Индикаторная среда для определения оксидазной активности aerococcus viridans

(71) Днепропетровский медицин институт .(56) Кременчуцкий Г,Н. Питательная. среда 1 для обнаружения перекиси водо рода, продуцируемой микроорганизмами: Сб. Актуальные вопросы инфекционной патологии. Днепропетровск, 1983, с, 26-27.Авторское свидетельство СССР У 1253145, кл. С 12 Я 1/04, 1984. (54) ИНДИКАТОРНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕ ЛЕНИЯ ОКСИДАЗНОИ АКТИВНОСТИ фАЕВОСОС С 118 71 В 1 ЭАББ(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для идентификации бактерий Ъгососсцвчгхйепэ. Цель иэо скин ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ССС О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫ С 2 Я 1/04 // (С 12 Ц 1/С 12 В 1:01) ретения - повышение точности определения за счет стабилизации цветнойреакции. Индикаторная среда состоитиз двух слоев: первый слой - индикаторный, содержащий калий йодид, натрий селенит, крахмал и агар-агар;второй слой - ростовой, содержащийнабор минеральных солей, витамины,аминокислоты, селективные агенты,глюкозу и агар. Компоненты индйкаторной среды перемешивают в 1 л дистиллированной воды, расплавляют, стерилизуют и разливают в чашки Петри.Пос"ле застывания на индикаторный слойнаслаивают ростовой слой в количестве 10 мл, Ростовой слой готовятаналогично индикаторному. После застывания среду засеивают исследуемыми микроорганизмами. Цветную реакциюучитывают через 18-22 ч, диаметрцветной эоны 4-6 мм, срок сохраненияцветной реакции 7-14 сут. 1 табл, 135930120,0 Калий йодид Натрий селенитКрахмалрастворимьй Агар-агар 0,4 10,0 12,0 Смесь энергично перемешивают ирасплавляют, стерилизуют при 1 ат30 мин. Стерильную смесь разливаютв чашки Петри по 10 мл, Чашки Петриэкспонируют при комнатной температу Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для идентификации бактерий Аегососсггя ч:ггс 1 апя,Цель изобретения - повышение точпости определения за счет стабилизации цветной реакции.Среду готовят следующим образом,Для приготовления ростового слояв 1 л холодной воды последовательнорастворяют компоненты, смесь энергично перемешивают и расплавляют,Стерилизуют при 1 ат 30 мин. Стерильнуюсмесь разливают в чашки Петри со 15сформированным индикаторным слоемпо 10 мл. При застывании смесь фор-мирует ростовой слой синтетическойиндикаторной среды для Аегососсггяч 1 гйап,;. Смесь для ростового слоя 20может храниться в рефрижераторе втечение 4-8 нед.Для приготовления индикаторногослоя в 1 л холодной дистиллированнойводы последовательно растворяют компоненты, смесь энергично перемешивают и расплавляют, Стерилизуют при1 ат 30 мин. Стерильную смесь разливают в чашки Петри по 10 мл, При эастывании смесь формирует индикаторный ЭОслой среды. Смесь для индикаторногослоя может храниться в рефрижератореопри 4 С в течение 4-8 нед,П р и м е р 1, Для приготовленияиндикаторной среды вначале готовятсмесь для индикаторного слоя и формируют индикаторный слой разливаниемрасплавленной стерильной смеси по10 мл в чашки Петри, После застывания ипцикаторного споя на него наслаивают расплавленную, стерильнуюсмесь для ростового слоя в количестве 10 мл, После застывания ростового слоя среда готова к использованию,Дггя приготовления индикаторного 4 Бслоя в 1 л холоцной дистиллированнойводы последовательно растворяют, г:ре вплоть до полного застывания индикаторного слоя.Для приготовления ростового слоя индикаторной среды в 1 л холодной дистиллированной воды последовательно растворяют, г:Аммоний хлоридАммоний нитратНатрий сульфатКалии водородфосфатКалий диводородфосфатМагний сульфатМарганецглицерофосфатНатрий хлоридГрамуринЭтонийНикотиновая 3,0 0,6 1,4 212 0,60,06 0,312,50,0250,001 0,040,0008 кислота БиотинКаггьций панто 0,8 тенатРибозо-фосфат1 -Глутаминовая кислотаБ 1-ВалинИнозитГлюкозаАгар-агар 0,008 0,40,00050,010,0112,0 На поверхность готовой среды про изводят посев суспензии суточной культуры Аегососсггя чхгйапя (1 фгсососсия 1 гурегохуйапя) ОК 308 ч.о. из расчета 20-50 колониеобразующих еди ниц на 1 чашку со средои, Посевы ин- кубируют в термостате при 37 С, Через 18-22 ч производят учет цветной реакции среды на оксидазную активность Аегососсггя чгйапя (Цусосос.сггя Ьурегохуйапя г ОК 308 ч.о.