Способ определения устойчивости вируса к обезвоживанию

758074 А СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ ИОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР С 12 Й 1/00, С 1201/ НИЯ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Ъ-, р1 :.," ,:.:. 2(21) 4811995/13 :лаги. Исследуемые и контрольные образцы (22) 09.04,90 .:, . выдерживают при температуре, не вызыва- (46) 30.08,92. Бюл, М 32ющей термоинактивацию вируса в течение (71) Всесоюзный научйо-исследовательский . времени проведения эксперимента, Приинститут молекулярной биологии Научно-. этом определяют относительные массы исспроизводственного объединения "Вектор":.ледуемых образцов и биоактивность виру- (72) В.Н, Зеленков; В,В. Солодкий и С,И,: сов в контрольныхи исследуемыхобразцах . Золотых .в разные моменты времени стандартными (56) Бекер М.Е. Обезвоживание микробной методами с последующим нахождением биомассы, Зинанте, Рига, 1967, с. 81; . скоростей изменения относительной массыАвторское свидетельство СССР исследуемых образцов и биоактивности ви- М 1317026, кл, С 12 0 1/00, 1985, русое в этих образцах. Устойчивость виру- (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИ- сов:к обезвоживанию определяют по ВОСТИ ВИРУСА К ОБЕЗВОЖИВАНИЮ отйошению скорости изменения биоактив- (57) Использование: медицина, вирусология. ности к скорости йзменения относительной Подготовленные исследуемые и контроль-массы исследуемых образцов, В процессе ф ные образцы вирусных нативных суспензий осуществления способа соблюдается равен- размещают в емкости с крышками. В ем- ство биологической активности вируса в кость с исследуемыми образцами помеща- :койтрольных образцах и исходной вирусной ют сорбент для бесконтактного удаления суспенэии:2 ил.,2 табл.в е Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использовано в вирусологической практике для опреде- ления устойчйвости вирусов в составенативных суспензий при обезвоживании.Известныконтактйые способы опреде-ления влзгоустойчивости микроорганизмов, при которых заданная конечная влажность биомассы принимается равной влажности смеси адсорбент - биомасса, а также учиты-. вается удельная массоемкость пробы био-. массы и здсорбента и рассчитывается колйчество адсорбента, необходимое для смешивания в зависимости от начальной и заданной конечной влажности биомассы, начальной влажности адсорбента и установленйой удельной массоемкости биомассы и здсорбента.Недостатком указанных способов является невозможность использования их для определения устойчивости вирусов к обез- воживанйю в связи с возможной адсорбцией вирионов нз поверхности адсорбента и инактивации вируса вследствие выделения тепла при связывании воды с адсорбентом, Указанные причины влияю на результат определения бйозктивности вируса, определяемой стандартными методами титрования для ресуспендированной в водной среде смеси биомасса - адсорбент,Наиболее близким к изобретению являтся способ определения влагоустойчивости микроорганизмов, при котором устанавливают конечное значение влажности путемизмерения текущего значения влажностии устанавливают соответствующее емувремя выдержки, Обезвоживание биомассы осуществляют бесконтактным массообменом при 1-4 оС, а определениевлагоустойчивости микроорганизмов ведутпо графику зависимости выживаемостимикроорганизмов от конечного значения.,е.авлажности,Недостатком прЬтотипа является длительность цикла определения устойчивостимикроорганизмов к обезвоживанию (до 18 ч)вследствие длительности проведения процесса обезвоживания при 1 - 4 С и длительности определения остаточной влажностиобразцов при обезвоживании с использова: нием их высушиванйя до постоянного весав сушильном шкафу при 105 С, Причем приприменении указанного способа для определения влагоустойчивости вирусов длительность цикла увеличивается еще внесколько раэ. Это связано с тем, что вирусные суспензии имеют сухой остаток в 3-4раза меньший по сравнению с бактериаль. ной биомассой, что ведет к увеличению обьемов анализируемой суспензии вируса (дляобеспечения достаточной точности определения,влажности биомассы) и, как следствие, увеличивается время определенияустойчивости вирусов к обезвоживанию,Цель изобретения - ускорение способаопределения устойчивости вирусов к обезвоживанию и сокращению расхода вирусной суспензии,Цель достигается тем, что способ определения устойчивости вирусов к обезвоживанию включает приготовление вируснойсуспензии и размещение ее в емкости ссорбентом для бесконтактного удалениявлаги. Далее определяют отдельные массыинкубируемой суспензии, а также репродукционную активность вирусов в исследуемойсуспензии. Рассчитывают скорости изменения относительной массы и репродуктивнойактивности вируса. Оценку устойчивости вируса к обезвоживанию проводят по отношению скорости изменения репродуктивнойактивности к скоростй изменения относительной массы.В данном способе не требуется проводить измерение влажности исследуемых образцов, что сокращает расход вируснойсуспейэии и ускоряет способ.