Способ получения антигена для профилактики бруцеллеза

СОЮЭ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 95747 51) 4 А 61 К 39/1 ГОС ПО АРСТВЕННЫ М ИЗОБНОМИТЕТ СССР ТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(71) Научно-исследовательский орденаТрудового Красного Знамени институтэпидемиологии и микробиологии им,почетного академика Н.ф. Гамалеи(56) Вершилова П,А., Драновская Е.А.Изучение иммуногенных свойств протективного антигена (белково-полисахаридного комплекса) к экспериментальной бруцеллезной инфекции.Журнал микробиологии, эпидемиологиии иммунобиологии, 1974. Ф 7, с.92-96.(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНАДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА путемкультивирования бруцелл в питательной среде с последующим отделением,высушиванием биомассы и выделениемцелевого продукта с помощью гидролиза уксусной кислотой, о т л н ч аю щ.и й с я тем, что, с целью повышения иммуногенности и сниженияреактогенности, полученный антигенподвергают воздействию ионизирующегоизлучения в дозе 10-15 кГй,1 9574Изобретение относится к медицине,а именно к способам получения вакцинных препаратов,Известен способ получения антигенадля профилактики бруцеллеза путемкультивирования бруцелл в питательной среде с последующим отделениеми высушиванием биомасеы и выделениемцелевого йродукта, с помощью гидролиза уксусной кислотой, 10Однако вакцинный препарат, полученныйизвестным спосдбом, не обладает достаточно высокимипротективными свойствами"исрок длительностисоздаваемого.иммунйтета не превышаеттрех месяцев. Увеличение дозы препарата или его двукратное введение,какпоказали исследованияне пролонгировали иммунитет. Помимо этого в бруцеллезном антигене, представляющемсобой белково-полисахаридный комплекс(БПК), имеются примеси липополисахарида (ЛПС) - эндотоксина, дающего побочные реакции, увеличение дозы БПКпри иммунизации в связи с этим оказывает вместо защитного действия иммунодепрессивное.Целью изобретения является повышение иммуногенности и снижение реактогенности,30Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения антигенадля профилактики бруцеллеза путемкультивирования бруцелл в питательнойсреде с последующим отделением и высушиванием биомассы и выделением целевого продукта с помощью гидролизауксусной кислотой, отличительной особенностью является то, что полученныйантиген подвергают воздействию ионизирующего излучения в дозе 10-15 кГй, 40Способ осуществляют следующим образом, Из убитой ацетоном и высушенной микробной массы бруцелл (ацетонового порошка) при помощи гидролизав 0,1 н,уксусной кислоте (соотношение 1:20 вес/объем, температура 100 С,в течение 1,5 ч) получают белковополисахаридный комплекс после отделения надосадочной жидкости центрифугированием при 5000 д в течение40 мин, ее лиофилизации, последующего осаждения в 8-кратном объеме967.-ного этанола, промывания осадкаэфиром и окончательного высушиванияв вакуум-эксикаторе. Затем готовят0,2 Х-ный раствор БПК в 1 Х-ном растворе лактозы, используемой для стабилизации препарата, и разливают по 71 21-2 мл в ампулы. Содержимое ампул лиофильно высушивают, После запаивания и маркировки (а на производстве в готовой товарной упаковке) ампулы с препаратом подвергают воздействию ионизирующего излучения при 18-23 Со в дозе 10-15 кГй,1В результате такой обработки антигена, а именно лиофилизации его в стабилизирующем растворе, запаивания ампул с последующим воздействием ионизирующего излучения, получают вакцинный препарат с более длительным протективным эффектом (в 2 раза), он абсолютно стерилен и лишен примеси ЛПС - эндотоксина, что делает вак цину ареактогенной.П р и м е р 1. При выборе эффективной зоны ионизирующего излучениябылиизучены иммуногенные свойствапрепаратов, облученных в дозе 10 и20 кГй. В результате исследованияустановлено, что доза 10 кГй не снимает иммуногенных свойств БПК прииспытании оптимальной дозы препарата (600 мкг). В группе животных,вакцинированных препаратом, облученным дозой 10 кГй, 803 морских свинокбыли иммунны через 1 месяц послевакцинации и последующего заражениявирулентной культурой бруцелл в дозе20 микробных клеток, У животных,вакцинированных БПК, облученным дозой20 кГй, иммунитет против бруцеллезнойинфекции зарегистрирован лишь у 507 морских свинок. Серологические исследования с помощью реакции агглютигации (РА), пассивной гемагглютинации (РПГА) и пробы Кумбса - неполные антитела (РК) не выявили существенных различий в двух группах животных. Полученные данные позволяют рекомендовать дозу излучения порядка 10 кГй,П р и м е р 2. Была определена длительность защитного действия антигена (БПК), облученного дозой 10 кГй, в сравнении с необлученным препаратом. Введение облученного дозой 10 кГй БПК создает напряженный иммунитет у 607. экспериментальныхживотных в отдаленный срок (6 месяцев после вакцинации), В группе, вак-, цинированной необлученным БПК, уже к 4 месяцам иммунных животных было 207., а через 6 месяцев отмечалсяРедактор О. Кузнецова Техред Н,Бонкало КорректорЛ. Патай Заказ 2331/3 Тираж 660 . ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035 Москва, Ж, Раушская наб.,д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4. 3 9574полный прорыв иммунитета. Результатыисследований позволили сделать однозначный вывод о пролонгировании протективного эффекта бруцеллезной вакцины, подвергнутой обработке ионизирующим излучением в дозе 10 кГй.Все образцы вакцины после-облучения были проверены на стерильность,безвредность (на белых мышах) и апирогенность (на кроликах),1 О 71 4Антиген для профилактики бруцеллеза, полученный предложенным способом, применен на 20 добровольцах и на 145 человеках в очагах бруцеллеза.При этом установлено,что полученный антиген имеет повышенную нммуногенность, сниженную реактогенность, увеличенный срок годности вакцины (до 2 лет), безвреден и стерилен.