Способ выращивания растений томатов

(5 р А 01 Н 3/00Е ИЗОБРЕТЕНИЙСВИДЕТЕЛЬСТВУ ОПИСА АВТОРСК едо ени льство СССРО, 1979.ые культуры"Колос",(54)(57) 1. СПОС ТЕНИЙ ТОМАТОВ 1 Б получение экспла из них первичног рование его в ср ,в условиях, спос ванию стеблевых доращивание полу ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Отдел генетики рас(56) 1, Авторское свидетР 721035, кл, А 01 Н 3/2. Тканевые и клеточв селекции растений. М1979, с. 14-23,Б ВЫРАЩИВАНИЯ РАСЧ 1 ТВО, включающий татов, выращивание каллуса, культивиде для регенерации бствующих образо- очек и проростков, енных стеблевых почек на среде с уменьшенным вдвоесодержанием макросолей без гормонови последующую высадку в грунт,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью ускорения процесса выращивания и увеличения выхода растений,эксплантаты культивируют непосредственно на среде для регенерации,при этом культивирование проводятпервые 7-10 сут в темноте.2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с .я тем, что в качестве эксплантата используют листья проростков.3. Способ по и. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что среда для регенерации представляет собой модифи-. цированную среду Мурасиге и Скуга,которая содержит кинетина 4 мг/л,а ннлолнлуксуснон аслоты 0,4 мг/лизобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции и семеноводстве растений, в частности селекции томатов, в исследованиях по генетике: фитопатологии и физиологии растений.Известен способ размножения на искусственной питательной среде клевера, согласно которому в качестве исходного материала используют листочки растений с надрезами,по всей плоскости листовой пластинки, которые 2-3 недели инкубируют наагаризованной питательной среде Гамборга В с добавлением нитрата аммония, 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (8-16 мг/л), кинетина (6-10 мг/л) и нафтилуксусной кислоты (0,1-0,5 мг/л) .при непрерывном освещении люминесцентными лампами с .последующей пересадкой на ту же питательную среду, но без нитрата аммония, в которой вышеназванных три гормона заменены одним бензиламинонурином (0,2-0,8 мг/л), На этой . среде они культивируются в тех же условиях в течение двух-четырех недель до появления зеленых стебле.вых почек и проростков., которые . переносят на агаризованную среду гамборга В 5, разбавленную вдвоебез гормонов (.13Известен способ размножения на искусственных питательных средах растений культурных и диких видовтоматов, согласно которому отрезкисемядолей, листьев и стеблей стерильных проростков томатов дляполучения первичного каллуса высаживают на среду Мурасиге и Скугас высоким содержанием гормонов(ауксина ИУК 16 мг/л , кинетина4 мг/л, аденина 40 мг/л) и инкубируют при 24-26 С под лампами дневоного света 3-4 нед. Затем для меристематизации образовавшегося каллусаего переносят в условий повышенногоосвещения (5-10 тыс.люкс и выше) на среду для регенерации (6-8 мг/лкинетина и 5-6 мг/л ИУК) либо оставляют на исходной среде. При этомстеблевые почки и проростки образуются у 15-25 полученных каллусов.Затем проростки пересаживают насреду для корнеобразования без гормонов и с пониженным содержаниемагар-агара. Регенеранты с корнями .высаживают сначала в вермикулит спитательным раствором Кнопа, а затем (через 5-7 дней) в обычныйгрунт.Получение регенерантов по данному способу требует в лучшем случае около 70 дней (всего из тысячис лишним каллусов получено 50 растений сорта Бизон 12 растений видаЬ.рвгцч 1 апцт и одно растение вида , Ь, ц 1 гвц 1 цщ) д.).чео этиолированные стеблевые почки З 5,и проростки зеленеют и начинаютбыстро расти и развиваться. Обычноу основания черешка наиболее активноразвивается 1-3 регенеранта, которыеначинают доминировать, подавляяразвитие менее развитых регенерантови неразвившихся стеблевых почек,достигая через две-три,недели 1-2 см.