Способ получения аубазидана

(5 р 4 С 12 Р 19/04 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) Патент СНА 9 514560, кл. С 12 Р 19/04, 1985.Авторское свидетельство СССР У 877939, кл. С 12 Р 19/04, 1980. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АУБАЗИДАНА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения полисахарида аубаэидана, который может. быть использован вфармакологии как стабилизатор суспензий и эмульсий при приготовлении лекарственных форм. Целью изобретенияявляется увеличение выхода аубаэидана и снижение его себестоимости. Способ заключается в выращивании грибаАцгеоЬазЫшп рп 11 ц 1 апз штамм 8 напитательной среде, содержащей в качестве источника углерода деминералиэованный на катионите отход производства декстрана - маточный, раствор,полученный после осаждения нативногодекстрана, который вводят в среду вконцентрации 4-57. из расчета на редуцирующие вещества. 3 табл,1 1339129 2 Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения полисахарида аубазидана, который может быть использован в фар 5 макологии как стабилизатор суспецзий и эмульсий при приготовлении лекарственных форм.Цель изобретения - увеличение выхода аубазидаца и снижение его себе стоимости.Способ заключается в следующем.Дрожжеподобцый гриб АцгеоЬая 1 ддцт рц 11 ц 1 апя штамм 8 вьращинают на питательной среде, содержащей минераль ные компоненты и источник углерода, в качестве которого используют деминерализованный на катиоците отход производства декстрана - маточный раствор, полученный после осаждения 20 нативцого декстраца. Г 1 рименение отхода производства декстрана в качестве источника углерода значительно удешевляет процесс получения аубаэидана. Водно-спиртовой маточник, полученный 25 после осаждения нативного декстрана, содержит до 3,0-4,57 фруктозы, небольшое количество цизкомолекулярного декстрана, остатки питательной среды для культивирования Еецсопояое 30 шеяеп 1 его 1 дея и продукты метаболизма этой культуры. Фруктоза и низкомолекулярньп декстран легко улитизируются АцгеоЬаяЫ 1 цш рц 11 ц 1 апя штамм 8 с образованием аубазидана. При этом продукты метаболизма Г.ецсопоябое шеяепСего 1 дея и остатки питательной среды 1,белки, органические кислоты, витамины) являются ценными источниками питания для продуцента и благотворно влияют на его жизнедеятельность. Витамины способствуют быстрому росту и размножению клеток АцгеоЪая 1.д.цш рц 11 ц 1 апя штамм 8. Продукты метаболизма - органические кислоты и амино кислоты являются дополнительным источником углеродного и азотного питания для клеток продуцента, что также способствует ускорению процесса образования аубазидана. Удачное сочета О ние органических веществ в отходе производства декстрана приближает его к естественным субстратам и является причиной повышения выхода аубазидана в данном способе.55 Получение аубазидана по предлагаемому способу начинают с приготовления питательной среды для выращивация дрожжеподобного гриба АцгеоЬая 1 дцш рц 11 ц 1 апя штамм 8,Г 1 аточцк после отгонки спирта при60-65 С и остаточном давлении (7,0-8,0) 10 Г 1 а при содержании редуцирующих веществРВ ) 8, 5-1 07. охлаждаоют до 20-25 С и деминерализуют на катионите. Операция деминерализациинеобходима, так как присутствующие вматочнике ионы ИН оказывают нега 4тивное влияние на синтез аубазидана.В результате очистки из раствораудаляются ионы ИН , а также К , Иа +,РРеи др. Полученный раствор разбавляют обессоленной водой до 57-нойконцентрации РВ, и вводят соли, являющиеся минеральной основой средыЧапека-Докса. Составленную среду подвергают стерилизации. Готовую питательную среду засевают (57, от объема)посевным материалом. Ферментацию проводят при 24-25 С в течение 84-94 ч.После охлаждения ферментационной массы до 18 С осаждают нативный аубазидан. Затем отделяют клетки продуцента от целевого продукта. Очищенныйаубазидан обезвоживают в токе азотаи отжимают на валках. Окончательно осадок высушивают горячим азотом.Данные влияния концентрации РВв среде на выход нативного и чистогоаубазидана приведены в табл.1. Как видно из табл.1, при увеличении концентрации РВ в среде выход нативного аубазидана (вместе с клетками продуцента ) повышается. В то жевремя при 7,07 РВ в среде резко увеличивается содержание клеточной биомассы, что ведет к ухудшению условийочистки целевого продукта от клетокпродуцента на стадии сепарирования.Кроме того, снижается выход полисахарида в расчете на содержащий в средеисточник углерода. Снижение концентрации РВ в среде до 37 приводит к резкому снижению выхода нативного ичистого аубазидана. Таким образом,оптимальной является концентрация РВ4-57.