Способ получения иммунных сывороток к вирусу гриппа

(5)5 А 61 К 39/4 ТЕНИ ОПИСАН Б ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Научно-исследовательский институт вирусных препаратов АМН СССР (72) В,Ф.Семенков, О.Н,Агеева и И,В.Головлева(56) Практическая вирусология. - Ред. Г,Штарке. М,; Колос, 1970, с.165-170.Ровнова З.И, Вопросы вирусологии, 1959, 4, стр,465 - 470. Изобретение относится к медицине, вчастности к иммунологии и вирусологии, иможет быть использовано для полученияспецифических нефтрализующих антител квирусу гриппа.Цель изобретения - повышение активности сывороток,Проводят трехкратную иммунизациюбелых мышей внутримышечно с интервалом7-10 дней, причем для 2 и 3 инъекций используют антиген, смешанный с полнымадьювантом Фрейнда при соотношении вирус:адьювант (5 - 7);1,П р и м е р 1. Патогенный для мышей вирусгриппа А/РЯ/8/34 культивируют в куриныхэмбрионах. Очищают и концентрируют вирусметодом ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Взвесь концентрированного вируса гриппа используют длявведения мышам в мышцу бедра в объеме0,1-0,15 мл с содержанием белка 2 -15 мкг/мышь. Для 2 и 3 инъекций к взвесивируса добавляют полный адьювант Фрейнда при соотношении вирус;адъювант (5 -(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУННЫХ СЫВОРОТОК К ВИРУСУ ГРИППА(57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и вирусологии, и . может быть использовано для получения специфических нейтрализующих антител к вирусу гриппа. Цель изобретения - повышение активности сыворотки. Мышей иммунизируют 3-кратно внутримышечно с интервалом 7 - 10 дней, при этом для 2 и 3 инъекций используют вирус, эмульгированный в полном адьюванте Фрейнда при соотношении вирус:адъювант (5-7):1. 7 табл. 7):1 и непосредственно перед набором в (Д шприц смешивают взбалтыванием с после- ( - дующим введением смеси. На 8-10 день после 3 иммунизации у мышей забирают кровь из ретроорбитального сплетения и получают сыворотку, которую инактивируют нагреванием при 56 С в течение 30 мин. Специфические антитела к вирусу гриппа Ос определяют в реакциях вируснейтрализа- СО ции (РН), торможения геммагглютинации а (РТГА) и связывания комплемента (РСК) (см. Ор табл.1).В реакции преципитации в геле антисыворотка дает выраженные линии преципитации с вирусом гриппа (разрушенным).П р и м е р 2. Метод получения вируснейтрализующих антител к непатогенному для ф мышей штамму А/Краснодар/101/59 не отличается от описанного в примере 1. Результаты титрования сывороток представлены в табл.2,Наличие в полученных антисыворотках вируснейтрализующих антител доказывают методом аффинной хроматографии на им1681859 Таблица 1 Титры специфических антител к вирусу гриппа А/Рй/8/34(Н 181) после трехкратной иммунизацииыворотки получают от 2-5 мышей аблица Титры специфических антител к вирусу гриппа А/Краснодар/101/59 после трехкратной иммунитации мышейСыворотки получают от 4 - 6 мышей муносорбенте, коньюгированным со специфическими вирусными антигенами (см.табл,3),Препарат антител, обогащенный вируснейтралиэующей активностью, подавляет 5репликацию вируса гриппа в легких инфицированных мышей и защищает от летального исхода 100 О, мышей (см.табл,4),П р и м е р 3, Метод получения вируснейтрализующих антител дан в примере 1. 10Схема иммунизации в опытах 1.-6, 1инъекция 5 мкг вируса на мышь, через 7дней 2 инъекция - 10 мкг вируса на мышь,через 7 дней 3 инъекция - 15 мкг вируса намышь, Гипериммунные сыворотки получают 15на 9 день после 3 иньекции. В отличие отпредлагаемого способа иммунизации (применение адъюванта фрейнда для 2 и 3 инъекций в указанном соотношении, группы 2и 3, 5 и 6) используют адьювант Фрейнда в 20соотношении к взвеси вируса 1:1, что сопровождается более низкими титрами вирусонейтрализующих антител (группы 1 и 4) иналичием летальности при иммунизации патогенным вирусом гриппа (группа 1). 25Динамика титров вирусонейтрализующих антител после 1 - 5 внутримышечных иньекций вируса гриппа А/Рй/8/34 приведена в табл,7.Схема иммунизациии1 инъекция вируса гриппа в дозе 5 мкг на мышь беэ адьюванта фрейнда внутримышечночерез 7-10 дней 2 инъекция вируса гриппа в дозе 5 - 10 мкг с полным адъювантом Фрейнда при соотношении вирус: адъювант (5 - 7):1 внутримышечночерез 7-10 дней 3 инъекция вируса гриппа в дозе 5 - 15 мкг с полным адъювантом фрейнда при соотношении вирус: адъювант (5 - 7);1 внутримышечно.Гипериммунную сыворотку получают на 8-10 день после 3 инъекции вируса гриппа.Формула изобретения Способ получения иммунных сывороток к вирусу гриппа путем парентеральной иммунизации животных, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения активности сыворотки, иммунизацию проводят трех- кратно внутримышечно с интервалом 7-10 дней, и ри этом для 2 и 3 иммунизаций используют вирус, змульгированный в адъюванте Фрейнда при соотношении вирус:адъюва нт (5-7):1.1681859Таблица 3 Распределение биологических активностей в препаратах из фракционированной иммунной сывороткиТаблица 4 Сравнение протективной активности препаратов из фракционированной иммунной сывороткиП р и м е ч а н и е. Мыши заражаются интраназально дозой вируса 0,05 мл штамма А/Рй/8/34 1500 ЭИДю, Выживаемость контрольных мышей составляет 16, иТаблица 5 Титры специфических антител к патогенному А/РР/8/34(Н Ю ) и непатоген ному А/Краснодар/101/59(Н 2 Й 2) штаммам вируса гриппа при различных соотношениях адъюванта Фрейнда к взвеси вируса1681859 Продолжение табл.5 Таблица 6 Динамика титров вирусонейтрализующих антител при различных интервалах между тремя внутримышечными инъекциями вируса гриппа А/Рй/8Заказ 3356 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушскэя наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Число пуловых сыворо- ток 2560 + 192 7625 + 584 14112 + 968 13920 ф 440 14230 + 532