Способ получения средства антипротеиназного действия

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН П 9) ПП К 37/04 НИ Т К АВТОРСКОМ надсоляную Е ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО делАм изОБРетений и ОтнРыти ОПИСАНИЕ ИЗОБ(71) Центральный ордена Ленина и ор"дена Трудового Красного Знаменинаучно-исследовательский институтгематологии и переЛивания кровии Ордена Ленина и ордена ТрудовогоКрасного Знамени научно-исследовательский институт скорой помощиим. Н.В. Склифосовского(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВААНТИПРОТЕИНАЭНОГО ДЕЙСТВИЯ путемфракционирования плазьи крови этанолом,выделения фракции 111 по Кону,добавления полиэтилен гликоля, переосаждения этанолом, центрифугирования осадка, растворения и стерилизации целевого продукта, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюпридания средству поливалентногодействия, добавляют к фракции 111по Кону 14-18-ный раствор полиэтиленгликоля при рН 7,5-8,9, полученную надосадочную жидкость обрабатывают равным объемом 50-56 этанола,затем удаляют осадок и косадочной жидкости добавляютйислоту до рН 5,9-6,3.Изобретение относится к области медицины, а именно гематологии и касается получения лечебного средства ингибитора протеиназ.Известен способ получения средства антипротеиназного действия путем фракционирования плазмы крови этанолом, выделения фракции 111 по Кону, добавления полиэтиленгликоля, переосаждения этанолом, центрифугирования осадка, растворения и стерилизации целевого продукта 1).Однако средство полученное известным способом обладает узким спектром антипротеиназного действия, то есть способно подавлять активность лишь одной или двух протеиназ.Целью изобретения является придание средству поливалентного действия,Это достигается тем, что при осуществлении способа получения средства антипротеиназного действия пу тем .фракционирования плазмы крови этанолом, выделения фракции 111 по Кону, добавления полизтиленгликоля, переосаждения этанолом, центрифугирования осадка, растворения и стери 25 лизации целевого продукта отличительной особенностью является то, что добавляют к фракции 111 по Кону14-18-ный раствор полиэтиленгликоля прМ рН 7,5 - 8,9, полученную надосадочную жидкость обрабатывают равным объемом 50-56 этанола, затем удаляют осадок и к надосадочной жидкости добавляют соляную кислоту до рН 5,9-6,3.Предлагаемый способ осуществляют следующим образомПлазму крови человека Фракционируют с помощью этанола, выделенный осадок 111 Кона замораживают и сохраняют при температуре -10 4020 СПри фракционировании осадока 111 Кона его суспендируют в воде . для экстракции с(2 - макроглобулина и балластные белки отделяют центрифугированием при комнатной темпера туре. К полученному центрифугату при рН 8,7 добавляют равный объем 14 раствора полиэтиленгликоля с мол,мас. 6000 и оставляют на 2-4 ч при 4-6 С. Образовавшийся осадоколипопротеидов и других балластных белков отделяют центрифугированием( а к центрифугату при температуре 0 С добавляют охлажденный до -10 С этиловый спирт до конечной концентрации 26 об. и оставляют смесь на 10-16 ч при (-6 )- (-9)ОС Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием при -б С, в центрифугате устанавли- вают рН 6,1 и оставляют на 12-16 ч. Осадокотделяют центрифугированием б 0опри -б С и растворяют в физиологическом растворе. Полученный раствор представляет собой концентрат с(,-макроглобулина, содержание которого составляет 60-80 от общего белка. 65 П р и м е р. Плазму донорской крови подвергают фракционированию спомощью этанола, полученный осадокфракции 111 Кона замораживает при( - 10 ) - (-20 ОС ), 1 кг замороженногоосадка фракции 111 Кона растворяютв 5 л дистиллированной воды и осадок отделяют центрифугированиемпри 2500-3000 об/мин в течение 20 минпри комнатной температуре. В надосадочной жидкости (4200-4500 мл ) с помошью 0,5 н. раствора ЙаОН устанавливают рН 7,5-8,9 (предпочтительно8,6-8,7 )и, перемешивая, постепеннодобавляют равный объем (4200-4500 мл,)14 Ъ-ного раствора полиэтиленгликоля сс мол.мас. 6000, приготовленный на0,85 ИаС 6. Смесь оставляют на 2-4 чпри температуре 4-6 С. Осадок отдеоляют центрифугированием при 25003000 об/мин в течение 20 мин при4-6 С и отбрасывают. Надосадочнуюожидкость (7500-7800 мл ) охлаждаютдо 0 - (-5 дС) и постепенно при этойтемпературе добавляют при перемешивании равный объем (7500-7800 мл )предварительно охлажденного до -10 С53 - этанола. Смесь перемешивают ипостепенно в.течение 2-3 ч снижаюттемпературу до (-б ) - (-9 С ) и оставляют на 10-16 ч прй этой температуре; Полученный осадок отделяютцентрифугированием, а в центрифугатепосредством 0,1 и раствора НС 2 до-.водят рН до 5,9-6,3 (предпочтительно6,1-6,3 и оставляют на 12-16 ч притемпературе (-б ) - (-9 С ). Осадокотделяют центрифугированием при4000-6000 об/мин в течение 25-30 минпри температуре (-б ) - (-9 ОС ). Полученный осадок растворяют в 0,85МаС 1, подвергают стерилизующей Фильтрации.Конечный продукт представляет собой прозрачный раствор белков, обогащенный в 7-15 раз 02-макроглобулином крови человека. Концентрацияс(2 -макроглобулина в конечном стерильном растворе составляет 12002500 мг.Ъ.Выход препарата составляет 1-2от общего белка плазмы крови человека. Средство обладает выраженнымантипротеиназным поливалентным действием. Концентрат о 2 -макроглобули"на подавляет активность многих протеолитических ферментов животногопроисхождения: трипсина (4 мЕД/мг ),фибринолизина (15 мЕД/мг ), плазмина ( 10 мЕД/мг ), химотрипсина( 7 мЕД/мг ) калликреина - 1 мЕД препарата эквивалейта 5 калликреинингибиторным единицам тразиллола , растительного происхождения: папаина(3 мЕД/мг ) и других) бактериального происхождения (ЯцЬ 111 орерС 1 дазе А, тип 7111),Препарат хорошо растворим в Физиологическом растворе до концентра938447 Составитель С. МалютинаРедактор Л. Письман Техред С,Мигунова Корректор В. Бутяга Заказ 6323/1 Тираж 713 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССР .по делам изобретений и открытий113035, Москва, Х, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ции 70-90 мг/мп, не теряет активности в течение 1-1,5 лет при хранении в растворе при температуре 4-8 С.Данный способ позволяет на уже имеющихся производственных мощностях, в едином технологическом процес 5 се, без дополнительных затрат получать лечебное средство, обладающее поливалентным антипротеиназным действием.10Результаты биологического изучения и исследования 1 п у 11 го позволяют ожидать положительный эффект в лечебном действии предлагаемого антипротеинаэного средства, обусловленного его поливалентными свойст"вами. При введении больным с деструктивными заболеваниями (панкреатит,ожоговая травма, зкзогенные отравления ) средство коррегирует нарушения в системе гомеостаза, чтобудет усиливать и ускорять лечебныйэффект. Кроме того, предлагаемоеантипротеиназное средство способноподавлять активность многих бакте-.":риальных протеолитических ферментов, что обусловит его эффективность при лечении перитонита, сепсиса и других воспалительных заболеваний в комплексе общей антимикроб:ной терапии.