Способ приготовления гистологических препаратов для микроскопических исследований

(51) 4 С 01 И 1/30 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТ довог еский Микросконаука, НИЯ ГИСТОЛОИИКРОС КОПИся к гисто новременукт ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНЯТИЙ К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Калининский ордена ТрКрасного Знамени политехниинститут(56) Левинсон Л.Б. и др.пическая техника. Советска1957, с. 349-350,(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ(57) Изобретение относигии. Цель иэобретения -ное окрашивание всех ст ЯО 12 4040 А 1 элементов среза, включая нервы, Исследуемый материал помещают в формалин. Промывают биоптат в проточной во.де, споласкивают в дистиллированнойводе. Затем готовят срезы и помещаютих в чашку со свежей дистиллированнойводой. Готовят раствор красителя Гимэа-Романовского при следующем соотношении компонентов (мас.Е): 96 -ныйэтиловый спирт 0,4-0,8, красительГимза-Романовского 4-11, воДа остальное. Спирт и краситель Гимэа-Романовского вводят в воду каплями. В этотраствор помещают срезы на 1-72 ч. После этого срезы промывают водопровод-.ной водой, споласкивают. Помещаютсрез на предметное стекло, обсушивают и заключают в глицерин.30 Затем срезы извлекают, промывают в водопроводной воде до исчезновения синего окрашивания воды, споласкивают в дистиллированной воде,. помещают на предметное стекло, расправляют, обсушивают бумажным фильтром и заключают в глицерин или другую среду традиционным способом, При исследовании окрашенного гистологического препарата отчетливо выявляются поперечно-полосатые мышечные волокна сосуды, клеточные и неклеточные элементы тканей и нервы.П р и м е р 1. Проводится гистологический анализ фрагмента органа подлежащего оперативному вмешательст ву, Биоптат фиксируют в 10-127-ном нейтральном формалине 1 сут, промы 50 Изобретение относится к биологиии медицине, а именно к гистологии,эмбриологии, патанатомии, и можетбыть использовано для выявления структурных компонентов органов, тканей, 5Цель изобретения - одновременноеокрашивание всех структурных элементов среза, включая нервы,Способ осуществляется следующимобразом. 1 ОБерут исследуемый материал, помещают в 10-123-ный нейтральный формалин на 1-3 сут и более, так как срокхранения в фиксаторе не ограничен.Промывают биоптат в проточной воде 15комнатной температуры 1-6 ч, споласкивают в. дистиллированной воде. Назамораживающем микротоме готовятсрезы толщиной 10-50 мкм и помещаютв чашку со свежей дистиллированной 20водой.Когда все срезы подготовлены исобраны в чашке с водой, их переносятв свежеприготовленный водно-спиртоовой раствор красителя Гимза-Романовоского при следующем соотношении компонентов, мас.Ж:96 градусный этиловыйспирт 0,4 - 0,8Краситель ГимзаРомановского 4-11Вода ОстальноеПричем, и спирт, и краситель Гимза-Романовского вводят в воду каплями а35Помещенные срезы оставляют в красителе на 1-72 ч в зависимости от поставленной цели и характера объекта,например при окраске плотных срезових помещают на 48-72 ч.40вают в водопроводной воде 4 ч, споласкивают в дистиллированной воде,готовят срезы толщиной 10-50 мкмна замораживающем микротоме, переносят срезы в чашку со свежей дистиллированной водой на время подготовкивсех срезов, подлежащих окраске. Готовят водно-спиртовой раствор красителя Гимза-Романовского при следующем соотношении компонентов, мас.Е:96 градусный этиловыйспирт 0,4Краситель ГимзаРомановского 4Вода ОстальноеВ приготовленный раствор помещают срезы на 48 ч. Затем срезы промывают водопроводной водой до исчезновения синего окрашивания воды, споласкивают дистиллированной водой,помещают срез на предметное стекло,обсушивают бумажным фильтром, заключают в глицерин,Заключение: данный фрагмент органанеудачно выбран для оперативного вмешательства в связи с тем, что здесьпроходят крупные нервы, окрашенные вфиолетовый цвет, артерии, встречается множество сосудов микроциркуляторного русла, стенки которых чрезвычайно тонки, эритроциты окрашены в желтоватый или розовый цвет; цвет межклеточного вещества изменяется от голубо.го до синего. Необходимо изменить зону оперативного вмешательства.П р и м е р 2, Окраску подготов" ленных ранее см. пример 1) срезов ведут в водно-спиртовом растворе красителя Гимза-Романовского при следующем соотношении компонентов, мас.Й:96-градусный этиловыйспирт 0,4Краситель ГимэаРомановского 7Вода ОстальноеВ приготовленный раствор помещают срезы на,1-48 ч, а затем их промывают до исчезновения синего окрашивания промывочной воды и проводят все подготовительные операции для заключения окрашенных срезов в глицерин или другую среду.