Способ определения стрессового состояния животного

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ЕТЕНИ У рственный медицин В. Малыше р. 1981, с. 366.ндации по опредеразвития стрессов инофильного теста. ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ИСАНИЕ ИЗ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(71) Иркутский госудаский институт(56) Эндор фи н ы, М.: ММетодические рекомлению возникновения иу поросят с помошью эоДубровицы, 1978. 801329719 А 1(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРЕССОВОГО СОСТОЯНИЯ ЖИВОТНОГО (57) Изобретение относится к области биологии, медицины и ветеринарии. Цель изобретения - повышение точности определения путем учета иммунологического состояния животного и сокращение времени определения. Способ определения стрессового состояния животного включает создание стрессовой ситуации и исследование периферической крови. Из периферической крови выделяют фракцию лимфоцитов, определяют их электрофоретическую подвижность, устанавливают соотношение низкоэлектрофоретически подвижных клеток (НЭП) к высокоэлектрофоретически подвижным клеткам (ВЭП) и при значениях соотношения НЭП/ВЭП ниже нормы определяют нахождение животного в состоянии стресса. 1 ил.3 табл.Изобретение относится к области биологии,медицины и ветеринарии, а именно к физиолонии, и может быть использовано для определения реактивности организма на стрессорную ситуацию.Целью изобретения является повышение точности определения стрессового состояния ж и нотного.Характеристикой стрессового состояния организма является уменьшение соотноше. ния низкоэлектрофоретически подвижных ( НЭП, и высокоэлектрофоретически подвижных (ВЭГ 1) клеток по сравнению с нормой, характерной для данного вида животных.Определение соотношения НЭП/ВЭП проводят с гомощьк электрофоретического микнскггг 11 грхоквант 2) в автоматическм режиме, что нзволяет быстро и точно охарактеризовать илчунглогическое состояние организма животного, являющегося важным показателем его физиологического состояния в целом.На чертеже приведены гистограммы распределения популяции лимфоцитов крыс по ЭГ 1 в норме (А) и при иммобилизационном стрессе (Б, В).Пример. Для проведения эксперимента исгггь,укт две группы лабораторных животных: белые беспородные крысы - самцы (20 жвиотных) весом 200 210 г и кролики - самцы (43 животных) весом 3 - 3,5 кг. 11 осле недельной выдержки в условиях вивария часть животных используют в качестве контроля, а другую часть подвергают иммоби.изционноху стрессу - кроликов 60-ми. путному, крыс - 6-часовому (фиксация на спине). После стресса у кроликов из ушной вены забирают 3 мл. крови, а у крыс забор крови проводят декапитацией. Таким же образом забирают кровь и у контрольных животных Выделение лимфоцитов проводят на градиенте плотности фиколл-верографина (1= 1,077 -1,078), ЭП полученной взвеси определяют с помопгью электрофоретического измерительного микроскопа Пармоква нт - 2 в автоматическом режиме.Получс нные гистограммы распределения ЭП характеризуются наличием двух ников (обьем популяций лимфоцитов). Шаг прибора 0,05 10 "м с В . Распределение по возрастаюгцей ЭП соответствует В- и Т-лимфоцитам. Т.лимфоциты находятся во фракциях с высокой ЭП (ВЭГ 1), а В-клетки - во фракции с низкой ЭП (НЭП). Разделение гистограмм на две области ВЭП и НЭП - при стрессе и в контроле в трехкратном повторении опытов дает идентичные результа ты для бонх видов животных: наблюдается явное снижение соотношения объема популяций НЭП/ВЭП лимфоцитов.