Устройство для тестирования биологически активных соединений с помощью подвижных клеток животного происхождения

/00 И ОПИС уч- ои эиК НИЯНЕия бис по-. еток, кспе- иммуИзобр медицине рования бний с по клеток, ко эксперим ологии, а также дляеской медицине. ии, фарма ки в практ мунол агност тение ен иоло ощь сти ра ости ре рое мталь ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(56) 1. В 9 под 1.Р, Озе о 1 зрэзе-рогеро 1 сагЬопате (Кос 1 еороге) тетЬгапе аког йетеазцгетеп 1 о 1 сЬетотахз о 1роугпогрЬопос 1 еаг 1 еЫсосутез. Согпраг 1 зопо 1 в 1 сго-Воудепз сЬапЬегз апд езбгпаОопо 1 "бгор-оН" о 1 се 11 з,У. 1 пипцпоо 9, Мейодз,118 (1989), 217 - 225,2.еЛгеу 5.В. ет э 1,. 1 угпрЬосусе гпоЬ 111 туапб 1 угпрЬосуте сЬегпоаигастапс 1 астогз,пппопо 1 о 91 са 1 пчезт 1917 (1988), 625 - 627,(54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ТЕСТИРОВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕД НИЙ С ПОМОЩЬЮ ПОДВИЖНЫХ КЛ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ (57) Использование: в биологии и меди а именно в устройстве для тестирован ологически активных соединений мощью хемотаксиса подвижных кл которое может найти применение в э риментальной биологии, онкологии,относится к биологии и о к устройству для тестиески активных соединехемотаксиса подвижных ожет найти применение в ой биологии, онкологии,нологии, фармакологии, а также для диагностики в практической медицине. Сущность; устройство содержит нижнюю пластину с множеством открытых с двух концов каналов У-образной формы, представляющих собой нижние полукамеры. В расширенную часть каждого Ч-образного канала вставлена верхняя полукамера, выполненная в виде индивидуального цилиндра, Под верхнюю полукамеру помещена пористая перегородка в виде индивидуального диска. С помощью четырех пластин, содержащих комплементарные верхним полукамерам сквозные отверстия и снабженных винтами, верхние и нижние полукамеры прижаты друг к другу. В нижнюю полукамеру вносят питательную среду. В верхнюю полукамеру помещают суспензию подвижных клетокмакрофагов с известным количеством кле- фток, Спустя заданный промежуток времени в нижнюю полукамеру вносят тестируемое биологически активное вещество в рабочих Б разведениях, За время инкубации происходит процесс миграции подвижных клеток через поры перегородки на ее нижнюю сторону по градиенту концентраций БАВ. Результат регистрируют после фиксации и окрашивания клеток на перегородке по числу клеток на ее обратной стороне. Устройство позволяет снизить трудоемкость работы и повысить воспроизводимость результатов. 2 ил., 2 табл. изобретения - . снижение трудоемоты и повышение воспроизводиул ьтато в.35 40 4550 55 На фиг. 1 схематически изображенопредлагаемое устройство для тестирования, вид с торца; на фиг, 2 - то же, видсверху.Устройство содержит нижнюю пластину1 с множеством открытых с двух концовканалов Ч-образной формы 2, представляющих собой нижние полукамеры. В расширенную часть 3 каждого Ч-образного каналавставлена верхняя полукамера 4, выполненная в виде индивидуального цилиндра, Подверхнюю полукамеру 4 помещена пористаяперегородка 5 в виде индивидуального диска, С помощью четырех пластин 6, содержащих ком плементарные верхнимполукамерам 4 сквозные отверстия и снабженных винтами 7, верхние и нижние полукамеры прижаты друг.к другу, .Устройство для тестирования биологически активных веществ используют следующим образом.В нижнюю полукамеру 2 вносят питаельную среду таким образом, чтобы послепомещения диска иэ пористой перегородки5 между верхней и нижней полукамераминабл.одалось видимое отсу 1 ствие пузырейвоздуха под ним. В верхнюю полукамеру 4, помещают суспензию подвижных клеток -макрофагов с известным количеством клеток, спустя заданный промежуток временипосле оседания клеток на полупроницаемую пористую перегородку 5 и их прикреп-,ления на поверхности перегородки внижнюю полукамеру 2 вносят тестируемоебиологически активное вещество в рабочихразведениях. В результате создается градиент концентрации биологически активногосоединения через пористую, перегородкуПодвижные клетки, например макрофаги,мигрирукт через поры перегородки на,еенижнюю сторону, Температурный режим входе работы с клетками - стандартный(37 С). Время, в течение которого происходит миграция клеток, подбирается экспериментально(1-3 ч), Результат регистрируетсяпосле фиксации и скрашивания клеток наперегородке по числу клеток, мигрировавших на обратную сторону перегородки,В качестве полупроницаемых перегородок использованы ядерные поликарбонатные фильтры (ОИЯИ, Дубна), Фильтрыподвергали предварительной обработке, вкачестве стандартного хемоаттрактанта использован формилметионин-лейцин-фенилаланин (ЕМ 1 Р),В табл 1 и 2 представлены результатыпроведения процесса тестирования биологически активного соединения (ГМ Р) на описанном устройстве.Как видно иэ данных таблицы 1, временем, достаточным для изучения хемотаксиса макрофагов с помощью описанного устройства, является 1 ч. Как видно из таблицы 2 максимальнаявеличина хемотаксиса достигается при кон- "0 центрации ЕМ Р, равной 10 М.Описанное устройство обеспечиваетснижение трудоемкости работы при тестировании .биологически активных веществ (БАВ) за счет точной дозировки концентра ций клеток и тестируемых БАВ во всех камерах, позволяет осуществлять в ходе опыта дополнительную оксигенацию,замену питательной среды, смену концентрации тестируемого соединения, Использование в 20 описанном устройстве полупроницаемойперегородки в виде индивидуальных дисков вместо сплошного листа в прототипе снижает расход материала этих перегородок. Кроме того, устройство обес печи ьает одновременное проведение множества наблюдений в одинаковых условиях, что способствует повышению воспроизводимости..результатовналичие независимых секций, содержащих множество изолированных ка мер, представляет дополнительное удобство при проведении тестов с разными временными интервалами, различными соединениями, клетками и другими модификациями схемы проведения измерений,Формула изобретения Устройство для тестирования биологически активных соединений с помощью подвижных клеток животного происхождения, содержащее две пластины, нижняя из которых имеет множество нижних полукамер, а верхняя - множество комплементарных этим полукамерам сквозных отверстий, формирующих собой верхние полукамеры, и пористую перегородку, о т л и ч а ю щ е ес я тем, что, с целью снижения трудоемкости работы и повышения воспроизводимости результатов, пористые перегородки выполнены в виде дисков, количество которых соответствует количеству камер, нижние полукамеры. представляют собой открытый с двух концов Ч-образный канал, а верхние полукамеры - цилиндры, вставленные в расширенную часть Ч-образных каналов с возможностью прижатия к нижним полукамерам с помощью верхних пластин.3838400 Таблица Таблица 2 . Зависимость интенсивности миграции макрофагов от коицентрации ГМлукамере в нижней поЗависимость хемотаксиса подвижных клеток макрофагов) через поликарбонатный фильтр от времени инкубации в контроле и после предьлвленил им РМ.Р1838400 Составитель А. Меликянех ед М, Моргентал аэ 2905 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 эводственно-издательский комбинат "Патент", г. ужгород, ул,Гагарина, 10 Редактор т р Корректор Т. Вашкович