Заключение: данный фрагмент органа неудачно выбран для оперативного вмешательства в связи с тем, что видны артерия и ветвящийся нерв, Базальная мембрана артерии голубо1264040 7Остальное ватая, мышечные клетки ее стенкиголубые с синим ядром. Тучные клетки,связанные с артерией и нервом, окрашены в фиолетовый цвет. Межклеточное.вещество серо-синее или розовое.Гистологический анализ подтверждает: необходимо изменить зону оперативного вмешательства,П р и м е р 3. Окраску подготовленных ранее (см. пример 1) срезовведут в водно-спиртовом растворе краситепя Гимза-Романовского, при следующем составе компонентов, мас.:96-градусный этиловыйспирт 0,8Краситель ГимэаРомановскогоВода В приготовленный водно-спиртовой раствор красителя помещают срезы на 1-48 ч, затем их промывают до исчезновения синего окрашивания промы" вочной воды. Далее ведут все подготовительные операции для заключения окрашенных срезов в глицерин или ночгую среду.При микроскопировании срезов отчетливо видны нервы, окрашенные в фиолетовый цвет, сосуды, клеточныеЗО и неклеточные элементы тканей. 4срез на предметное стекло, расправляют, обсушив его бумажным фильтром, заключают в глицерин или другую среду.При микроскопическом изучении срезов установлены реактивные изменения нервов, сосудов и соединительных элементов. Заключение: используемые параметры воздействия вызывают адаптационно- трофические изменения в составе тканей и органа. При окраске в течение 24 ч видны нервы без признаков деструктивных изменений, окрашенные в темно-фиолетовый цвет; сосуд (артериола), клетки мьппечной оболочки голубоватые со светло-синим ядром; активные клетки с признаками дегрануляции. Их цитоплазма интенсивно окрашена в фиолетовый и темно-красный цвет. Межклеточное вещество голубовато- серое. При окраске в течение 72 ч виден нерв; полнокровная венула и форменные элементы крови в ней; артериола с уплотненной базальной мембраной, тучные клетки с признаками дегрануляции; межклеточное зещество с извитыми коллагеновыми волок П р и м е р 4. При вскрытии кошки через 40 мин после воздействия лазерным излучением или электрическим током берут образец (язык, кожа, подкожные мышцы и т.д.) фиксируют в 10-122-ном нейтральном формалине 3 сут, промывают образцы 3 ч в проточной воде, споласкивают в дистиллированной воде. Готовят на замораживающем микротоме срезы толщиной 15-50 мкм и переносят 50-70 срезов в чашку Петри с чистой дистиллированной водой, а затем - на 42 ч в сосуд со свежеприготовленнык водно- .спиртовым раствором красителя ГимзаРомановского при следующем соотношении компонентов, мас.й:9 б-градусный этиловыйспирт 0,79 Краситель ГимзаРомановского 11 Вода Остальное Далее окрашенные срезы промывают в водопроводной воде до исчезновения синего скрашивания промывочной воды и споласкивают в дистиллированной воде. Помещают окрашенный40 Использование предлагаемого спосо-. ба приготовления гистологических препаратов для микроскопических исследований позволяет обеспечить 1007-ное выявление нервов по сравнению со всеми известными способами приготовления гистологических препаратов для микроскопических исследований с выявлением всех структурных элементов ткани. нами.Нерв окрашен в фиолетовый цвет, Базальные мембраны сосудов темно- фиолетовые или синие. Тучные клетки имеют разные оттенки и цвета в зависимости от их использования. Встречаются темно-фиолетовые, сиреневые, темно-красные,. Эритроциты крови розовые или желтоватые, ядра лейкоцитов голубые, зернистость специфическая. Гладкомышечные клетки артериолы голубые со светлым синим ядром. Ядра соединительных клеток голубые. Межклеточное вещество от бледно-голубого до интенсивного синего, встречаются участки межклеточного вещест" ва, окрашенного в розовый цвет.12 б 4040 Составитель А. Рыбина Техред М.Ходанич КорректорМ. Максимишинец Редактор Н, Киштулинец Заказ 5552/42 Тираж 778 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Н, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Формула изобретения Способ приготовления гистологических препаратов для микроскопических исследований путем фиксации ткани в формалине, изготовления замороженных срезов с последующим их окрашиванием и промывкой, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью одновременного окрашивания всех структурных элементов 10 ткани, включая нервы, окраску проводят в течение 1-72 ч в растворе,содержащем этиловый спирт, краситель Гимза-Романовского, воду при следующем соотношении компонентов, мас.7.:96-градусный этиловыйспирт 0,4-0,8Краситель ГимзаРомановского 4-11Вода Остальное