Способ получения желудочного сока

СОЮЗ СОВЕТСКИХОИИИЮЗМИВтРЕСПУБЛИК зарю А 61 К 31/75 ТЕНИЯ ОЧ убки в сока,м, что,обеспе 32.Соколоваственный ме е и сока, ч яу, 945,аю улоч- . молселек 1ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЮ ОПИСАНИЕ ИЗОн втнсновМ саапввст(71) Витебский госудацинский институт(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯНОГО СОКА путем введенияполость желудка и выведенио т л и ч а ю щ и й с яс целью упрощения способачения чистоты желудочногореэ трубку вводят мелкопосефадекс или молселект, выв желудке, иэвлекают егока, после чего отделяют жный сок от сефадекса ипи1 111Изобретение относится к способам сбора биологических жидкостей, трудной доступных для получения обычными способами, в частности к способам получения пищеварительных соков у мелких животных, и может быть использовано в космической биологии при изучении секреторной функции желез желудочно-кишечного тракта, в ветеринарии. исследовании секреторной функции желудка у мелких животных, в формации при проведении биологической стандартизации выпускаемых фармацевтической проьввпленностью веществ, действуиицих на секреторную функцию желудка, в токсикологии, например, при оценке действия на секрецию пищеварительного сока ннсектицидов и других ядохимикатов, используемых в сельском хозяйстве, при выполнении научно-исследовательских работ в различных областяхбиохимии, физиологии, патофизиологии, фармакологии ), где необходимо получать из желудка мелких животных пищеварительный сок.Известны способы получения пищеварительного сока из желудка мелких животных, которые рассчитаны на сбор пищеварительного сока в полости желудка способ Шея ). При этом создают условия, которые затрудняют эвакуацию пищеварительного сока из желудка в кишечник. Таким образом добиваются накопления сока в полости желудка. Для этого пилорус или двенадцатиперстную кишку перевязывают лигатурой, которая сдавливает просвет желудочно-кишечного тракта и тем самым предотвращает эвакуацию содержимого желудка в кишечник, Через определенное время после наложения хирургическим путем лигатуры сок, скопившийся в полости желудка, извлекают и подвергают исследованию 13.Недостатками известных способов является то, что животным вводят наркотические вещества и подвергают хирургической операции(разрезают кожу, подкожную клетчатку, мышцы вентральной стенки живота и т.д.), через разрез в стенке живота извлекают из брюшной полости животного желудок и начальный конец двенадцатиперстной кишки. Кроме того, накладывают лигатуру на границе пилоруса и двенадцатиперстной кишки, что неиз 045 Э 5 10 15 2025 30 35 40.5055 бежно травмирует стенку пищеварительного канала, нарушает кровоснабжение и иннервацию желудка. При этом сбор сока ведут в силу необходимости в раннем послеоперационном периоде, когда животные еще находятся под воздействием остаточных количеств наркотического вещества и испытыва- ют боли, связанные с травмой тканей стенки живота и сдавливанием стенки желудка и двенадцатиперстной кишки наложенной лигатурой.Все это искажает работу нейрогуморальных механизмов, регулирующих секрецию пищеварительного сока, вследствие чего меняется характер секции сока и его состав.Эти искажения у некоторых живот- . ных настолько велики, что получить пищеварительный сок таким путем иногда вообще не удается.Целью изобретения является упрощение способа и обеспечение чистоты желудочного сока.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения, желудочного сока путем введения трубки в полость желудка и выведения сока, через трубку вводят мелкопористый сефадекс или молселект, выдерживают в желудке, извлекают его из желудка, после чего отделяют желудочный сок от сефадекса или молселект а.П р и м е р 1. Получение пищеварительного сока из желудка мыши и определение его протеолитической активности.Для введения сефадекса в полость желудка мыши использовапи прозрачную хлорвиниловую трубочку с внешним диаметром 2,5 мм, внутренним 2 мми длиной 120 мм. Один конец этой трубочки срезали под углом 45. Трубочку заполняли сефадексом Г, оставив свободным 10 мм со стороны срезанного конца.Мышь весом 20 г положили на спину,удерживая ее за складку кожи на голове и хвост,Через пищевод в полость желудка ввели срезанный конец трубочки, предварительно заполненной сефадексом.Свободный конец трубочки состыковали со шприцем емкостью 1 мл, с помощью которого порошок сефадекса, находящийся в трубоке, осторожно протолкнули в полость желудка, после чего мышь поместили в обычную клетку.