Использование в качестве источника углерода деминерализованного на катионите отхода производства декстрана не приводит к ухудшении свойств и потребительских характеристик аубазидана. Результаты влияния состава среды на качество аубазидана приведены в табл.2.339 29 20 Способ получения аубазидана, предусматривающий выращивание гриба АцгеоЬая 1 йцв рц 11 ц 1 апя штамм 8 в условияхаэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, до максимального накопления целевого продукта с последующим его выделением, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюувеличения выхода аубазидана и снижения его себестоимости, в качествеисточника углерода используют деминерализованный на катионите отход производства декстрана, полученный после осаждения нативного декстрана иэ культуральной жидкости Ьецсопояйое шеяепйегогйея, которьп вводят в среду в концентрации 4-57. из расчета на Редуцирующие вещества,П р и м е р. Из маточника, полученного после осаждения нативного декстрана, отгоняют этиловый спирт при 63 С и остаточном давлении 8 СЛа до содержания РВ 8,57. Упаренныйораствор охлаждают до 25 С и деминерализуют на колонне с катионитом в Н форме со скоростью подачи очищаемого раствора 6 мл/см мин. Полученный О раствор разбавляют обессоленной водой до содержания РВ, 57 с добавлением минеральных солей из расчета, г/л: МаОЗ 3 К 2 НРО 4 1 у МРВО. /Н 20 0,5 КС 1 0,5; РеБО 7 Н О 0,01. 15Затем устанавливают 2 н. раствором МаНО рН питательной среды 6,5 и стерилизируют ее 30 мин при 105 С, 200 мл приготовленной таким образом среды заливают в колбу емкостью 750 мл. Во вторую колбу помещают 200 мл питательной среды, приготовленной по описанному способу, но с чюй разницей, что не проводят ионообменную очистку отхода производства 25 декстрана. В третью и четвертую колбы заливают питательные среды, приготовленные соответственно на сахарозе и фруктозе с концентрацией источника углеродного питания в растворе 57 30Приготовленные среды засевают посевным материалом в количестве 57 (объемн. 1, выращенным на среде, содержащей в качестве источника углеродного питания сахарозу. Ферментацию З 5 АцгеоЬаядйцш рц 11 ц 1 апя штамм 8 проводят при 24 С на качалке. Продолжительность ферментации 94 ч. После охлаждения культуральной жидкости до 18 С нативный аубазидан в каждой из 40 колб осаждают этиловым спиртом при рН 6,6 в два приема: О, 05 л этанола на 0,1 л культуральной жидкости, после 15-минутного перемешивания,цополнительно загружают 0,1 л этанола на 45 0,1 л исходной массы, снова перемешивают.Отделенные декантацией осадки растворяют при 70 ОС в обессоленной воде. Клетки продуцента отделяют от це левого продукта двукратным сепарированием при 60 С. Отделенный от клеток раствор аубазидана упаривают в три раза при 70 С и остаточном вакууме 8 10- Па. Затем проводят повторное осаждение аубазидана этиловымспиртом в присутствии 17-ного хлористого натрия при рН 6,6. К полученнымосадкам после декантации добавляютравный объем спирта и проводят обезвоживание осадков перемешиванием сжатым азотом. Затем маточники сифонирунт. Осадки отжимают на валках, уст -роенных по типу фрикционной передачи,и высушивают в кипящем слое в токегорячего азота температурой 45 С втечение 1 О мин. Затем их взвешиваюти определяют выход аубазидана с 1 лкультуральной жидкости. Результатывлияния состава источника углеродана биосинтез аубазидана приведеныв табл.3. Как видно из табл.3, предлагаемый способ получения аубазидана позволяет увеличить выход целевого продукта в 1,2 раза. При этом вместо сахара в качестве источника углерода для приготовления питательной среды используется содержащий фруктозу отход производства декстрана. В результате этого обеспечивается удешевление процесса получения аубазидана, экономится значительное количество ценного пищевого продукта - сахара. Формула изобретения13391 9 Таблица Содержание биоВыход чистого аубазидана,., по отношению к Выход чисто го аубазидана, г/л массы,г/л нативно- источнику му ауба- углерода в зидану среде 3,0 4,8 8,8 4,0 54,5 16,0 4,0 6,0 6,2 12,2 50,8 15,5 5,0 15,6 7,8 7,8 50,0 15,6 1,4 7,0 17,5 9,5 8,0 45,7 1 ТаблИца 2 рН 0,1 ного Относи- тельная Питательная среда СульфатСодержание влаги,. ная зола,водногораствора вязкостьО, 1 -ноговодного раствора, сП Предлагаемая 2,2 10,5 3,1 6,5 Известная (средаЧапека-Докса с сахарозой) 3,5 11,0 3,2 7,0 Требование временной фармакопейной статьи Не более Не более Не менее 5,5-7,560 125 20 Таблица 3 Источник углерода впитательной среде Концентрация РВ в питательной среде, Х Отход производствадекстрана: деминерализованныйна КУ-8 неочищенный на катионите КУ-8 7,8 2,1 6,4 Чистая фруктоэаСахароза 6,5 Концентрация РВв среде,Х Выходнативногоаубазидана, г/л Выход ауба- зидана, г/л