Способ выделения 1, 4-3-кетостероидов из культуральной жидкости

Изобретение касается производства Ь-3 кетостероидов. получаемых маробитмалогическим дегидрированием Ь -3-кето 4 стероидов в присутствии циклодекстринов, а именно к способам выделения Ь -3-кетоМ стероидов из культуральной жидкости упомянутого процесса,Целью изобретения является упрощение процесса, улучшение его экологическойхарактеристики и повышение степени регенерации циклодекстрина. 10 Отличительными особенностями способа являются:выделение стероида с помощью первоначального высаживания его из культуральной жидкости (в прототипе стероид выделяют экстракцией), что достигается использованием на выделение стероида минимального объема одного из вышеназванных растворителей, который, разрушая комплекс включения стероидциклодекстрин, сам образует труднорастворимый комплекс с циклодекстрином и стероидом, причем и стероид, и циклодекстрин высаживается из культуральной жидкости в виде осадка. При этом минимальный обьем растворителя должен быть достаточным для полного высаживания и стероида, и циклодекстрина; Культуральную жидкость после завершения процесса дегидрирования Ь -3-кетосте 4роида обрабатывают при перемешивании 0,05-0,15-кратным (по отношению к объему культуральной жидкости или 5-15-кратным по отношению к массе стероида) количеством специфически подобранного несмешивающегося с водой, апротонного, неполярного органического растворителя. Такие растворители могут быть выбраны из ряда галоидсодержащих углеводородов (хлороформ, хлористый метилен), ароматических углеводородов (толуол) и циклических углеводородов (циклогексан), Выпавший осадок, содержащий смесь циклодекстрина со стероидом или его аддуктом с хлороформом, отфильтровывают и сушат. Стероид извле кают 20-кратным количеством (по отношению к массе стероида) смеси используемого ранее растворителя - низшего спирта (например, метанол, этанол, изопропанол) 1;1 при кипении. Нерастворившийся циклодекстрин отфильтровывают, сушат и могут испольэовать повторно на ферментации, Стероид выделяют фильтрацией после упаривания смеси растворителя до 2-3-кратного объема к массе стероида,в качестве органического растворителя может использоваться растворитель, удовлетворяющий следующим требованиям.Способностью образовывать с циклодекстрином труднорастворимый комплекс для осаждения последнего из культуральной жидкости,Способностью вытеснять стероид из комплекса включения с циклодекстрином, высаживая и стероид в виде осадка.Не образующий эмульсии в процессе высаживания стероида и циклодлекстрина, так как известно об образовании стабильной эмульсии в процессе осаждения ф-циклодекстрина.Растворитель должен быть дешевым и доступным,Иэ отфильтрованной смеси циклодекстрина и стероида стероид извлекают 20-кратным количеством смеси соответствующего растворителя с низшим спиртом (метанол, этанол или изопропанол). Такое количество смеси является необходимым и достаточным для полного извлечения стероида из осадка. Причем выход целевого продукта составляет при этом 92-95. Меньшее количество смеси не обеспечивает полноты извлечения. Большее количество использовать нецелесообразно, Степень регенерации циклодекстрина также выше 90,П р и м е р 1, В культуральную жидкость после Ь -дегидрирования комплекса вклю 1чения ф-циклодекстрина и Ь -3-кетостеро 4ида в количестве 2,5 л (загружено 24,5 г 6 а-метил-гидрокортизона) заливают 250 мл хлороформа (0,1-кратное количество от объема культуральной жидкости) и смесь тщательно перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, затем выдерживают без перемешивания не менее 2 ч, Выпавший осадок, содержащий смесь комплекса циклодекстрина с хлороформом и стероида с хлороформом, отфильтровывают, сушат до постоянной массы. Получают 169 г. Полученный осадок извлекают при кипячении и перемешивании 500 мл смеси хлороформ-метанол (в количестве хлороформового слоя берут хлороформ, отделенный от культуральной жидкости после фильтрации из нее осадка). Нерастворившийся циклодекстрин отфильтровывают, промывают 2 раза по 50 мл горячей смеси хлороформ-метанол, сушат при 50 С. Получают 117 г циклодекстрина (степень регенерации 90), Фильтрат, содержащий стероид, обрабатывают 6 г угля при комнатной температуре. Уголь отфильтровывают, промывают смесью хлороформ-метанол 1:1. Растворитель упаривают при атмосферном1628532 Прммеивкме Выход саот-садержаветстеущще. нмк приме. Смесь астеармтелея Растко мтель Используе саотиащвиме стероид:квэввнме кратность пии цикла де кстриив мыа сея га хь Э-кетастмЬ -3-кетостероидз, т,растворите.