Размножившееся у осйования черешкарегенеранты и стеблевые почки расчленяют и рассаживают на агаризован ную, разбавленную вдвое среду Мурасиге и Скуга без гормонов для доращивания и укоренения, При тех же температурных условиях и фотопериоде выращивание наданной среде продолжают 50 еще одну-две недели до появления урегенерантов 2-,3 листьев и корней,после чего их пересаживают в почвенно-торфяную смесь с рН 5-6,5 и выращивают в обычных условиях.55В случае необходимости одновременного получения большего количестваодновозрастных регенерантов тканьсо сформировавшимися стеблевымипочками и проростками отделяют отлиста-питателя, дробят на несколькокусочков, пересаживают на исходнуюсреду для регенерации, и культивируютв укаэанных выше условиях фотопериода. При этом в течение 10-15 дн 65 объем этих кусочков и количество 10 15 20 25 30 Недостатками этого способа являются низкие продуктивность и надежность и большие временные затраты.Цель изобретения - ускорение процесса выращивания.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выращивания растений томатов 1 п ч 11 го эксплантаты культивируют непосредственно на среде для регенерации при этом культивирование проводят первые 7- 10 сут в темноте.Причем в качестве эксплантата используют листья проростков.Кроме того, среда для регенерации представляет собой модифицированную среду Мурдсиге и Скуга, которая содержит канетина 4 мг/л, а индолилуксусной кислоты 0,4 мг/л.Способ осуществляют следующим образом.Материал инкубируют 7-10 сут в полной темноте при 25-27 С и относительной влажности воздуха 95-100 в закрытых прозрачных сосудах. К концу этого периода на утопленной в среде части черешка образуется тканевой наплыв с этиолированными стеклевими почками и отдельными проростками до 2/3 мм длиной. Затем сосуды с указанными эксплантатами переводят в условия 16-часового фотопериода при освещенности 30005000 лк и той же температуре, после1076034 высаживают на вышеупомянутую средудля регенерации, фиксируя их вертикально, путем погружения срезачерешка в среду на 1,5-2 мм, Выса-,женный материал делят на две части.5 Первую часть вариант ) инкубируют вусловиях 16-часового Фотопериода,вторую (вариант П ) - первые 10 сутгинкубируют в полной темноте, азатем также переносят в условия 10 того же фотопериода. Интенсивностьрегенерации оценивают по 5-балльнойшкале. Интенсивность регенерации,бал Началорегенерации,неделя Каллуси, Ъ Инкубирование образо- вавшихся с регенерантами С первичнымдействием темноты 1-2 5,0 100 100 В условияхФотопериода 3-4 1,4 80 100 Таким образом, первоначальный темновой период инкубации способ- . ствует повышению интенсивности и З 5 сокращению сроков регенерации.П р и м е р 2. На вышеуказанную среду для регенерации высаживают листочки стерильных проростков тома, тов гибрида Мо 393 хМо 504, которые 40 фиксируют вертикально путем погруже ния среза черешка в среду на 1,5- 1 Т аблица 2 Начало регенерации,.неделя Интенсивность регенерации,бал Каллусы, Ъ Эксплантат образо- .С регеневавшихся рантами 1-2 5,0 100 100 Листочек Васечка листочка 2-4 2,8 100 100 Иэ данных табл. 2 следует, что использбвание структурно целостного листочка по сравнению с высечкой 60 листа также приводит к повышению интенсивности и сокращению сроков регенерации,П р и м е р 3. На среду регенерации высаживают листочки стерильных 5 стеблевых почек и проростков можно повторить несколько раз, после чего эксплантаты расчленяют на отдельные регенеранты и стеблевые почки и высаживают на среду для доращивания и укоренения. В этом случае добавляется определенное количество циклов, что снижает скорость получения взрослых регенерантов, Однако благодаря размножению меристематических очагов при дроблении и последующем культивировании эксплантатов на среде для регенера,ции неограниченно возрастает количество получаемых регенерантов.