Способ моделирования диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ А РЕСПУБ 5 и 4 6 09 ЫИ КОМИТЕТ СССРБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ДАРСТВЕН ЕЛАМ ИЗ ГО, 131КХ Ф; ИСАНИЕ ЕТЕНИЯ ом свид Ь К АВТ ый медиц есноков е 1.,хр(71) Саратовский государствский институт(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ДИС СЕМИНИРОВАННОГО ВНУТРИСОСУ ДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ (57) Для воспроизведения пролонгирован ного течения гиперкоагуляции эксперимен тальным животным внутримышечно однократно вводят ботулинический токсин типа С в дозе 2,2 - 2,5 мышиных 1.Р/кг массы тела. 3 табл.Через 72 ч после инъекции токсина развились параличи задних конечностей. Наблю40 45 50 55 1Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине и может быть использовано в целях выяснения механизмов динамического нарушения равновесия ком. понентов системы, регулирующей агрегатное состояние крови, а также установления возможностей фармакологической коррекции изменений тромбоцитарного и плазменно-коагуляционного гемостаза в условиях патологии инфекционной природы.Цель изобретения - воспроизведение пролонгированного течения гиперкоагуляции за счет того, что экспериментальным животным внутримышечно вводят однократно ботулинический токсин типа С в дозе 2,2 - 2,5 мышиных Ю 50/кг массы тела.Пример 1. У контрольной крысы массой 220 г показатели системы гемостаза харак теризовались следующими показателями: время свертывания крови 120 с, силиконовое время свертывания крови 120 с. индекс диапазона контактной активации 33,33 О/О, антитромбин 111 - 14 с, гепарин 4 ед.Опытной крысе массой 230 г внутримышечно вводят однократно в икроножные мышцы обеих задних конечностей ботулинический токсин типа С в дозе 2,2 мышиных Ж 50/кг массы тела.Через 1 ч после введения ботулинического токсина при отсутствии клинических проявлений интоксикации в показателях системы гемостаза произошли следующие изменения: время свертывания крови 90 с, силиконовое время свертывания крови 90 с, индекс диапазона контактной активации 0%, антитромбин 111 - 10 с, гепарин 3 ед. даются следующие изменения в показателях системы гемостаза: время свертывания крови 240 с, силиконовое время свертывания крови 480 с, индекс диапазона контактной активации 50 О/О, антитромбин 111 - 33 с, гепарин 9 ед.Таким образом, через 1 ч после введения экзотоксина у экспериментального животного развилась гиперкоагуляционная фаза диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС-синдрома)., связанная с усилением контактной и фосфолипидной активации процесса свертывания крови, а через 3 сут - гипокоагуляционная фаза с возникновением дефицита плазменных факторов свертывания крови.Пример 2. У контрольной крысы массой 220 г определяют наличие в крови комплексов фибрин-мономера с продуктами деградации фибриногена и состояние системы фибринолиза: этаноловый тест отрицательный, протамин - сульфатный тест отрицательный, фибриноген Б отрицательный, суммарная фибринолитическая активность крови 113 мм, плазминовая активность 60 мм,5 10 15 20 25 30 2активаторы плазминогена 53 мм , антиплазминовая активность 158 мм.Опытной крысе массой 200 г однократно внутримышечно вводят в икроножные мышцы обеих задних конечностей ботулинический токсин типа С в дозе 2,5 мышиных Ю 50 кг массы тела.Через 1 ч после введения ботулинического токсина при отсутствии клинических проявлений интоксикации определение продуктов паракоагуляции и показателей системы фибринолиза дало следующие результаты: этаноловый тест положительный, протамин - сульфатный тест положительный, фибриноген Б положительный, суммарная фибринолитическая активность 141 мм, плазминовая активность 86 мм, активаторы плазминогена 55 мм, антиплазминовая активность 108 мм. Через 72 ч после инъекции токсина развились параличи задних конечностей. Определение продуктов паракоагуляции и показателей системы фибринолиза дало следующие результаты: этаноловый тест положительный, протамин-сульфатный тест положительный, фибриноген Б положительный, суммарная фибринолитическая активность 154 мм, плазминовая активность 78 мм, активаторы плазминогена 76 мм, антиплазминовая активность 99 мм.