лея Па проекту ВФС допустмма содержвиие примесеяда 3)ь 1:20 Хлороформ.втекал(1: 1) 6 а метил.гмдрокортиХларофарм 93 О. 5 Хлороформ. иэап ролика выя спиртТо же ба метил.гмдракортм. Садержвима примесед вферма запевкам. продуктеДопускаетсл да 4опо Предкиэолок(1:1)Хл аристид метмлекьм. 92 ЬВО 0,10 Хлористыя вив Првлимэалок такал2.5 0.10 Талуал П редммэолак 93 0,10 Хлороформ Садержаимв стерамда в культурвльмая жидкости 5 г(лСодержаиме прммесеп ефврмвкопеямом продуктеие Оолее 1 1.0 О,15 Циклогексаи метаиол (1: 1) ф после проведеимк химического гмлролмза вилелеи 6 а кгетмлпредимзолок. давлении до температуры в погоне 61 )температуры кипения хлороформа) и остаточного обьема 50 мл (2-кратное по отношению к массе стероидэ). Выдерживают 2 ч при 0-5 ОС. Осадок отфильтровывают, и ромы веют охлажденным хлороформом. Сушат в шкафу при 50 С. Получают 22,4 г (93 от теоретического с учетом 96 содержания 6 МГК),П р и м е р 2, Выделение 6 а-метилпреднизолонэ из культуральной жидкости проводилось по методу примера 1 с использованием вместо хлороформа толуола, из 1 г 6 а-метилгидрокортизона получено 0,9 г 6 а-метилпреднизолона, удовлетворяющего требованиям ВФС, Содержание примесей 2. Выход 90 от теоретического.П р и м е р 3. К культуральной жидкости после проведения процесса микробиологического дегидрирования метилтестостеро,Формула изобретения 1. СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ Ь -З-КЕ-,ТОСТЕРОИДОВ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ, после микробиологическойнв (обьем культуральной жидкости 120 мл, содержание стероида 10 гй) прибавляют 12 мл циклогексэна и смесь перемешивэют в течение 2 ч при комнатной температуре, Вы павшую смесь стероида с аддуктом циклодекстрина с циклогексаном отфил ьтро вы ва ют, сушат. Получен ную смесь кипятят 30 мин с 20 мл смеси циклогексан-метанол (1:1). Нерастворившийся эд дукт циклодекстрина отфильтровывают,сушат в шкафу при 50 С. Получают 1,4 г циклодекстрина ф регенерации 90), Филь- трат упаривают в вакууме досуха. Остаток кристаллизуют из 5 мл метанола, Получают 15 0,93 гметэндростенолона, т.пл, 160-169 С,сумма примесей 1. Для получения фармакопейного продукта его перекристаллизовывают еще раз из метанола,Остальные данные приведены в табли це. трансформации в присутствии циклодекстрина, включаюарфй стадии экстракции) органическим растворителем, упаривания, фильтрации, олиюаощилк:л тем,1628532 Составитель О,СкородумоваТехред М,Моргентал Корректор Л.филь Редактор В.Трубченко Заказ 208 Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 что, с целью упрощения процесса, улучшения его экологической характеристики и повышения степени регенерации циклодекстрина, культуральную жидкость предварительно обрабатывают 0,05 0,15-кратным по отношению к ее обьему количеством хлороформа илй хлористого метилена, или толуола, или циклогексана, выпавшую смесь циклодекстрина со стероидом или его аддуктом с хлороформом отфильтровывают и экстрагируют 20-кратным к массе стероида количеством смеси указанного выше растворителя с низшим спиртом в соотношении 1: 1 при кипении, нерастворившийся циклодекстрин отфильтровывают, а из полученного фильтрата после упаривания выделяют целевой продукт.5 . 2. Способ по п.1, отличающийсятем, что выделение метилпреднизолона осуществляют с использованием хлороформа на стадии обработки культуральной жидкости.103. Способ по п.1, отличающийсятем, что выделение метандростенолона осуществляют с использованием циклогексана на стадии обработки культу ральной жидкости.