На фиг, 2 представлен график зависимостигпг100 , =,п 1 о гпг50 55 дукционную активность суспенэии вируса ВЭЛ по стандартной методике титрованием намонослое культуры ф Э К (фибробласты куриных эмбрионов). Репродукционную активность выражают в 1 ц БОЕ/мл. Параллельно определяют репродукционную активность суспензии вируса ВЭЛ в контрольных образцах для исключения возможных ошибок вследствие термоинактивации вируса эа время экспозиции образцов. где гпг - масса исследуемого образца с чашкой в момент 1;гпо - масса образца с чашкой до обезвоживания;5 гпг - масса чашки,описывающей изменение относительноймассы исследуемых образцов вирусной суспензии ВСЭЛ (щтамм ТС) во времени (1);на фиг. 2 - график Тг = ф) зависимости иэме 10 нения биоактивности (биотитра) исследуемых образцов вирусной суспенэии ВЭЛ(штамм ТС), выраженного в д БОЕ/ мл,за время их обезвоживания (точки К соответствуют значения"биотитров контрольных15 образцов);Способ поясняется конкретным примером его реализации при определении устойчивости к обезвоживанию вирусавенесуэльского энцефаломиелита лошадей .20 (ВЭЛ, штамм ТС), Суспензию вируса.ВЭЛ наливают в йредварительно простери- .лизованные и взвешенные на весах чашки смассой (гпг) по 0,3 мл в каждую, Чашки сисследуемыми образцами взвешивают, оп 25 ределяя массу (гпо), и устанавливают в герметичные емкости с сорбентом, В качествесорбента используют ионообменную смолуКа форму катионита КБ 4 П 2, влагоемкостькоторого составляет 150 г/100 г, Чашки с30 контрольными образцами объемом 0,3 млустанавливают в пустую герметичную емкость. Емкости с исследуемыми и контрольными образцами устанавливают в. суховоздушный термбстат с температурой35 37 С, не вызывающей термоийактивациювируса ВЭЛ в течение времени проведенияобезвоживания сорбентом исследуемыхобразцов до момента прекращения изменения их веса. Через определенные промежут 40 ки времени извлекают из емкости ссорбентом по 3 исследуемых образца и определяют текущие значения их массы (в).Далее вычисляют относительные массы исследуемых образцов 100 о/ ДанПГ - П 1 г, ,гпо . гпгные сведены в табл, 1,После операций взвешивания каждыйраз содержимое трех чашек с исследуемымиобразцами объединяют и определяют репро1758074 100% = ) пч 1 г, 100%(т) Таблица 1 Результаты сведены в табл. 2:После этого, используя табл. 1, строят график линейной убыли массы исследуемых образцов во времени: который представлен на фиг, 1, и график линейной убыли репродукционной активностиво времени Т 1 = ф), используя табл, 2, Кроме того, на последнем графике наносят точки К, которые показывают репродукционную активйость вируса ВЭЛ в контрольных образцах. В процессе проведения эксперимента соблюдалось равенство репродукционной активности вируса ВЭЛ в контрольных образцах и исходной вирусной суспензии, которая равнялась 9,О ц БОЕ/мл, что подтверждает достоверность данных по определению устойчивости вирусов к обезвоживанию.По графику на фиг. 1 определяют скорость изменения относительной массы исследуемых образцов ВЭЛ. которая соответствует тангенсу угла й наклона линейного участка функции и равна сд а= -0,4%/мин,По графику на фиг, 2 определяют скорость изменения репродукциойной активности исследуемых образцов ВЭЛ, которая соответствует тангенсу угла (/3) наклона линейного участка функции Тг = цт) и равна ядр=-5,8 10 д БОЕ/мин мл Устойчивость вируса ВЭЛ к обезвоживанию определяют по отношению скорости изменения репродукциойной активности тц /3) к скорости щ а) изменения относительной массы исследуемых образцов, т. е. Ятд а -0,4 %/мин = 1,5 10 д БОЕ/ мл,% 1 д - 5,8 10 ц БОЕ/мин мл. Величина 1,5 10 ц БОЕ/ мл % характеризует устойчивость вируса ВЭЛ (штамм ТС 83) к обезвоживанию, а именно изменениемассы образца за счет удаления воды на100%, что ведет к изменению репродукционной активности вируса на 1,5 ц БОЕ/мл,"0 т, е, в 32 раза. Использованиеконтрольныхобразцов для подтверждения соответствияих биотитров репродукционной активностиисходной суспенэии вируса показывает корректность определения устойчивости вируса к обезвоживанию.Технико-зкономические преимуществапредлагаемого способа по сравнению спрототипом состоят в ускорении способаопределения устойчивости вируса к обезвоживанию с 18 ч до 4 ч за счет проведенияпроцесса обезвоживания при 37 С, а не при1-4 ОС, как в прототипе, Кроме того, отпадает необходимость определения остаточнойвлажности исследуемых образцов, что позволяет уменьшить расход исследуемой вирусной суспензии в 3 - 4 раза,Формула изобретения Способ определения устойчивости вируса к обезвоживанию, включающий приготовление вирусных суспензий и размещение их в емкости с сорбентом для бесконтактного удаления влаги с последующей оценкой, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения расхода вирусной суспензии и ускорения способа, определяют во времени отдельные массы инкубируемых суспензий, а также репродукционную активность виру- . сов в исследуемых суспензиях, рассчитывают скорости изменения относительной массы и репродуктивной активности вирусов, а оценку проводят по отношению скорб- сти изменения репродукционной активности к скорости изменения относительной массы, .,щ дрлиг и вп в га цп а ец Составйтель Ю, МистюринТехред М,Моргентал Корректор Л, Лукач Реда кто е 2 Тираж ПодписноеПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035; Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 29 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101