеру и имеющим маховичок 31. Б крышке шток уплотняется фторопластовым сальником, Внутри камеры иа валу установлен блок режущих элементов и лопастная мешалка 32, с помощью которой производится механическая дезагрегация кусков пер фузионной почечной ткани в питательной среде, Блок содержит один плоский нож 33 для отсечения почечных артерий и три пары ножей 34 для рассечения перфузионных почек, Парные ножи выполнены плоскими и расположены на определен- ном расстоянии друг от друга, вполне обеспечивающим рассечение почек независимо от их величины. Для осуществления рассечения почек в камере на стойках 35 установлены вертикальные опорные пластины Зб с радиальными пазами 37 для прохода ножей. Вал 38 камеры соединен с валом 39 емкости легко разъемной муфтой 40 и крепится в верхней части с помощью кронштейна 41, установленного на крышке 15,Разливочная емкость 2 б выполнена цилиндрической формы с конусообразным днищем, Она служит для разбавления конценТрированной клеточной суспензии и ее розлива В культуральные сосуды. На валу емкости смонтирована лопастная мешалка 42 для перемешивания клеточной суспензии при ее розливе, чтобы концентрация разливаемой суспензии была одинаковой, Вверху под днищем камеры установлен фильтр 43 для фильтрации концентрированной клеточной суспензии сливасмой в емкость после дезагрегации почек в питательной среде. В днище емкости вал мешалки герметизируется торцовым уплотнением подшипника скольжения н на выходе имеет шкив 44, с помощью которого он соединяется с выходным валом редуктора 45 электродвигателя 4 б. Кроме того, в днище камеры смонтирован патрубок 47 с отводом 48 для отбора проб и штуцер 49 для подсоединения мерной трубки 50, по уровню которой определяется объем, занимаемый разбавленной клеточной суспензии. Для получения клеточной суспензин на предлагаемой установке почки берут от животных-доноров с сохранением капсул и артерий,510 15 20 гб 30 35 40 45 50 55 бО ь 5 Поворотом вала 38 режуще элементы устанавливаются в исходное положение, не препятствующее размещенщо почек в камере 1. В асептических услсв:.ях при открытой крышке 20 почки посредством их артерий подсоединяяОтся к канОляз 23, после чего крышка герметичнО зякрыгяется ВинтОВым устройством 21 с одновременным опусканием по 1 ек Внутрь камеры. Поворотом мяхОВнчка 31 открывается отверстие 28 в днище камеры. Затем открываются вентили 14 и 18, Включается насос 5 и производится отмьвание ткани почек от крови. Для этого подогретый до 35 - 37 С ферментативный раствор подается через канюли 23 в сосудистую сеть каждой почки. Вытесненная из них кровь через вены и мочеточники стекает на дио камеры, а из пее через отверстие 28 в емкость 2 б, из которой по патрубку 47 она удаляется в отдельную емкость.В зависимости от вида и размеров почек на промывку их от крови расходуется 150 - 250 лл ферментативного раствора.Когда отмывочная жидкость будет прозрачной, включается система рециркуляцин ферментативного раствора. С этого момента начинается процесс дезагрегации почечуй ткани путем ферметативной перфузии. При этом ферментативный раствор в виде пульсирующего потока из емкости б подается насосом 5 через коллектор с канюлями в сосуды почек, затем он через камеру 1, разливочную емкость 8 по трубопроводу 9 поступает обратно в емкость б. За счет циркуляции раствора по замкнутому контуру достигается значительное снижение расхода рабочей жидкости, ферментативная перфузия почек продолжается в течение 10 - 30 мин и заканчивается, когда под капсулами почек образуется разветвленная сеть трещинок, свидетельствующих о достаточном разрыхлении паренхимы почек за счет разрушения межклеточных связей. По окончании перфузии почек пропусканием небольшого количества питательной среды они отмываются от ферментативного раствора.Затем проводится процесс полученгя концентрированной клеточной суспензии. Для чего вентиль 14 и отверстие в днище камеры закрываются, а камера заполняется питательно средой примерно на 1/3 ее объема. При выключенном насосе ножи приводятся во вращение. Сначала почки рассекаются парными ножами 34, а затем ноком ЗЗ отсекаются их артерии, При рассечении куски почек подают в питательную среду, в которой они под действием перемешивания лопастной мешалкой 32 дезагрегируются на отдельные клетки. Эта операция длится в 2 мин.По окончании дезагрегации почек открывается отверстие 28 камеры, и концентрированная клеточная суспензия через него и фильтр 42 сливается в разливочномуО емкость, Проходя через фильтр, она очищается от остатковкапсул и лоханок. Через пробоотборник берется проба, и по результатам подсчета клеток суспензия разбавляется необходимым количеством питательной среды, подаваемой насосом через камеру для дезагрегации почечной ткани.Окончание процесса разбавления определяется по уровню мерной трубки 50, После этого включается мешалка 42 и через дозатор 11 производится разлив клеточной суспензии в культуральные сосуды. Таким образом, при эксплуатации предлагаемой установки все технологические операции от загрузки почек до разлива готовой суспензии выполняются в виде непрерывного цикла в условиях, изолированных от окружающей среды, в результате чего во много раз повышается степень стерильности процесса получения клеточной суспензии. Благодаря механизации большинства операций резко сокращаются затраты ручного труда, а также во много раз (по сравнению с известными) облегчается обслуживание предлагаемой установки,Предмет изобретения 1. Установка для получения и разлива клеточной суспензии из почечной ткани, содер жащая камеру для дезагрегации почек, емкость для разлива суспензии и рабочих жидкостей и систему трубопроводов, отличающаяся тем, что, с целью осуществления дезагрегации почечной ткани путем ферментатпв ной перфузии изолированных почек и обеспечения разлива суспензии в виде беспрерывного цикла, камера для дезагрегации имеет закрепленный на внутренней поверхности крышки коллекторсостоящий из соединеп ного с насосом патрубка с канюлями, на которые надевают артерии подготовленных для дезагрегации почек, и блок установленных горизонтально на валу плоских ножей с вертикально расположенными противорежущпми 20 пластинами, имеющими радиальные пазы дляпрохождения ножей прп измельченпи почки.2. Установка по п. 1, отличающаяся тем,что камера для дезагрегации расположена над емкостью для разлива суспензин и соеди няется с последнеи через фильтр.хред Л. Богдано пографпя, пр. Сапунова, 2 оказ 2448/16 Изд.бб 8 Тираж 467 ПодписноеЦ 1-ИИПИ Комитета по делам изобретеппй и открытий при Совете Министров СССР Москва, )К, Раушская паб., д. 4,5