Для определения протеолитической активности из влеченного сока е го пр едварительно развели в 40 раз. При этом к смеси, содержащей сок, сефадекс и воду, добавили еще такое количество воды, которое необходимо для того, чтобы в итоге получить указанное разведение сока.После тщательного перемешивания сефадекс отделили центрифугированием, а надосадочную жидкость, которая и представляла собой извлеченный из 50 55 Через 2,5 ч из полости желудка извлекали образовавшийся гель сефадекса, содержащий выделившийся за этовремя пищеварительный сок,Гель поместили в мерную пробиркуи добавили 2 мп воды У. Послетщательного перемешивания извлеченного геля с добавленной водой смесьоставили отстаиваться на 15 мин.После отстаивания измерили объемобразовавшегося геля сефадексоми объем надосадочной жидкости. Приэтом оказалось, что гель сефадексазанимает объем 0,5 мп У ), а слойнадосадочной жидкости занимает объемУ) 1,7 мп, Для определенияУ и Уз, т,е. объема жидкостиУ),который поглощается 1 г сухого сефадекса используемой марки при набухании 2,5 ч и последующего отстаивания 15 мин, и объема геля (У р)который образуется из 1 г сухого сефадекса, проделали следуюший опыт.1 г сухого сефадекса той же марки,которая использовалась и для получения сока, смешали с избытком 0,1 чраствора НС 1 и через 2,5 ч набухания взвесь тщательно перемешали.После этого взвесь оставили отстаиваться 15 мин, т.е. на время, в течение которого отстаивалась и взвесьсефадекса, извлеченного из полостижелудка. При этом оказалось, что1 г использовавшегося сефадекса после набухания в течение 2,5 ч при наличии достаточного количества жидкости и последующего отстаивания 1515 мин поглощает 10,8 мп жидкости( У), а образующийся при этом гельзанимает объем 11,4 мл (У).Пользуясь формулой, определили,что из полости желудка, мыши извлеклиУ 1 У 2 05 10,8-- /уУ / ь уУ11 4/2 - 1,7/ = 0,17 мп. 101525303540 желудка мыши пищеварительный сок,разведенный в 40 раз, использовалидля определения протеолитическойактивности по Ансену. При этом 0,1 млнадосадочной жидкости добавили к0,9 мл цитратного буфера с рН 1,7,затем к этой смеси добавили 1 мп.раствора гемоглобина и смесь инкубировали в ультратермостате при37 С 1 ч. После этого к инкубационной смеси добавляли 2 мп 57.-ногораствора ТХУ и через 15 мин содержимое пробирок профильтровали.Фильтрат спектрофотометрировалипри 280 нм против контроля. Протеолитическую активность выражали вЕ 28 оТаким образом, предлагаемымспособом из желудка мыши получили017 мл пищеварительного сока, выделившегося за 2,5 ч., и определилиего протеолитическую активность,которая оказалась равной 0,28П р и м е р 2. Получение пищеварительного сока из желудка крысы и определение его протеолитической активности, рН и титрационнойкислотности,Для введения сефадекса в полостьжелудка крысы использовали прозрачную хлорвиниловую трубочку с внутренним диаметром 2,5 мм, наружным 3 мми длиной 250 мм.Эту трубочку заполнили сефадексом Г, который ввели крысе весом150 г в полость желудка. Крысупосле введения сефадекса содержалив обычной клетке.Через 2,5 ч из полости желудкаизвлекли образовавшийся гель;Опустив электроды рН-метра прямов этот гель, определили рН. 1,предварительно убедились в том, что добавление сефадекса к.пищеварительному соку рН последнего не меняет).рН геля и, следовательно, извлеченного сока = 1,55 Затем гель поместили в мерную пробирку и добавили к нему 4 мп воды, смесь тщательно перемешали и затем оставили отстаиваться 15 мин.Таким образом нашли, что У = 4 э 8 мпь У 2 = 10 в 8 мпэ Уз = 1 э 4 мпэ У = 4,8 мп, У = 2,3 мл, и следовательно, что из полости желудка крысы извлеклиУ 1 У 2 48108-- /у /у4 5 11,41110453- /4 - 2,3/ = 2,85 мп пищеварительного сока. Составитель С.ВоробьевТехредЖ,Кастелевич Корректор Г.Решетняк Редактор Т.Митейко Заказ 6214/4 Тираж 687 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 Этот сок развели в 40 раз и центрифугированием отделили сефадекс. 5 Надосадочную жидкость использовали для определения протеолитической активности извлеченного сока и его титрационной кислотности.Протеологическую активность определяли по Ансону так же, как и в предыдущем примере,а титрационную кислотность путем титрования раствором йаОН,используя в качестве индикаторов фенолфталеин, диметиламнноазобензол и апизаринсульфоновокислый натрий, что позволило оценить общую кислотность, содержание свободной и связанной НС 1.Таким образом, из желудка крысы получили 2,85 мп, пищеварительного сока, выделившегося за 2,5 ч, рН которого оказапся равным 1,55 и который имел протеолитическую активность 0.,6 в Е ) , общую кислотность 79 выраженную в мп 0,1 раствора МаОН на 100 мп сока ), свободную НС 0,0967 и связанную НС 1 0,723.