П р и м е р 1. Листочки стерильных проростков гибрида М 394 хм 504 Результаты, полученные в обоихвариантах опытов представлены втаЩ. 1Т аблица 1 2 мм и высечки аналогичных листочковдиаметром 0,8 мм помещая на поверхность среды. Оба варианта культивируют 10 сут в темноте, а затем переносят в условия 16-часового фотопери-ода. Интенсивность регенерации такжеоценивают в 5-балльной шкале. Результаты опыта представлены втабл. 2. проростков гибрида Мо 393 хМо 504 ипомещают на 10 сут в условия абсолютной темноты. По истечении темнового периода инкубации материалопыта делили на три части варианта).Первый вариант переносят в условияФотопериода, второй и третий оставляют еще на 10 сут в темноте, причемТираж 722 Заказ 559/2 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и оТкрытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул, Проектная, 4 у третьего на среде оставляют лишь ткань с этиолированными стеблевыми почками и проростками, образующуюся на срезе черешка, а сам листочек удаляютПо истечении указанного времени второй и третий варианты5 также переносят в условия 16-часового фотопериода. Две недели спустя по пятибалльной шкалеоценивают регенерационную способность эксплантатов .трех. вариантов. Регенерационная спо собность эксплантатов первого варианта 5, второго 3,2 и третьего 1;б балла, Таким образом, оптимальное время первичной иикубации в темноте равно приблизительно 10 сут, 15 поскольку увеличение этого времени приводит к существенному понижению регенерационной способности эксплангатов. Удаление листочка от образовавшейся на срезе черещка ткани с 2 О этиолированными стеблевымипочками и проростками приводит к еще боль-. шему понижению регенерационной способности эксплантата.П Р и м е р 4. На среду для регенерации высаживают листочки стерильных проростков томатов Мо 393 хМо 504, инкубируют 10 сут в темноте, затем переносят в условия фотопериода. Спустя две недели опыт делили на две части инварианты) В первом варианте образовавшиеся в тканевом наплыве на срезе черешка доминирующие регенеранты 1-3 шт) и стеблевые почки (7-10 ыт) отделяют, и высаживают на разбавленную вдвое агаризованную среду Мурасиге и Скуга без гормонов и продолжают инкубировать в тех же условиях. Во втором варианте от основания черешка отделяют и высаживают на разбав О ленную среду Мурасиге и Скуга только доминирующие регенеранты, а тканевый наплыв с оставшимися недоразвитыми проростками, стеблевымипочками и листочком-питателем оставляют на исходной среде и продолжаютего культивирование в условиях фотопериода. Спустя 2-3 недели от каждого подвергавшегося дроблению эксплантата получено в среднем 10 развившихся регенерантов, а на эксплантатах же второго варианта развилисьдоминирующие регенеранты (1-3 шт, всреднем на эксплантат). Затем операцию отделения регенерантов повторяют, после чего экспх;антаты продолжают культивироваться в тех же условиях до образования новых регенерантов и т д.Таким образом, в первом вариантеопыта за 30-40 дней от каждого эксплантата получено в среднем 10 регенерантов, во втором варианте за45-75 днрегенеранта,Предлагаемый способ испытан помимоукаэанных опытов на томатах сортов"Новинка Приднестровья" и "Ранний",мутантах Мо 393 и Мо 500, диких видахЬ.пгзц 1 цш и Бо 1 апцв реппе 1111,а также их гибридах с сортом "Новинка Приднестровья" и мутантом Мо 500,взятыми в качестве материальнойформы. Регенерационная способностькультурных сортов и мутантов в 1,52 раза ниже, чем дикарей и гибридов,из каждого эксплантата которых получено в среднем 10 регенерантов. Применяя два типа питательных сред, темновой первоначальный период и систему лист-питатель-ткань с регенерантами в течение 30-40 дней от каждого эксплантата получили 5-10 сформировавшихся растений-регенерантов, которые будучи высаженными в почвенно-торфяную смесь развивались здоровыми и морфологически не отличались от исходных.