На чертеже показано характерное изме. нение гистограмм ЭГ 1 лимфоцитов перифе рической крови в контроле и после дейст 1 О В табл.приведены результаты опыта.Для подтверждения стрессового состояния у животного одновременно проводят опре деление содержания кортикостерона в плазме крови кроликов и в плазме и надпочеч никах у крыс.В табл. 2 приведено влияние иммобилизационного стресса на содержание кортикостерона в плазме крови и надпочечниках животных. 50 20 25 30 35 40 45 вия иммобилизационного стресса, где А - гистограмма, характерная для нормального состояния животного. В пределах ЭГ 1 от 0,75 до 1,00 (первый пик) находятся клетки типа В-лимфоцитов, в пределах от 1,00 до 1,65 - Т-лимфоцитов; на гистограммах Б и В клетки с подвижностью до 1,00 либо отсутствуют, либо их очень мало, что трактуется как снижение относительного содержания лимфоцитов с НЭП. При расчете доверительного интервала в пределах +.1 о, характеризующего границы нормы, установлено, что границы нормы для крыс (средние данные из трех опытов, п=30) соответствуют; ВЭП - 90,0+. 0,7 (86,2 93,8); НЭП - -0,5+ 0,5 (13,2 - 7,8); НЭП/ВЭП - О, +- 0,001 (0,12 -О,0); для кроликов НЭП 21,3+. 0,7 (25, - -17,5); ВЭП 79,1+. 0,8 (83,4 - 74,7); НЭП/ВЭП0,26+. 0,001 (0,25 -0,27).Как видно из данных табл. 2, снижение 11 ЭГ 1/ВЭ 11 коррелирх кт с швыпением кортикостерона в крови и надпочечниках как у кроликов, так и у крыс. 11 овышение АКТГ в крови и надпочечниках, как известно, является признаком стрессиндрома.В способе-прототипе используют стресс отъема поросят от матки в 26-дневном возрасте, в течение которого содержание эози. нофилов снижается в среднем на 34 О.В табл. 3 представлено изменение содержания эозинофилов в 1 мм крови поросят (п= 44). Достоверные результаты получены в первые сутки после стресса при (=3,6 и п= 44.Как показали исследования, соотношение НЭП/ ВЭП для кроликов достоверно снижается на 60%, для крыс на 755/ при 1= 5,91 и 5,90 соответственно и и= 22 и 10. Точность получаемых результатов увеличивается с увеличением числа клеток, у которых измеряется электрофоретическая подвижность, так как более четко происходит разделение лимфоцитов на субпопуляции формула изобретенияСпособ определения стрессового состояния животного, включающий исследование периферической крови с последующей оценкой результата, отлицающийея тем, что, с целью повышения точности определения, из периферической крови выделяют фра кцик л и мфоцитов, определяют их электрофоретическую1329719 форетически подвижным клеткам и при егозначении ниже нормы определяют стрессовое состояние животного. подвижность, а оценку результатов прово. дят по соотношению низкоэлектрофоретически подвижных клеток к высокоэлектро. Таблица 1 Влияние иммобилизационного стресса на соотношение НЭП/ВЭП лимфоцитов у кроликов (п=22) и крыс (п=10;М+щ)1Тип клеток по ЭП Контроль Кролики 10,9 + 2,0 4)38 90,3 + 2,0 3,68 0,12 + 0,02 5,91 0,3 + 0,03 Крысы 5,32 2,6+ 1,097,8 + 1,5 0,027 + 0,01 3,19 5,90 Таблица 2 Содержание кортикостерона,мкг/100 гОбъект исследования Контроль Опыт Крысы132971 9 Изменение по М+тп Время иссравнению спериодом доотъема, 7,следований, дни 368 + 14 До отъема 24,5 - 41,0 - 42,128,3 3,6 6,8 6,7 3,4 5,4 2,2 о Ф г 7 а Р б рее Редактор Л. ВеселовскаяЗаказ 3506/5НИИПИ Государственного13035, МосквПроизводственно.полиграфи После отъема 278 + 20 217 + 17 213 + 18 264 + 27 348 + 29 360 + 26 Таблица 3( 0,001 ( 0,001 ( 0,001О, 001 Составитель И. ТТехред И. ВересТираж 627омитета СССР по делЖ - 35, Раушскаяеское предприятие, г Корректор Г. Решетни Подписноеам изобретений и открытий наб., д. 4/5Ужгород, ул. Проектная, 4