Таким образом, через 1 ч и в течение 3 сут после инъекции животному ботулинического экзотоксина в крови отмечается появление комплексов фибрин-мономера с продуктами деградации фибриногена, усиливается фибринолитическая активность крови, обусловленная повышением активности плазмина и активаторов плазминогена и снижением антиплазминовой активности, характерных для ДВС-синдрома.В табл. 1 приведены показатели коагуляционного гемостаза в динамике ботулинической типа С интоксикации у белых крыс. В табл. 2 приведены показатели, характеризующие появления комплексов фибрин-моно- мера с продуктами деградации фибриногена у белых крыс в динамике ботулинической интоксикации ( /о положительных проб). В табл. 3 приведены показатели фибринолитической системы крови в динамике ботулинической типа С интоксикации у белых крыс.В табл. 1 и 3 р - рассчитано к контролю, в каждой серии опытов использовано в среднем по 15 животных.В табл. 1 - 3 приводятся сравнительные данные, подтверждающие, что в течение 1 - 1,5 ч после инъекции ботулинического токсина в дозах 2,2 - 2,5 Ю 50/кг развивается начальная фаза (гиперкоагуляция) диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, в течение которой происходит контактная и фосфолипидная активация фак.1336088 Формула изобретения Таблица 1 Сроки развития ботулинической интоксикации, ч , после введениятоксина 11 оказатели Контроль 1 го 72 24 1 - 1,5 М+м Мм М+м М+м М+м М+м Времясвертывания крови мин 0,29О,ОО 1 5,53р 4,0 0,32 р 0,001 О,14 О,О 1 з,ор З,О О,10,15 О,О 1 крови Индекс диапазонаконтактной активации,40,01 Р ( 2,83 0,05 41,67 Р ( 4,77 0,05 43,3 р ( 30,2 3,09 7,56 4,065,27 Р ( о,г 1 0,05 0,19 о,ог 4,2 0,17 3,47Р ( Гепарин,ед -мл 3торов свертывания крови (статистически достоверное укорочение индекса диапазона контактной активации), что приводит к статистически достоверному укорочению как обычного, так и силиконового времени свертывания крови; угнетается антикоагулянтная активность крови (статистически достоверное падение активности антитромбина Ш, суммарной антитромбиновой активности, уровня гепарина в крови), усиливается фибринолиз (статически достоверное возраста ние суммарной фибринолитической активности, связанное со статистически достоверным усилением активности протеолитического фермента плазмина и статистически достоверным снижением антиплазминовой активности), что приводит к появлению в крови комплексов фибрин-мономера с продуктами деградации фибриногена (положительные этаноловый и протамин-сульфатный тесты, появление в крови фибриногена Б).При моделировании диссеминированного 20 внутрисосудистого свертывания крови ботулиническим типа С токсином получают длительную начальную фазу - гиперкоагуляцию, особенности течения и развития которой предопределяет вторую - гипокоагуляционную - фазу ДВС-синдрома. 4В известном способе, где токсин вводят внутривенно, происходит быстрая активация системы гемостаза и, как следствие этого, выпадение первой фазы синдрома - гиперкоагуляционной - или длится она в течение нескольких минут, что делает невозможным выявление эффективных методов терапии ДВС-синдрома, осложняющего течение многих заболеваний. В предлагаемом способе гиперкоагуляционная фаза длится 1 - 1,5 ч, что позволяет использовать модель в целях разработки эффективных принципов фармакологической коррекции пусковых механизмов нарушения коагуляционного гемостаза и фибринолиза. Способ моделирования диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови путем введения токсина, отличающийся тем, что, с целью воспроизведения пролонгированного течения гиперкоагуляции, в качестве токсина вводят в мышцу ботулинический токсин типа С в дозе 2,2 - 2,5 мышиных Ж 50(кг массы тела.=15 Этаноловыйтест 63,77,8 7 60 Гротамин-сульфатный тест 63,2 О,00,100,0 100,0,0 бриног аблица Показатели Контроль- 1,5 6 24 н+м 1+м 1 м 1+м 1+м. ПознякКорректор В. ГирнякПодписное о делам изобретений и открытийская наб д. 4/5ие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Суммарна Фибринол тическая активность,мм онтролт Сроки развития ботулинической интокс кации, ч, после введения токсина Сроки развития ботулинической интоксикации,ч,после введения токси,3 1,07 141,2 2,27 91,45 12,21 227,65 10,67 156,39 3,53 146,69 4,3 р 0,001 р (0,001 р0,001 р 1 0,001 р0,00 СоставительРедактор Н. Бобкова Техред И. ВереЗаказ 3807/48 Тираж 433ВНИИПИ Государственного комитета СССР п113035, Москва, Ж - 35, РаушПроизводственно-полиграфическое предприят