П р и м е р 2, Среду готовят в со ответствии с примеромДля приготовления индикаторного слоя в 1 л холодной дистиллированСмесь энергично перемешивают и расплавляют, стерилизуют при 1 атв 30 мин. Стерильную смесь по 10 мл наслаивают на готовый индикаторный слой в чашках Петри. Чашки Петри экспонируют при комнатной температуре вплоть до полного застывания ростового слояной воды последовательно растворяют, г: 26,0 Калий йодидНатрийселенит 0,5 Крахмалрастворимый 15,0 Агар-агар 15,0 Для приготовления ростового слоя индикаторной среды в 1 л холодной дистиллированной воды последовательно растворяют, г; 4,0 0,6 1,6 Аммоний хлоридАммоний нитратНатрий сульфатКалий водородфосфатКалий диводородфосфатМагний сульфатМарганецглицерофосфатНатрий хлоридГрамуринНикотиновая 2,4 0,80,08 0,415,00,03 0,050,0008 кислотаБиотинКальций пантотенат 1,0Рибозо-фосфат 0,011 г.Глутаминоваякислота 0,5П Валин 0,001Инозит 0,02Глюкоза 0,02Агар-агар 13,0На поверхность готовой среды про изводят посев суспензии суточной культуры Аегососсця чгйапя (Ьусососсця Ьурегохуйапя) ОК 308 ч,о. из расчета 20-50 колониеобразующих единиц на 1 чашку со средой, Посевы ино кубируют в термостате при 37 С, Через 18-22 ч производят учет цветной реакции среды на оксидазную активность Аегососсця лгЫапя (Мусососсця Ьурегохуйаля) ОК 308 ч.о.П р и м е р 3. Среду готовят в соответствии с примером 1,Для приготовления индикаторного слоя в 1 л холодной дистиллированной воды последовательно растворяют,г:Калий йодид 32,0Натрий селенит 0,6Крахмал растворимый 20,0Агар-агар 17,0Для приготовления ростового слоя индикаторной среды в 1 л холодной дистиллированной воды последовательно растворяют Г; 5,0 1,0 1,8 Аммоний хлоридАммоний нитратНатрий сульфатКалий водородфосфатКалий диводородфосфатМагний сульфатМарганец глицерофосфатНатрий хлоридГрамуринЭтонийНикотиновая 1 О 2,6 1,0 0,1 15 0,517,50,0350,003 20 0,060,0012 кислотаБиотинКальций пантотенат 1,2Рибозо-фосфат 0,0121 г.Глутаминоваякислота 0,6ЭЬ-Валин 0,0015Инозит 0,03Глюкоза 0,03 30Агар-агар 14,0На поверхность готовой среды производят посев суспензии суточнойкультуры Аегососсця чгЫапя (Мусососсця Ьурегохуйапя) ОК 308 ч.о. израсчета 20-50 колониеобразующях единиц на 1 чашку со средой, Посевы инокубируют в термостате при 37 С, Через 18-22 ч производят учет цветнойреакции среды на осидазную активность Аегососсца чгЫапя (Мусососсца Ьурегохуйаля) ОК 308 ч.о. 25 Сравнительная хараКтеристикацветной реакции известной и предла 45 гаемой сред на оксидазную активность Аегососсця чхгЫапя (Мусососсця Ьурегохуйапя) ОК 308 ч.о. приведена в таблице,50 Использование индикаторной средыдля оценки оксидазной активностиАегососсця ч,гхйапа позволяет получить более раннюю цветную реакцию(через 8-12 ч инкубации культурывместо 24-48 ч при использовании известной среды), получить цветную ре. акцию у 85-977 выросших колонийвместо 50-60 Х при использовании известной среды, уменьшить колебаниякислота1)1 з-Валину, ГлутаминоваякислотаГлюкоза 0,4-0,6 0901 090309001-09003 Этоний Хлорид натрия Агар-агар Дистиллированная вода 12,5-17,5 12-141 л Среда Известная 11 редла- гаемая 24-48 8-12 50-60 85-97 4-6 2-3 цветной эоны вокруг кОлОнии 9 дости гающей 4-6 мм вместо 0-2 мм при использовании известной среды, удлинить срок сохранения оксидазной ре 5 акции при инкубации культур в термостате и при их хранении при комнатной температуре до 7-14 сут вместо 2-3 сут при использовании известной средыа 10 Формула изобретенияИндикаторная среда для определения оксидазной активности Аегососспз Ы.гхйапз 9 содержащая в нижнем индикаторном слое растворимый крахмал, 15 иодид калия, селенит натрия, агар- агар и дистиллированную воду, в верхнем ростовом слое - глюкозу, этоний, хлорид натрия, агар-агар, источник азота и .дистиллированную воду, о т - 20 л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения точности определения оксидазной активности за счет стабилизации цветной реакции среды, верхний ростовой слой дополнительно со держит сульфат натрия, однозамещенный Фосфат калия, двуэамещенный Фосфат калия, сульфат магния, глицероФосфат марганца, грамурин, биотин, пантотенат кальция, рибоэо-фосфат, ЗО иноэит, никотиновую кислоту, в качестве источника азота в . хлорид аммония 9 нитрат аммония, В 1-валин и 1- глутаминовую кислоту при следующем соотношении компонентов 9 г/д,:35Нижний индикаторный слой:Иодид калия 20-32Селенит натрия 0,4-0,8 Характеристика стабильностицветной реакции среды Время появления цветнойреакции, ч Количество колоний популяции испытуемого штаммас цветной зоной окраскисреды, % Диаметр зоны цветной окраскисреды вокруг колоний через24 ч инкубации, ммСрок сохранения цветнойреакции среды при температуре инкубации или комнатной температуре, сут РастворимыйкрахмалАгар-агарДистиллированная водаВерхний ростовойХлорид аммонияНитрат аммонияСульфат натрияОднозамещенный фосфаткалияДвуэамещенныйфосфат калияСульфат магнияГлицерофосфатмарганцаГрамуринБиотинПантотенат